Name: Estudio de la diafonía entre células endoteliales adiposas y adipocitos en el tejido adiposo subcutáneo humano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Aprende a aislar y cultivar células endoteliales microvasculares de tejido adiposo subcutáneo humano para estudiar la diafonía con adipocitos en enfermedades cardiometabólicas. Este protocolo utiliza tejido de pacientes reales.

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<meta charset="utf8"></head><body>SATMVECs humanos: estudios de aislamiento y diafonía de adipocitos

<ol><li>Bierhansl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+metabolism+in+endothelial+cell+function+and+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Central role of metabolism in endothelial cell function and vascular disease.</a> Physiology. 32 (2), 126-140 (2017).</li>
<li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell heterogeneity.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (1), a006429(2012).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> Int J Biol Sci. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Brown, O. I., Bridge, K., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidases+in+glucose+homeostasis+and+diabetes-related+endothelial+cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases in glucose homeostasis and diabetes-related endothelial cell dysfunction.</a> Cells. 10 (9), 2315(2021).</li>
<li>Luk, C., Haywood, N. J., Bridge, K. I., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+role+of+the+endothelium+in+metabolic+homeostasis+in+health+and+nutrient+excess%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Paracrine role of the endothelium in metabolic homeostasis in health and nutrient excess.</a> Front Cardiovasc Med. 26 (9), 882923(2022).</li>
<li>Click-iT EdU Imaging Kits. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf">https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf</a> (2024).</li>
<li>Bouïs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium+in+vitro%3A+A+review+of+human+vascular+endothelial+cell+lines+for+blood+vessel-related+research%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Endothelium in vitro: A review of human vascular endothelial cell lines for blood vessel-related research.</a> Angiogenesis. 4 (2), 91-102 (2001).</li>
<li>Ades, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99 (6), 683-690 (1992).</li>
<li>Chi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+diversity+revealed+by+global+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell diversity revealed by global expression profiling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (19), 10623-10628 (2003).</li>
<li>Brignole, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((213+ESC+Guidelines+on+cardiac+pacing+and+cardiac+resynchronization+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">213 ESC Guidelines on cardiac pacing and cardiac resynchronization therapy.</a> Eur Heart J. 34 (29), 2281-2329 (2013).</li>
<li>Greenspon, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+permanent+pacemaker+implantation+in+the+United+States+from+1993+to+2009%3A+Increasing+complexity+of+patients+and+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Trends in permanent pacemaker implantation in the United States from 1993 to 2009: Increasing complexity of patients and procedures.</a> J Am Coll Cardiol. 60 (16), 1540-1545 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Prioritized+Research+Agenda+for+Prevention+and+Control+of+Noncommunicable+Diseases%22">Prioritized Research Agenda for Prevention and Control of Noncommunicable Diseases</a>. Mendis, S. A., Alwan, A. , World Health Organization. Geneva. (2011).</li>
<li>Brown, O. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+among+diabetes%2C+obesity%2C+and+cardiovascular+disease+phenotypes%3A+A+UK+biobank+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Relationship among diabetes, obesity, and cardiovascular disease phenotypes: A UK biobank cohort study.</a> Diabetes Care. 46 (8), 1531-1540 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Incubadora de CO2 de 170 L</td><td>GS Biotech</td><td>170G-014</td><td></td></tr><tr><td>2-NBDG (2-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)Amino)-2-desoxiglucosa)</td><td>Invitrogen</td><td>N13195</td><td></td></tr><tr><td>4% PARAFIX fijador histológico tamponado</td><td>VWR Chemicals</td><td>PRC/R/38/1</td><td></td></tr><tr><td>Akt (tAkt) Rabbit&nbsp; 1:1000</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>9272</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety 14 g x 45 mm, Naranja, 50/paquete</td><td>Medisave</td><td>393230</td><td></td></tr><tr><td>Solución de albúmina sérica bovina, 7.5%</td><td>Merck</td><td>A8412-100ML</td><td></td></tr><tr><td>CD144&nbsp;( VE-Cadherin) Anticuerpo, antihumano, PE, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-495</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Anticuerpo, antihumano, PerCP-Vio 700, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-811</td><td></td></tr><tr><td>CD31 MicroBead Kit, humano, 1 kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>CD45 Anticuerpo, antihumano, FITC, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-769</td><td></td></tr><tr><td>Extracción