Name: Microdisección de segmentos de tejido Renal primaria y la incorporación con la tecnología de construcción de andamio-libre nuevo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Aprenda a realizar microdisección de riñón murino para aislar segmentos cortico-medulares con arquitectura renal intacta. Esta técnica permite mantener la viabilidad tisular para aplicaciones de ingeniería de tejidos renales.

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NIH Grant institucional formación Postdoctoral, NIH-HL-007260

Todos los procedimientos quirúrgicos animal que se describen a continuación fueron aprobados por el cuidado de Animal institucional y Comité uso (IACUC) en la Universidad médica de Carolina del sur antes de alguna cirugía animal o uso de cualquier tejido animal.
1. murina nefrectomía
<ol><li>Don una máscara quirúrgica y el casquillo bouffant para minimizar el riesgo de contaminación. Mantener la esterilidad durante la preparación del área quirúrgica.<ol>
<li>Coloque cortinas quirúrgicas no fenestrados en la mesa de operaciones.</li>
		<li>Abra el paquete de instrumentos esterilizados en las cortinas estériles. Los instrumentos requeridos para la nefrectomía incluyen 3 pinzas hemostáticas pequeñas, finas pinzas con dientes, pinzas finas sin dientes y tijera de iris recta.</li>
		<li>Coloque otro no-quirúrgico fenestrado en el centro de la mesa de operaciones.</li>
		<li>Preparar 5 mL de Dulbecco fosfato tampón salino (DPBS) con calcio y magnesio, suplementado con 1% de penicilina/estreptomicina en un tubo cónico estéril de 15 mL. Colocar esta solución en el hielo junto a la mesa de operaciones.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Obtener un ratón C57BL/6 de 8-12 semanas de edad (hombre o mujer) del complejo de alojamiento de los animales.</li>
	<li>Coloque el mouse dentro de una cámara de inducción de la anestesia e inducir con 3.5% inhalado isoflurano. Colocar un cono de nariz del ratón, uso de isoflurano 2% para anestesia de mantenimiento.<ol>
<li>Monitor para la adecuada profundidad de la anestesia periódicamente durante el procedimiento quirúrgico mediante la evaluación para el reflejo pedal (pellizco firme del dedo del pie).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Quitar todo el pelo del torso ventral con crema depilatoria. Lavar esta zona con agua destilada para asegurarse de que haber eliminado todo el pelo del abdomen.</li>
	<li>Transferir el ratón a la mesa de operaciones estéril en posición supina en la superior no-fenestrado. Corte un hueco de 2 x 2 cm2 en el paño a cubrir el abdomen de ratón.</li>
	<li>Aplicar povidona-yodo seguida de etanol al 70% en el abdomen utilizando bolas de gasa o algodón estériles.</li>
	<li>Con unas pinzas finas con los dientes y iris tijeras, hacer una incisión en la piel abdominal vertical 3-4 cm paralelo a la línea media, 0,5 cm a la izquierda de línea media Nota: Si intenta quitar el riñón derecho, se trata de una incisión de 0,5 cm a la derecha de la línea media.<ol>
<li>Sujete el peritoneo con pinza fina sin dientes y haga una incisión con tijeras de iris para entrar en la cavidad abdominal. Pinzas hemostáticas se aplican a los bordes laterales superiores e inferiores de la piel y el peritoneo lateralmente la tensión y mejorar la exposición.</li>
		<li>Desplaza el contenido intestinal delicadamente hacia el lado derecho del abdomen para exponer el riñón izquierdo. Coloque suavemente la tracción en el riñón para elevarlo fuera del abdomen.</li>
		<li>Coloque una pinza hemostática en el hilum del riñón izquierdo. Utilice tijeras de iris a transectos el uréter y los vasos renales.</li>
		<li>Coloque el riñón izquierdo en el 1% solución de DPBS de penicilina/estreptomicina en el hielo.</li>
		<li>La transferencia al tubo que contiene el riñón a la campana de cultivo estériles para tejidos. Traslado del riñón del tubo cónico de 15 mL a un plato de petri de 60 mm (figura 1). Enjuague dos veces con 5 mL DPBS calcio y magnesio. Mantener el riñón suspendido en 5 mL DPBS en el plato de 60 milímetros.<ol>
<li>Preparar un plato de petri 60 mm adicional con 5 mL DPBS para ser utilizado durante el protocolo del microdissection.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Eutanasia el ratón por toracotomía y exsanguination tras la consecución del riñón, según un protocolo animal IACUC aprobado.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. microdisección de riñón murino para el aislamiento del segmento Renal
<ol><li>Seguir utilizando una técnica estéril para esta parte del Protocolo, incluyendo guantes estériles, mascarilla quirúrgica y cardado para minimizar el riesgo de contaminación.<ol>
<li>Lugar estéril cortinas en la plataforma de microscopio estéreo, así como las áreas a la izquierda y derecha del microscopio para tener un campo estéril para los instrumentos. Coloque hojas adhesivas de plástico en las perillas de enfoque del microscopio y rocíe con etanol al 70%. Encender el iluminador doble cuello de cisne a la luz de la etapa.</li>
