Name: Cribado de moléculas pequeñas y pruebas de toxicidad en larvas de pez cebra en fase inicial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 52 s
Description: Aprende cribado de moléculas pequeñas y evaluación de toxicidad en larvas de Danio rerio mediante microscopía estereoscópica. Este método permite identificar fenotipos anormales como edema pericárdico y retrasos en el desarrollo.

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<ol><li>Teame, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+as+biomedical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Front%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish (Danio rerio) as biomedical models.</a> Anim Front. 9 (3), 68-77 (2019).</li>
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<li>Lipton, J. H., Brümmendorf, T. H., Sweet, K., Apperley, J. F., Cortes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+considerations+in+the+management+of+patients+treated+with+bosutinib+for+chronic+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Hematol%22%5BJournal%5D)">Practical considerations in the management of patients treated with bosutinib for chronic myeloid leukemia.</a> Ann Hematol. 103 (9), 3429-3442 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>tubo de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>Starlab</td><td>E1415-1510</td><td></td></tr><tr><td>10 &micro; Micropipeta L (P10)</td><td>Gilson</td><td>F144802&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>10/20 y micro; L puntas de pipeta</td><td>Starlab</td><td>S1110-3810</td><td></td></tr><tr><td>1000 &micro; Micropipeta L (P1000)</td><td>Gilson</td><td>F123602&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>1000 y micro; Puntas de pipeta</td><td>L</td><td>Starlab S1111-6001</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 12 pocillos</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7512</td><td>Estéril, envoltura individual, sin tratar, con tapa</td></tr><tr><td>20 y micro; Micropipeta L (P20)</td><td>Gilson</td><td>F123600&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>200 y micro; Micropipeta L (P200)</td><td>Gilson</td><td>F123601&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>200 y micro; L pipeta multicanal&nbsp;</td><td>Gilson</td><td>F81024</td><td></td></tr><tr><td>200 y micro; Puntas de pipeta L</td><td></td><td>Starlab S1113-1006</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 pocillos</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7596</td><td>Estériles, de envoltura simple, de fondo plano, sin tratar, con tapa</td></tr><tr><td>Tanques de cría con fondo inclinado de rejilla interior, divisores de tanques y tapas</td><td>Tecniplast</td><td>ZB17BTISLOP, ZB17BTE,&nbsp; ZB17BTL, ZB17BTD</td><td>Depósito interior inclinado</td></tr><tr><td>Colador de malla</td><td>/</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Guantes de nitrilo</td><td>Mercator</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>Placa de Petri&nbsp;</td><td>Starlab</td><td>CC7672-3394/CC7672-3359</td><td>100 x 20 mm o 60 x 15 mm</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico de fluorescencia Leica M205 FCA</td><td>Incubadora refrigerada Leica</td><td>10450826</td><td></td></tr><tr><td>Peltier que incluye 2 estantes con módulo de luz blanco frío</td><td>Memmert</td><td>IPP110ecoplus, T8</td><td>Equipado con ciclo</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> día/noche <tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>504341000</td><td>Para preparar una solución al 1% en E3</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio dihidratado</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>303080500</td><td>Para preparar E3</td></tr><tr><td>Sulfato de magnesio heptahidratado</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>313060500</td><td>Para preparar E3</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>316030500</td><td>Para preparar E3</td></tr><tr><td>SCREEN-WELL&nbsp; Wnt Pathway library (Bosutinib)</td><td>Enzo</td><td>BML-2838-0500</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/3161/53</td><td>Para preparar E3</td></tr></tbody></table>

cribado de moléculas pequeñas y pruebas de toxicidad en larvas de pez cebra en fase inicial