de células Centrífuga</td> de <td>FNN0011</td><td></td><td>Buffer Invitrogen</td></tr><tr><td>5804</td><td>R Eppendorf</td><td>5805000060</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Kit de proliferación celular para imágenes, Alexa Fluor 488 colorante</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Kit de imágenes de proliferación celular</td></tr><tr><td>Colagenasa/Dispasa, 500 mg</td><td>Roche/Merck</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Factor de crecimiento reducido (GFR) Matriz de membrana basal</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354230</td><td>Membrana basal Matrix</td></tr><tr><td>Corning 100 mm TC-tratado con TC Plato de cultivo</td><td>Corning&nbsp;</td><td></td><td></td>430167</tr><tr><td>Costar 24-pocillos Placas de pocillos múltiples transparentes tratadas con TC, envueltas individualmente,</td><td>Corning estériles&nbsp;</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Costar 6-pocillos Placas transparentes de pocillos múltiples tratadas con TC, envueltas individualmente,</td><td>Corning estériles&nbsp;</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX S &ndash; 4 Citómetro de flujo láser</td><td>Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de eliminación de células muertas</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Merck</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>EASYstrainer Tamiz celular para tubos de 50 mL, 70 y micro; m mesh, azul, estéril, 50/pk</td><td>Greiner Bio-One</td><td>542070</td><td></td></tr><tr><td>Medio de crecimiento de células endoteliales MV</td><td>PromoCell</td><td>C-22020</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock microtubos de ensayo</td><td>Merck</td><td>EP0030120094</td><td></td></tr><tr><td>solución de ácido etilendiaminotetraacético</td><td>Merck E8008-100ML</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 Pocillos Placa de soporte permeable de poliestireno celular tratado con TC, con tapa, Estéril, 1/Paquete, 50/Caja</td><td>Appleton Woods</td><td>CF537</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Soporte permeable para placa de 24 pocillos con 0.4 y micro; m Membrana de PET Transparente, Estéril, 1/Paquete, 48/Caja</td><td>Appleton Woods</td><td>CF521</td><td></td></tr><tr><td>Medio de congelación Cryo-SFM</td><td>PromoCell</td><td>C-29912</td><td></td></tr><tr><td>Solución de gelatina, 2% en agua</td><td>Merck</td><td>G1393-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Antibiótico-Antimicótico (100x), 100mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>11570486</td><td></td></tr><tr><td>Gibco TrypLE Select Enzyme (1x), sin rojo fenol</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>12563029</tr><tr><td>Hanks&prime; Solución salina equilibrada</td><td>Merck</td><td>H6648-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Células preadipocitarias subcutáneas humanas</td><td>Lonza</td><td>PT-5020</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte ZOOM</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td>Sistema de análisis de células vivas</td></tr><tr><td>Solución de insulina humana</td><td>Merck</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>LS Columnas, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MACS Solución de almacenamiento de tejidos</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Rotador de tubos</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>Rotador de tubos</td></tr><tr><td>MS Columnas, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash; 12% Bis-Tris Gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td></td></tr><tr><td>Separador OctoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td></td></tr><tr><td>PGM-2 Medio de crecimiento preadipocito-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>PT-8002</td><td></td></tr><tr><td>Phospho (Ser1177) eNOS Rabbit 1:1000</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>9570</td><td></td></tr><tr><td>Phospho-Akt (Ser473) Rabbit&nbsp; 1:1000</td><td>Tecnología</td> <td>de señalización celular4060</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de pre-separación 30 &micro; m, 50/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Yoduro de propidio (PI)/solución de tinción de RNasa</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>4087</td><td></td></tr><tr><td>Separador QuadroMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí Desechable Estéril Estilo 10</td><td>VWRI</td><td>501</td><td></td></tr><tr><td>Tubo con tapón de rosca, 15 ml, (Lx&Oslash;): 120 x 17 mm, PP, con impresión</td><td>Sarstetd</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Tubo con tapón de rosca, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, con impresión</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Tubo con tapón de rosca, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, con impresión</td><td>Sarstetd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Total eNOS Mouse 1:1000</td><td>BD Biosciences</td><td></td> 610297 <td></td></tr><tr><td>Triton X-100, BioUltra, para biología molecular</td><td>Merck</td><td>93443-500ML</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Actina (C4) Ratón 1:5000</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>&nbsp; SC-47778</td><td></td></tr></tbody></table>

