Ensayo de absorción de calcio mitocondrial: un método basado en lectura de placas para medir la absorción de calcio en mitocondrias aisladas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:13 min. • July 8th, 2025
Las mitocondrias absorben el calcio citosólico ya que es esencial para su correcto funcionamiento.
La entrada excesiva de calcio en la matriz mitocondrial (sobrecarga de calcio mitocondrial) desencadena la apertura de un canal de membrana interna, el poro de transición de permeabilidad mitocondrial o MPTP. El poro abierto permite un aumento del flujo de calcio de las mitocondrias, causando disfunción mitocondrial.
Para medir la absorción de calcio mitocondrial, comience con una placa de pocillos múltiples que contenga mitocondrias aisladas suspendidas en un tampón adecuado. Complemente el pozo con piruvato y malato, que son sustratos productores de ATP. Mezclar el contenido del pozo e incubar.
Durante la incubación, el piruvato y el malato se convierten en ATP, energizando las mitocondrias. Agregue una solución que contenga moléculas de colorante fluorescente sensibles al calcio e impermeables a la membrana mitocondrial. Dispense el tampón que contiene calcio a las mitocondrias energizadas.
Controle la fluorescencia de calcio del tinte a medida que las moléculas de tinte se unen al calcio libre en el tampón.
Agregue más iones de calcio para iniciar la afluencia de calcio mitocondri
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