		<li>Abierto los instrumentos esterilizados (finas pinzas sin dientes, mango de bisturí, hoja de bisturí #15, dos pinzas hemostáticas rectas, dos 30½ medidor de agujas hollow-agujeree) sobre cortinas estériles. Lugar #15 hoja sobre el bisturí Mango ahora y colocar una pinza hemostática para cada adaptador/eje de la aguja para crear instrumentos de disección de la aguja para uso posterior, como se muestra en la figura 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mueva las cajas Petri 60 mm, con el riñón en DPBS y la DPBS única, de la campana de cultivo de tejidos en el área de microscopio.<ol>
<li>Coloque el plato de petri 60 mm bajo el objetivo y retire la tapa para exponer el riñón. Deja el plato que contiene la DPBS al lado en el campo estéril para su uso posterior.</li>
		<li>Mueva el plato de manera que sólo la superficie anterior o posterior del riñón está a la vista (es decir, la cara plana grande del riñón, con la otra cara toque el fondo del plato). Zoom x 4 3.2 para esta parte del procedimiento. La mano no dominante, utilizar finas pinzas sin dientes para perforar y el riñón del perno contra el plato cerca de los polos superiores e inferiores del riñón.</li>
		<li>Mantenga la mano no dominante en el lugar para fijar el riñón. Con la mano dominante, use la hoja #15 para quitar la capa capsular fibrosa translúcida de la superficie expuesta. Afeitarse el 0,5 mm más superficial de la superficie expuesta del riñón para eliminar el resto de la cápsula.</li>
		<li>Use la hoja #15 para disecar una pirámide invertida de tejido de la zona de decapsulated, aproximadamente3 de 2 mm de tamaño. Recuperar el plato de 60 mm que contienen sólo DPBS y colocar la pirámide de tejido en el plato limpio. Deseche el resto del riñón.</li>
		<li>Disminución aumento a 1.5-2.0 X para el resto de la disección. Utilizando dos instrumentos de aguja pinza hemostática como instrumentos de corte, cortar el fragmento de tejido en partes progresivamente más pequeñas hasta que los segmentos de tejido están menor o igual al diámetro de las puntas de aguja. Una de 2 mm de tejido renal3 tamaño producirá más de 50 segmentos una vez completamente disecados.</li>
		<li>Mover el plato de 60 mm con segmentos renales a la campana de cultivo de tejidos. Quite la DPBS con pipeta de 1000 μl. Añadir 5 mL DMEM, suplementado con 10% suero bovino Fetal (FBS) y 1% de penicilina/estreptomicina.</li>
		<li>Cultura durante 3 días a 37 ° C en una incubadora o implante en construcciones celulares inmediatamente.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. renal segmento celular construcción fabricación
<ol><li>Fibroblastos dérmicos humanos normales cultura (NHDF) y adiposas microvasculares células endoteliales humanas (HAMEC) durante varias semanas obtener 7,2 x 105 fibroblastos y 1,8 x 105 células endoteliales por construcción deseada. En la campana de cultivo de tejidos, semilla de la proporción adecuada de los fibroblastos a las células endoteliales (4:1) en los pocillos en forma en moldes de agarosa para formar libre andamio pre-vasculares endoteliales fibroblastos construcciones (espec.) como se describió anteriormente de Czajka et al. 19.</li>
	<li>Obtener una pinza esterilizada, aguja 30½ y una espátula estéril con punta plana.<ol>
<li>Retirar la mayoría de los medios de comunicación de la placa de 60 mm que contienen segmentos renales, teniendo cuidado de no aspirar y retirar los segmentos renales.</li>
		<li>Equiparse con lupas quirúrgicas visualizar la implantación de los segmentos.</li>
		<li>Raspar el extremo de la espátula suavemente a lo largo de la parte inferior del plato 60 mm para obtener segmentos de 10-15, repartidos uniformemente a lo largo de la punta de la espátula. Coloque la punta de la espátula lo más cerca posible al borde del pozo donde fue sembrada la especificación.</li>
		<li>Utilizar un instrumento de aguja pinza-30½ G en la otra mano mover cada segmento individual de la punta de la espátula en el borde del pozo. Mueva suavemente cada segmento hacia abajo en el bien con la punta de la aguja hasta que ligeramente sumergida en la suspensión celular previamente sembrada.</li>
		<li>Segmento renal-SPEC en 2 la cultura: relación 1:1 de medio de la mutilación genital femenina-2/EGM-2/DMEM (volumen de 2.5 mL total). Cambiar el medio de cultivo cada 24 h durante 3 días. Eliminar las construcciones de los moldes a las 72 h y fijar o flash-freeze para el procesamiento.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Jha, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+kidney+disease%3A+global+dimension+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Chronic kidney disease: global dimension and perspectives.</a> Lancet. 382 (9888), London, England. 260-272 (2013).</li>
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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Métodos utilizados para tejido renal vivo constructos varían ampliamente en relación con el tipo de células y biomateriales utilizados y en muchos casos, son obsoletos o no bien caracterizado en la literatura7. Mientras que muchos utilizan enfoques de la célula de vástago o recapitulando los componentes individuales de la arquitectura renal aislada, es la posibilidad de recrear artificialmente un órgano entero con más de 26 tipos diferentes de célula diferenciada de suspensiones celulares abrumado...