estudio de la diafonía entre células endoteliales adiposas y adipocitos en el tejido adiposo subcutáneo humano

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

Pureza y fenotipo de hSATMVEC El 99,5% de los hSATMVEC aislados de los pacientes control (es decir, aquellas personas sin antecedentes de enfermedad cardiometabólica) tenían un 99,5% de CD31+CD144+CD45- en la citometría de flujo (Figura 2). El hSATMVEC aislado tenía una morfología similar a un adoquín típica de las CE (Figura 3A). Los hSATMVEC tuvieron un tiempo medio de duplicación poblacional de 56,6 h ± 8,1 h (media ± SEM, n = 10) (Figura 3B), y la replicación activa del ADN en los hSATMVEC se confirmó utilizando un kit de imágenes de proliferación celular (Figura 3C).
hSATMVEC se comportó como MVECs en funcionamiento y formó tubos en Matrigel (Figura 3D). La expresión relativa de proteínas clave involucradas en la vía de señalización de insulina Akt-eNOS se muestra en la Figura 3E. Tanto los eNOs como los Akt demostraron aumentos en la fosforilación inducida por la insulina, representada como la relación entre la proteína fosforilada y la proteína total normalizada a ß-actina (Figura 3E).
cocultivo de adipocitos hSATMVEC En la Figura 4A se puede ver un modelo ilustrativo del cocultivo de adipocitos hSATMVEC. A medida que los preadipocitos blancos subcutáneos humanos se diferencian, se notará el desarrollo de vacuolas lipídicas (Figura 4B), que se pueden cuantificar mediante la tinción de Oil Red O (Figura 4B).
En la Figura 4C se muestran imágenes ilustrativas de contraste de fase y fluorescencia (excitación 440-480 nm/emisión 504-544 nm) de adipocitos diferenciados después de 30 min de incubación con 20 μM de glucosa 2-NBD. La absorción de glucosa se puede cuantificar midiendo el área verde como porcentaje del área total de las células.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig01v2.jpg"> Figura 1: Esquema que demuestra la recolección y el procesamiento de hSATMVEC <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig02.jpg"> Figura 2: Resultado típico del análisis de citometría de flujo de hSATMVECs cultivados. (A) Diagrama de dispersión del área de dispersión lateral (SSC-A) y el área de dispersión frontal (FSC-A) que muestra la compuerta (recuadro rojo) de hSATMVECs cultivados alrededor de una densidad de población celular específica. (B) Diagrama de dispersión de la anchura de dispersión directa (FSC-Width) y FSC-A que muestra la compuerta (recuadro rojo) de los hSATMVEC cultivados en torno a una densidad de población celular específica. (C) Histograma que muestra la fluorescencia de las células compuertas a CD45-FITC. (D) Diagrama de dispersión de la intensidad de fluorescencia de CD144-PE (eje x) y CD31-PerCP (eje y). (E) Histograma que muestra la fluorescencia de las células compuertas a CD144-PE. (F) Histograma que muestra la fluorescencia de las células cerradas a CD31-PerCP. