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DOI: 10.3791/68370-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study investigates the use of portable long-read sequencing for determining drug-resistant tuberculosis (TB) susceptibility in resource-limited settings. The protocol aims to provide accurate results comparable to gold standard methods, enhancing accessible TB diagnostics.
Este protocolo se optimizó para la secuenciación profunda dirigida de 18 regiones de resistencia a los medicamentos en Mycobacterium tuberculosis utilizando una plataforma de secuenciación de lectura larga, seguida de un análisis con una línea de bioinformática específica para la tuberculosis diseñada para datos de lectura larga.
Investigo si la secuenciación portátil de lectura larga puede proporcionar resultados de susceptibilidad resistente a la tuberculosis en entornos con recursos limitados, con una precisión comparable al método de estándares de oro, avanzando en diagnósticos de tuberculosis accesibles y de alta calidad. Utilizar secuenciación dirigida de nueva generación como herramienta diagnóstica para la tuberculosis resistente a medicamentos, ofreciendo un perfil completo de resistencia directamente de la muestra clínica sin conocimientos en bioinformática. Nuestro protocolo, que utiliza secuenciación de lecturas largas, tiene el potencial de proporcionar tiempos de respuesta más rápidos, un flujo de trabajo más sencillo que en la detección de resistencia en tiempo real, facilitando diagnósticos completos de TB y mejorando el seguimiento de brotes en entornos con recursos limitados y una infraestructura mínima.
Para empezar, calcula 100 nanogramos de cada muestra de amplicón en función de la concentración y transfiere el volumen requerido a un tubo PCR limpio. Para determinar la masa total de amplicones en la muestra, se utiliza la fórmula dada. Ajusta el volumen total de cada muestra a 12,5 microlitros usando agua libre de nucleasa.
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