Small Molecule Screening and Toxicity Testing in Early-stage Zebrafish Larvae

Las anormalidades se pueden observar individualmente o acumulativamente a lo largo de la línea de tiempo experimental hasta 7 dpf. La puntuación morfológica máxima por anomalía se puede utilizar para calcular las anomalías morfológicas como porcentaje del número de larvas utilizadas. Por ejemplo, si en el día 7 las puntuaciones de morfología del edema pericárdico son de 19 y 20 para los puntuadores 1 y 2, respectivamente, de una puntuación posible de 24, lo que significa que 19 o 20 larvas de 24 muestran edema pericárdico, la puntuación porcentual se puede calcular como:
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67759/67759eq1.jpg">
La Tabla Suplementaria S1 muestra los resultados de la puntuación morfológica (de ambos evaluadores) a 4 dpf después de las pruebas de toxicidad para el compuesto Bosutinib, un inhibidor de la tirosina cinasa indicado para el tratamiento de la leucemia mieloide crónica15. La misma puntuación morfológica se repite para los peces expuestos de 5 dpf a 7 dpf. El compuesto se probó utilizando un rango de concentración de 100 μM a 6,25 μM. Se realizaron tres réplicas técnicas en diferentes puntos temporales, y se utilizó la tasa de mortalidad acumulada promedio a 7 dpf para determinar LC50, la concentración a la que sobrevive el 50% de las larvas. El LC50 se puede determinar en cualquier punto de tiempo de exposición. Sin embargo, recomendamos calcular esto a 7 dpf.
Se utilizó la mortalidad promedio acumulada a 7 dpf para generar una curva LC50 , que se puede observar en la Figura 3. Para Bosutinib, la concentración de LC50 se estimó en 37,95 μM.
NOTA: Esta concentración estimada de LC50 se aplica estrictamente a este sistema modelo y luego se puede utilizar para ensayos de fenotipado posteriores posteriores.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig1.jpg"> 
Figura 1: Esquema del cribado de fármacos propuesto en larvas a 3-7 dpf. Las placas de prueba de 96 pocillos están configuradas para la investigación de cinco concentraciones que van desde 100 μM hasta 6,25 μM para el compuesto Bosutinib. Abreviatura: dpf = días después de la fecundación. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig2.jpg"> 
Figura 2: Defectos morfológicos representativos observados en larvas de pez cebra a 5 dpf expuestas a diversas concentraciones químicas (a los 2 días después de la exposición). (A) Pez cebra control (no afectado), (B) Larva de pez cebra que muestra edema pericárdico leve, (C) Pez cebra con edema pericárdico severo y hemorragia vitelita, (D) Pez cebra con retraso en el desarrollo, pigmentación reducida, (E) Pez cebra con yema hinchada y una aleta caudal retorcida, (F) Pez cebra con ausencia de aleta caudal, (G) Pez cebra con notocorda curvada, (H) Pez cebra con cola truncada, y (I) Pez cebra muerto con necrosis. Los defectos se señalan con puntas de flecha rojas. Barras de escala = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig3.jpg"> 
Figura 3: Curva LC50 que muestra la concentración frente al % de mortalidad. Las cinco concentraciones ensayadas fueron 100 μM, 50 μM, 25 μM, 12,5 μM y 6,25 μM, con un porcentaje de mortalidad de 100%, 100%, 29,2%, 12,5% y 12,5%, respectivamente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Defectos morfológicos</td>
			<td>Descripción</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Edema pericárdico</td>
			<td>Acumulación de líquido alrededor del corazón con un corazón estirado y mal funcionamiento de la circulación sanguínea</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latidos del corazón (por minuto)</td>
			<td>Reducción del número de pulsaciones por minuto</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yema</td>
			<td>Presencia o ausencia de edema o hemorragia vitelino que puede ocurrir simultáneamente con defectos cardíacos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extensión de yema</td>
			<td>Yema hinchada, delgada o ausente</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Notocordio curvo</td>
			<td>Presencia de una notocorda retorcida u ondulada, y/o cola curvada</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vejiga natatoria</td>
			<td>Presencia, ausencia o desarrollo parcial de la vejiga natatoria</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pigmentación</td>
			<td>Menos o ningún melanocitos en comparación con los peces no tratados de la misma edad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Necrosis</td>
			<td>Presencia (leve o grave) o ausencia de necrosis en cualquier parte del cuerpo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retraso en el desarrollo</td>
			<td>Desarrollo tardío o estancado en comparación con los controles de tipo salvaje de la misma edad.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Respuesta al tacto</td>
			<td>Respuesta tardía o nula después de un sobresalto (p. ej., usando la punta de una pipeta)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Truncamiento</td>
			<td>Ausencia de cuerpo de pez cebra posterior (es decir, formación de la cola)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aletas</td>
			<td>Presencia o ausencia de la aleta caudal que puede ir acompañada de una fina extensión de la yema</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eje corporal reducido</td>
			<td>Peces que parecen normales, pero que cuando se miden son más cortos de longitud</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: Lista de defectos morfológicos visuales que se pueden observar después de los estudios de exposición a fármacos.
Tabla complementaria S1: Resultados morfológicos representativos de Bosutinib a 4 dpf (1 día después de la exposición). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/SupplementalTable_1.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>