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig03.jpg"> Figura 3: Fenotipo de hSATMVEC. (A) Imagen de microscopía óptica de hSATMVEC cerca de la confluencia que muestra una apariencia de adoquín. (B) Tiempo de duplicación de hSATMVEC - Microscopía óptica de HATEC tomada con 24 h de diferencia, lo que demuestra el grado de proliferación celular. (C) Proliferación de hSATMVEC. Microscopía de fluorescencia de hSATMVEC con yoduro de propidio y EdU/Alexa-fluor 488 de sujetos control. (D) Formación de tubos hSATMVEC a partir de sujetos de control (imágenes tomadas con un aumento de 4x). (E) Estimulación insulínica de los HATECs: muestra la expresión relativa de Akt fosforilada (serina 473) a Akt total (panel izquierdo) eNOS fosforilada (serina 1177) a eNOS total (panel derecho) a concentraciones crecientes de insulina con transferencias occidentales ilustrativas por debajo de estandarizadas a B-actina. Los datos se muestran como media ± SEM. Los tamaños de muestra se encuentran debajo de cada panel. Abreviaturas: 5-Ethinil-2'-desoxiuridina (EdU), células endoteliales microvasculares de tejido adiposo subcutáneo humano (hSATMVEC), error estándar de la media (SEM). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig04.jpg"> Figura 4: Cocultivo de adipocitos hSATMVEC. (A) Imagen esquemática del cocultivo de adipocitos hSATMVEC. (B) Diferenciación de adipocitos. El panel izquierdo muestra los preadipocitos en el día 0 y el panel derecho muestra los adipocitos diferenciados en el día 10 después de la adición de PDM. La figura inferior muestra la cantidad de lípidos almacenados en los adipocitos y preadipocitos teñidos con Oil Red O. (C) Ensayo de captación de glucosa. El panel izquierdo muestra las imágenes de fase de los adipocitos después del cocultivo y la incubación con 20 μM de glucosa 2-NBD durante 30 min. El panel de la derecha muestra imágenes verdes a partir de las cuales se puede cuantificar la absorción de glucosa (como % verde del área total). Los datos se muestran como medias ± SEM. Abreviaturas: Día 10 (D10), células endoteliales microvasculares de tejido adiposo subcutáneo humano (hSATMVEC), medios de diferenciación preadipocitaria (PDM) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla complementaria 1: Cóctel de tinción para citometría de flujo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/Supplementary%20Table%201.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Estudio de la diafonía entre células endoteliales adiposas y adipocitos en el tejido adiposo subcutáneo humano