Enfermedad renal crónica (ERC) es una de la actual salud pública desafíos en todo el mundo1. La prevalencia de ERC en Estados Unidos es más 14% de la población total, con más de 600.000 estadounidenses sufren de la forma más grave, la etapa del extremo enfermedad renal (terminal ERT)2. Las actuales opciones de tratamiento disponibles para aquellos con ERT incluyen trasplante de la diálisis y los riñones. Aunque aproximadamente 25.000 pacientes se someten a trasplante renal cada año, un número significativo de pacientes se agrega anualmente llevando a una gran disparidad entre aquellos en espera de un órgano vital y ésos receptores de trasplante3. Además de sus graves efectos negativos sobre la longevidad y calidad de vida, la diálisis se asocia con una sorprendente carga financiera. En 2014, Medicare pagada los reclamos sumaron sobre $ 30 billones para los pacientes ESRD2. Con un suministro limitado de órgano y no tendencia bajista aparente en pacientes que requieren diálisis, esfuerzos de investigación destinados a determinar soluciones alternativas a la diálisis y el trasplante son siempre importantes. Incluso un relativamente breve retraso en la necesidad de diálisis aumenta número de un paciente de años de vida ajustados por calidad y productividad substancialmente y aplazamiento de gastos relacionados con la diálisis4,5,6.
Soluciones para la pérdida de tejido funcional, como en ERT, se están estudiando actualmente en la ingeniería de tejidos y laboratorios de la medicina regenerativa, con enfoques muy variados desde organoide basadas en andamios fabricación órgano entero usando ingeniería decellularized estructuras del órgano para implantación celular7,8,9,10,11. Recapitulando complejas estructuras renales de los riñones marginales o desechados sólo parcialmente ha sido investigada. De hecho, casi 20% de riñones para trasplante son descartado por diversas razones12,13. El tejido renal funcional de estos supuestos injertos podría utilizado e incorporado en uno o varios constructos tejido-dirigida. Estudios previos han demostrado la viabilidad de trabajar con estos órganos desechados, utilizando riñones de la matriz extracelular de tejidos con fines de ingeniería14,15. Sin embargo, pocos han utilizado primario del tejido nephronal de los riñones sanos para ingeniería de tejidos con fines16,17,18.
Un método previamente descrito por Kim et al. implica aislamiento de "segmentos" renales de riñones de ratas sanas, que luego fueron sembrados en los andamios (PGA) ácidos poliglicólico para la construcción fabricación16. Sin embargo, poca información se da con respecto a la metodología de disección exacta y se obtuvieron segmentos de una combinación de filtración y picar fino. Se describe una modificación de este protocolo, que produce igualmente discretos segmentos renales con arquitectura nephronal intacta, pero en cambio se basa en técnicas de microdisección. Nefrectomías se realizan en la vida de ratones adultos, después de que los riñones se transfieren al microscopio de disección donde se quita la cápsula renal, y además se diseca el tejido. Agujas 30½ G pequeño tamaño se utilizan como instrumentos de corte y también como guías de ayuda en la disección, como la aguja diámetro es igual al diámetro del objetivo de los segmentos renales. Los segmentos aislados, en este caso murinos, renales mantienen viabilidad en cultivo e incorporan con construcciones celular libre andamio endoteliales fibroblastos19. Estas construcciones se han utilizado anteriormente para otros órganos, incluyendo páncreas bio-artificial20.

