Medición simultánea de calcio mitocondrial y mitocondrial potencial de membrana en células vivas por microscopía fluorescente

El objetivo general de este procedimiento es proporcionar un método simple para medir simultáneamente la absorción de calcio mitocondrial y el potencial de membrana mitocondrial en células vivas utilizando microscopía confocal. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo mitocondrial, como cómo las mitocondrias actúan como reservas locales de calcio para regular estrictamente la concentración de calcio intracelular. La principal ventaja de esta técnica es que tanto el calcio mitocondrial como el potencial de membrana mitocondrial se pueden medir específicamente de forma simultánea en células vivas sin necesidad de manipulación genética.

Aunque este método puede proporcionar información sobre la regulación del calcio en la patología de la enfermedad mitocondrial, también se puede utilizar para estudiar otras afecciones degenerativas más recientes, cuando la regulación del calcio urinario es crucial. En este procedimiento, cultive las células en placas de cultivo celular de diez centímetros, o matraces de 75 centímetros cuadrados, en medios de cultivo a 37 grados centígrados durante 24 horas. Para recolectar las células, retire los medios por aspiración y lave las células con cinco mililitros de PBS.