Componentes esenciales de los ensayos de transcripción in vitro de Borreliella (Borrelia) burgdorferi

El sistema de ensayo de transcripción in vitro para Borreliella burgdorferi proporciona una herramienta bioquímica para que los investigadores estudien los mecanismos reguladores de genes y los factores que gobiernan la actividad enzimática de la ARN polimerasa. El sistema nos permite probar cómo los factores de transcripción, los cofactores, las concentraciones de sal y el pH afectan la función de la ARN polimerasa de Borreliella burgdorferi, lo que contribuye a nuestra comprensión general de los mecanismos reguladores de genes. Esta poderosa técnica también puede permitirnos detectar medicamentos que inhiben selectivamente la ARN polimerasa, abriendo la puerta al desarrollo de nuevos medicamentos para tratar la borreliosis de Lyme.

Para comenzar, recoja el pellet celular de dos a cuatro litros de Borreliella burgdorferi RpoC-His10X cultivado en medio BSKII en un ambiente microaerofílico a una densidad de dos a cuatro veces 10 constantes por mililitros. Granular las células a 10, 000 veces G durante 30 minutos a cuatro grados centígrados en botellas centrífugas de 500 mililitros y desechar el sobrenadante. Luego, resuspenda las celdas en 30 mililitros de tampón HN helado, repita el paso de centrifugación y decanta el sobrenadante.