<table><tbody><tr><td>Bus de Campaña Estéril No Fenestrado</td><td>Desechables para Hospital</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Fenestrado Estéril Estéril Bus</td><td>Desechables</td><td>para Hospital 697</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas para mosquitos Halsted 5 Miltex Curvo</td><td>Mil-7-4</td><td>"Hemostático" en manuscrito</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de Graefe Extrafinas, Curvadas con dientes</td><td>Fine Science Tools</td><td>11155-10</td><td>Pinzas finas con dientes</td></tr><tr><td>Pinzas de Graefe Extra Finas, Dentadas (sin dientes)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11152-10</td><td>Pinzas finas sin dientes</td></tr><tr><td>Tijeras finas - Carburo de tungsteno</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Tijeras Iris</td></tr><tr><td>Betadine Surgical Scrub con bomba, Povidona yodada 7.5%</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla de gasa de algodón estéril (4" x 4")</td><td>Fisher Healthcare</td><td>22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>Solución tamponada de fosfato de Dulbecco</td><td>Corning</td><td>21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>Solución de penicilina/estreptomicina, 100X</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Fabricante: Piramal, Distribuidor: McKesson</td><td>2254845</td><td></td></tr><tr><td>Nair Depilador</td><td>Nair</td><td>22600-23307</td><td>Crema Depilatoria en texto</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2705</td><td>Diluido al 70% Solución de Etanol</td></tr><tr><td>BioLite 60mm Plato de cultivo de tejidos</td><td>Themo-Scientific</td><td></td> 130181 <td></td></tr><tr><td>Press'n Seal</td><td>Glad</td><td>12587-70441</td><td>Aplicado al estereoscopio</td></tr><tr><td>SZX16 Microscopio estereoscópico</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td></td></tr><tr><td>Iluminador de fibra óptica</td><td>Cole Parmer</td><td>41720-20</td><td></td></tr><tr><td>Tubo autoportante de doble luz, 23" L Cuello de cisne</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-41720-60</td><td></td></tr><tr><td>Mango de bisturí #3</td><td>Miltex</td><td>Mil-4-7</td><td></td></tr><tr><td>Hoja estéril de acero al carbono con parte posterior acanalada, tamaño de hoja 15</td><td>Aguja Bard-Parker</td><td>371115</td><td></td></tr><tr><td>calibre 31 1/2</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-826F</td><td>Becton Dickinson 305106</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td><td>Corning</td><td>10-017-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Select 100% Suero Bovino</td><td>Atlas Biologicals</td><td>FS-0500-AD</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblastos Dérmicos Humanos Normales</td><td>Lonza</td><td>CC-2511</td><td></td></tr><tr><td>Células Endoteliales Microvasculares Adiposas Humanas</td><td>Sciencell Research Laboratories</td><td>7200</td><td></td></tr><tr><td>Lupas quirúrgicas (2.5x)</td><td>Orascoptic(</td><td>N/A) Pedido</td><td></td>personalizado</tr><tr><td>FGM-2 (Medio basal de fibroblastos con FGM-2 SingleQuots agregados)</td><td>Lonza</td><td>CC-3131, CC-4126</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 (Medio basal endotelial con EGM-2 SingleQuots agregados)</td><td>Lonza</td><td>CC-3156, CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>Kit de viabilidad/citotoxicidad vivo/muerto para células de mamíferos</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-citoqueratina-18</td><td>Abcam</td><td>ab668</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-ratón de cabra, Alexa Fluor 633</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21052</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-conejo de cabra, Alexa Fluor 546</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-factor de Von Willebrand</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina, isotiocianato de fluoresceína Conjugado</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9771-50MG</td><td></td></tr><tr><td>Hoescht 33342</td><td>BD Pharmingen</td><td>561908</td><td></td></tr><tr><td>Antecedentes Buster</td><td>Innovex Biosciences</td><td>NB306</td><td></td></tr></tbody></table>

