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DOI: 10.3791/62086-v
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Aquí, describimos herramientas y métodos computacionales que permiten la visualización y el análisis de datos de imágenes tridimensionales y cuatridimensionales de embriones de ratón en el contexto de la elongación y segmentación axial, obtenidos por tomografía de proyección óptica in toto, y por imágenes en vivo y tinción de inmunofluorescencia de montaje completo mediante microscopía multifotónica.
Las etapas de organogénesis en los embriones de ratón permanecen poco estudiadas en parte debido a la difícil visualización de las estructuras complejas del embrión. Este protocolo describe técnicas que permiten la visualización y análisis 3D y 4D de embriones de ratón durante la extensión y segmentación axial. La principal ventaja de esta técnica es que permite a los investigadores estudiar y mostrar las complejas estructuras del embrión de ratón como objetos dinámicos en 3D.
Este protocolo contiene técnicas que pueden ser utilizadas en el estudio de malformaciones congénitas que afectan a la vértebra y la médula espinal de los mamíferos, como la escoliosis. Estas técnicas también se pueden utilizar con sistemas modelo in vitro, lo que permite el estudio del desarrollo embrionario humano. Para preparar embriones de ratón entre el día embrionario 8.25 y el día embrionario 10.5 para imágenes en vivo, diseccionar los embriones en medio M2 precalentado a 37 grados centígrados.
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