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. ...

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El tejido adiposo (AT) puede influir en la homeostasis de todo el cuerpo, por lo tanto, es importante comprender los mecanismos moleculares de la diferenciación y función de los adipocitos. Proporcionamos un protocolo para obtener nuevos conocimientos sobre estos procesos mediante el análisis de la homeostasis, la diferenciación y la exposición a la hipoxia de los adipocitos como modelo para la apoptosis inducida de los adipocitos.

Mecanismo de regulación de los números de adipocitos en los organismos adultos a través de diferenciación y apoptosis La homeostasis

Aquí se informa un método para el aislamiento de las poblaciones de células progenitoras de adipocitos (APC) de tejido adiposo perivascular (PVAT) utilizando clasificación de células activadas magnéticamente (MCS). Este método permite un mayor aislamiento de APC por gramo de tejido adiposo cuando se compara con la Clasificación de Células Activadas por Fluorescencia (FACS).

Expansión y Adipogénesis Inducción de Progenitores Adipocíticos de Tejido Adiposo Perivascular Aislado por Clasificación de Células Magnéticas Activadas

La diferenciación de los adipocitos blancos y beiges de tejido adiposo vascular progenitores tiene potencial para mejoramiento metabólico en obesidad. Se describen los protocolos para un CD34 + CD31 + aislamiento de células endoteliales de la grasa humana y un posterior en vitro expansión y diferenciación a adipocitos blancos y beiges. Se discuten varias aplicaciones posteriores.

Aislamiento, expansión y Adipogenic inducción de CD31 + CD34 + células endoteliales del humano omentales y subcutáneos de tejido adiposo

Debido al contenido alto de lípidos, tejido adiposo ha estado desafiando a visualizar utilizando métodos histológicos tradicionales. Adipo-Clear es un tejido de limpieza técnica que permite etiquetado robusta y alta resolución volumétrica fluorescente la proyección de imagen del tejido adiposo. Aquí, describimos los métodos para la preparación de la muestra, tratamiento previo, tinción, limpieza y montaje para la proyección de imagen.

Adipo-claro: Un tejido claro método de proyección de imagen tridimensional del tejido adiposo

Describimos un sistema de cultivo in vitro de matriz-adipocitos extracelulares humanos 3D que permite la disección de las funciones de la matriz y los adipocitos en contribuir al fenotipo metabólico del tejido adiposo.

Un modelo de cultivo de matriz-adipocitos extracelulares 3D humano para el estudio de la conversación cruzada metabólica Matrix-Cell

Presentamos un protocolo para el aislamiento, el cultivo y la inducción adipogénica de células madre derivadas de cresta neural derivadas de la cresta adiposa (NCADSC) del tejido adiposorio periaortico de Wnt-1 Cre+/-; Ratones Rosa26RFP/+. Los NCADSC pueden ser una fuente de aXenatos de fácil acceso para modelar adipogénesis o lipogénesis in vitro.

Aislamiento, cultivo e inducción adipogénica de células madre originales adiposas de raíz de la cresta neuronal del tejido adiposorio

Este protocolo describe el enfoque técnico para aislar subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos murinos de tejido adiposo blanco intraabdominal (WAT) mediante clasificación celular activada por fluorescencia o separación inmunomagnética de perlas.

Aislamiento de subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos adiposos intraabdominales murinos

Este protocolo proporciona un método eficiente de digestión de colagenasas para el aislamiento de adipocitos viables y células de la fracción vascular estromal-SVF de grasa visceral humana en un solo proceso, incluida la metodología para obtener ARN de alta calidad de los adipocitos y la fenotipificación de los macrófagos SVF mediante la tinción de múltiples marcadores unidos a la membrana para su análisis por citometría de flujo.

Aislamiento de adipocitos viables y fracción vascular estromal a partir de tejido adiposo visceral humano adecuado para análisis de ARN y fenotipado de macrófagos

El manuscrito y el video asociado demuestran una técnica de biopsia percutánea para obtener muestras de tejido adiposo subcutáneo de las áreas que rodean el ombligo. Este método es una forma eficiente y de bajo riesgo de investigar una serie de parámetros (por ejemplo, expresión génica o proteica, actividad enzimática, contenido de lípidos) dentro del tejido adiposo.

Muestreo de tejido adiposo subcutáneo humano mediante una técnica de mini-liposucción

Este protocolo describe el aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal (SVF) del tejido adiposo murino para obtener preadipocitos y lograr la diferenciación de los adipocitos in vitro. El uso de un disociador de tejidos para la digestión de la colagenasa reduce la variación experimental y aumenta la reproducibilidad.

Aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal del tejido adiposo blanco murino utilizando un disociador tisular

Aprende a aislar y cultivar células endoteliales microvasculares de tejido adiposo subcutáneo humano para estudiar la diafonía con adipocitos en enfermedades cardiometabólicas. Este protocolo utiliza tejido de pacientes reales.

Estudio de la diafonía entre células endoteliales adiposas y adipocitos en el tejido adiposo subcutáneo humano

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