microdisección de segmentos de tejido renal primaria y la incorporación con la tecnología de construcción de andamio-libre nuevo

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Trasplante de riñón es ahora una terapia convencional para la insuficiencia renal. Sin embargo, con aproximadamente 96.000 personas en la lista de espera y sólo una cuarta parte de estos pacientes conseguir trasplante, hay una extrema necesidad de alternativas para aquellas personas con falta de órganos. Para disminuir las consecuencias perjudiciales de diálisis junto con los costos en general profesional de la salud que ha incurrido, investigación activa está trabajando en la búsqueda de soluciones alternativas al trasplante de órganos. Construcciones celulares renales tejido-dirigida implantables son uno de los enfoques viable para reemplazar la funcionalidad renal perdida. Aquí, se describe por primera vez, es la microdisección de riñones murinos para el aislamiento de vivir corticomedullary segmentos renales. Estos segmentos son capaces de rápida incorporación dentro de construcciones de andamios gratis endoteliales fibroblastos que puede permitir la conexión rápida con vasculatura anfitrión una vez implantado. Riñones de ratón adulto se obtienen de donantes vivos, seguidos por el microdissection del Estereoscopio para obtener segmentos renales 200-300 μm de diámetro. Múltiples construcciones renales fueron fabricadas con segmentos renales primarios de único riñón. Este método muestra un procedimiento que podría salvar tejido renal funcional de órganos que de lo contrario serían descartados.

El protocolo descrito produce aproximadamente 50 segmentos renales por sección de3 piramidal de 2 mm de tejido renal. Los segmentos renales que han sido procesados y reflejada tienen componentes glomerulares y tubulares en diferentes proporciones (ver figura 2). Los segmentos intactos fueron sometidos a un análisis para determinar la viabilidad de diferentes segmentos una vez cada 24 h durante tres días. Verde fluorescente calceína-AM está presente...

Ingeniería de tejido renales construcciones proporcionan una solución para la escasez de órganos y los efectos deletéreos de la diálisis. Aquí, describimos un protocolo micro disecar riñones murinos para el aislamiento de segmentos córtico-medular. Estos segmentos están implantados en construcciones celulares libre de andamio, formando organoides renal.

Microdisección de segmentos de tejido Renal primaria y la incorporación con la tecnología de construcción de andamio-libre nuevo

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

El objetivo general de este procedimiento de disección microscópica es aislar segmentos discretos de tejido renal vivo con arquitectura renal intacta para aplicaciones de ingeniería de tejidos. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la ingeniería de tejidos, como por ejemplo, ¿se pueden recolectar estérilmente segmentos enteros de tejido de órgano primario aislado y mantenerse vivos en cultivo? La principal ventaja de esta técnica es que los segmentos contienen una arquitectura renal intacta, en lugar de utilizar líneas celulares para recrear un órgano complejo con más de 26 tipos de células diferentes.Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el tratamiento de la enfermedad renal en etapa terminal, ya que estas construcciones mejorarán la filtración y pueden ayudar a los pacientes a mantenerse alejados de la diálisis. Durante la cirugía, use equipo quirúrgico adecuado, incluida una mascarilla y una gorra, para minimizar el riesgo de contaminación. Del mismo modo, haga todo lo posible para mantener la esterilidad en todo momento.Comience los preparativos cubriendo la mesa de operaciones. A continuación, abra el paquete de instrumentos esteril

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Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Este protocolo describe la descelularización de riñones de rata Sprague Dawley mediante perfusión anterógrada de detergentes a través de la vasculatura, produciendo matrices extracelulares renales acelulares que sirven como molde para la repoblación con células epiteliales renales humanas. La recelularización y el uso del ensayo de perfusión de resazurina para monitorear el crecimiento se realizan dentro de biorreactores de perfusión especialmente diseñados.