Cribado de moléculas pequeñas y pruebas de toxicidad en larvas de pez cebra en fase inicial

Zebrafish have become a prominent model organism for human translational research, toxicity testing of small molecules and environmental pollutants, ...

small-molecule-screening-toxicity-testing-early-stage-zebrafish

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

A gran escala basado en pez cebra En vivo Pantalla de moléculas pequeñas

Aquí se describe una novela de alto contenido de ensayo de la inflamación inducida químicamente con miras a la identificación de moduladores bioactivos inmune. Hemos combinado con éxito con la microscopía automatizada de scripts de software desarrollado que permite la cuantificación automática de la respuesta inflamatoria, así como el procesamiento de datos aún más, el análisis, la minería, y el almacenamiento.

Facilitar el descubrimiento de fármacos: Un sistema automatizado de alta el contenido del ensayo La inflamación en el pez cebra

En este artículo, los embriones de pez cebra se utilizan para el cribado de toxicidad química. La toxicidad química se correlaciona con las lecturas del fenotipo. El protocolo de muestreo muestra un enfoque metodológico para realizar el cribado de toxicidad química.

Cribado de toxicidad química basada en embriones: evaluación de los efectos en el desarrollo de embriones de pez cebra

Este artículo describe la respuesta conductual del pez cebra a compuestos tóxicos mediante el monitoreo de la locomoción larvaria. El protocolo examina además un ejemplo de la respuesta de las larvas de pez cebra a los contaminantes ambientales.

Ensayo de locomoción larvaria: método de alto rendimiento para estudiar la toxicidad neuroconductual de un compuesto en larvas de pez cebra

El pez cebra es un organismo experimental excelente para estudiar los procesos de desarrollo de vertebrados y la enfermedad humana modelo. A continuación, describimos un protocolo sobre cómo realizar una pantalla manual de alto rendimiento químico en embriones de pez cebra con todo el montaje hibridación in situ (ojalá) de lectura.

Un manual de la pantalla pequeña molécula Acercarse De Alto Rendimiento Utilizando embriones de pez cebra

Los embriones de pez cebra se utilizan para evaluar la toxicidad de los compuestos químicos. Se desarrollan externamente y son sensibles a los productos químicos, lo que permite la detección de cambios fenotípicos sutiles. El experimento sólo requiere una pequeña cantidad de compuesto, que se añade directamente a la placa que contiene embriones, haciendo que el sistema de prueba sea eficiente y rentable.

Evaluación rápida de la toxicidad de compuestos químicos mediante embriones de pez cebra

En este documento se presenta un protocolo experimental detallado para la evaluación de la toxicidad neuroconductual de contaminantes ambientales utilizando un modelo de larvas de pez cebra, incluyendo el proceso de exposición y pruebas para indicadores neuroconductuales.

Estudio de los efectos neuroconductuales de los contaminantes ambientales en las larvas de peces cebra

Los modelos de xenoinjerto de pez cebra permiten la detección de fármacos de alto rendimiento y la toma de imágenes fluorescentes de células cancerosas humanas en un microambiente in vivo. Desarrollamos un flujo de trabajo para la detección automatizada de fármacos a gran escala en muestras de leucemia derivadas del paciente en peces cebra utilizando una unidad de imágenes automatizada equipada con microscopio de fluorescencia.

Examen de drogas de xenoinjertos de tumores derivados del paciente primario en peces cebra

El pez cebra ha sido explotado recientemente como modelo para validar posibles modificadores de radiación. El presente protocolo describe los pasos detallados para utilizar embriones de pez cebra para experimentos de detección basados en radiación y algunos enfoques observacionales para evaluar el efecto de diferentes tratamientos y radiación.

Larvas de pez cebra como modelo para evaluar posibles radiosensibilizadores o protectores

Describimos el flujo de trabajo y el análisis de datos de un sistema de cribado para evaluar la toxicidad de compuestos químicos en función de la respuesta de sobresalto por vibración del embrión de pez cebra. El sistema registra los movimientos de los embriones de pez cebra tras la exposición a un estímulo vibratorio y permite una evaluación integrada de la toxicidad/letalidad general y la toxicidad neuromuscular.

Evaluación de la toxicidad de los productos químicos mediante un sistema de detección de la respuesta al sobresalto por vibración del pez cebra

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