División ingeniería-TET2 enzima ADN químico-inducible Hydroxymethylation y remodelación epigenéticos

El objetivo general de esta serie de experimentos es introducir una enzima TET2 dividida diseñada llamada CiDER en células de mamíferos para la modificación inducible del ADN, como la hidroximetilación, así como la remodelación epigenética. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la epigenética, tales como: La principal ventaja de esta técnica es que la enzima TET2 dividida diseñada permite el control temporal de la oxidación de la 5-metilcitosina y la posterior remodelación de los estados epigenéticos en células de mamíferos con aditivos químicos. Para comenzar este procedimiento, cultive una línea celular adherente en DMEM suplementada con FBS inactivado por calor al 10%, así como 100 unidades por mililitro de penicilina y estreptomicina.

Incubar las células a 37 grados centígrados con 5% de CO2. Transfectar las células con el plásmido CiDER como se describe en el protocolo de texto. Luego incube las células durante la noche a 37 grados centígrados.