La repoblación de las células epiteliales y Preparación de roedores matriz extracelular andamios para el Desarrollo del tejido renal

Se desarrolló una innovadora técnica de biofabricación para diseñar construcciones tridimensionales que se asemejan a las características arquitectónicas, componentes y propiedades mecánicas del tejido in vivo. Esta técnica presenta un material de sacrificio recientemente desarrollado, el caucho BSA, que transfiere características espaciales detalladas, reproduciendo las arquitecturas in vivo de una amplia variedad de tejidos.

Tridimensional Tecnología Biomimética: Novel biorubber Crea Definido micro y macro escala Arquitecturas de colágeno hidrogeles

Este trabajo describe dos métodos para estudiar el desarrollo de órganos, una mejor configuración de xenotrasplante en la membrana corioalantoica (CAM) a partir de embriones aviares que permite la vascularización de órganos embrionarios y organoides cultivados y una nueva dirección z fija método de cultivo de órganos con condiciones experimentales modificadas que permite imágenes confocales de lapso de tiempo de alta resolución.

Optimización del cultivo organoide renal y organatípico para la vascularización, el desarrollo extendido y la imagen mejorada de microscopía

Describimos un protocolo para la microdisección láser de subsegmentos del riñón humano, incluyendo el glomérulo, tubérculo proximal, extremidad ascendente gruesa, conducto coleccionista e intersticio. A continuación, el ARN se aísla de los compartimentos obtenidos y se lleva a cabo la secuenciación de ARN para determinar los cambios en la firma transcriptómica dentro de cada subsegmento.

Aplicación de microdisección láser para descubrir transcriptómica regional en tejido renal humano

Este protocolo introduce un método para desarrollar un andamio usando riñones de rata descelularizados. El protocolo incluye procesos de descelularización y recelularización para confirmar la biodisponibilidad. La descelularización se realiza utilizando Tritón X-100 y dodecil sulfato de sodio.

Preparación De Andamios Renales Descelularizados En Ratas

Este artículo describe un protocolo para agregar y encapsular células del bazo dentro de una matriz semisólida de membrana basal. Las construcciones de matriz de membrana basal se pueden utilizar en cultivos tridimensionales para estudiar el desarrollo de organoides, o para estudios de trasplante in vivo y regeneración de tejidos.

Agregación celular encapsulada en matriz de membrana basal para investigar la formación de tejido del bazo murino

Los implantes de ingeniería tisular para cirugía reconstructiva rara vez progresan más allá de los ensayos preclínicos debido al laborioso cultivo ex vivo , que incluye componentes de andamios complejos y costosos. Aquí, presentamos un procedimiento de una sola etapa diseñado para la derivación urinaria con un andamio tubular accesible a base de colágeno que contiene microinjertos autólogos.

Modelo quirúrgico para tubos uroteliales de ingeniería tisular de una sola etapa en minicerdos

Aquí, presentamos protocolos que detallan instrucciones para implementar cultivos celulares en 3D utilizando matrices de colágeno y colágeno-agarosa en un sistema microfisiológico. Estos protocolos apoyan el cocultivo de esferoides de túbulo proximal renal y carcinoma de células renales, simulando condiciones in vivo y permitiendo la investigación avanzada de las interacciones de las células de cáncer de riñón.

Cocultivo microfluídico de epitelio renal sano y tumoral para modelar la progresión del cáncer de riñón

En este trabajo describimos los protocolos para la obtención de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas (HRTEC) a partir de la corteza renal para desarrollar monocapas y cultivos tridimensionales en una matriz extracelular (3D-HRTEC).

Desarrollo de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y condiciones tridimensionales

Presentamos un protocolo optimizado para el procesamiento de riñones humanos completos para aislar y cultivar células epiteliales primarias del túbulo proximal renal y la aplicación de estas células en una plataforma tridimensional, microfluídica y microfisiológica para recapitular el túbulo proximal renal.

Aislamiento de células epiteliales primarias del túbulo proximal humano y su uso en la creación de un modelo microfisiológico del túbulo proximal renal

Aprenda a realizar microdisección de riñón murino para aislar segmentos cortico-medulares con arquitectura renal intacta. Esta técnica permite mantener la viabilidad tisular para aplicaciones de ingeniería de tejidos renales.

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