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DOI: 10.3791/57149-v
Akihiro Isomura1,2, Ryoichiro Kageyama1,3,4,5
1Institute for Frontier Life and Medical Sciences,Kyoto University, 2Japan Science and Technology Agency,PRESTO, 3Institute for Integrated Cell-Material Sciences,Kyoto University, 4Graduate School of Medicine,Kyoto University, 5Graduate School of Biostudies,Kyoto University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for analyzing cell-to-cell transfer of oscillatory information using optogenetic control and live monitoring of gene expression. The method allows for precise control and observation of gene expression dynamics, providing insights into cellular communication.
Aquí, presentamos un protocolo para analizar la transferencia de célula a célula de información oscilatoria por control optogenetic y control de la expresión génica en vivo. Este enfoque proporciona una plataforma única para probar una significación funcional de los programas de dinámica gene expresión en sistemas multicelulares.
El objetivo general de este experimento es observar la transferencia de información oscilatoria de célula a célula mediante el control optogenético y el monitoreo en vivo de la expresión génica. Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre cómo las células se comunican entre sí a través de la vía de señalización Notch, en particular sobre cómo las células transmiten la información oscilatoria entre sí. La principal ventaja de esta técnica es que podemos controlar y monitorizar la dinámica de la expresión génica con una precisión muy alta.
La demostración del procedimiento estará a cargo de Akihiro Isomura, un investigador de mi laboratorio que desarrolló esta nueva tecnología. Para transfectar vectores plásmidos de módulos optogenéticos basados en Tol2 junto con el vector de expresión de la transposasa en células C2C12, primero se cuentan las células tripsinizadas con un contador de células. Coloque 50.000 células C2C12 por pocillo en una placa de 12 pocillos un día antes de la transfección.
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