Name: Imágenes en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía e interacciones con sinapsis en retina murina enferma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-16T12:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Explore la dinámica microglial y sus interacciones sinápticas en retina murina mediante microscopía confocal de disco giratorio y análisis de imágenes con aprendizaje automático. Este protocolo ex vivo permite cuantificar la motilidad celular y los contactos con PSD95 en condiciones homeostáticas y de lesión.

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<ol><li>Wu, Y. K., Hengen, K. B., Turrigiano, G. G., Gjorgjieva, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostatic+mechanisms+regulate+distinct+aspects+of+cortical+circuit+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Homeostatic mechanisms regulate distinct aspects of cortical circuit dynamics.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 117 (39), 24514-24525 (2020).</li>
<li>Paolicelli, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+pruning+by+microglia+is+necessary+for+normal+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Synaptic pruning by microglia is necessary for normal brain development.</a> Science. 333 (6048), 1456-1458 (2011).</li>
<li>Rosin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+microglia+interact+with+hypothalamic+radial+glia+during+development+and+upregulate+the+TAM+receptors+MERTK+and+AXL+following+an+insult%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Embryonic microglia interact with hypothalamic radial glia during development and upregulate the TAM receptors MERTK and AXL following an insult.</a> Cell Rep. 34 (1), 108587(2021).</li>
<li>Wang, X., Li, K., Guo, L., Liu, X., Guo, Y., Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+changes+in+microglia+development+on+the+plasticity+of+the+developing+visual+cortex+circuit+in+juvenile+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The influence of changes in microglia development on the plasticity of the developing visual cortex circuit in juvenile mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 66 (4), 45(2025).</li>
<li>Blume, Z. I., Lambert, J. M., Lovel, A. G., Mitchell, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+the+developing+retina+couple+phagocytosis+with+the+progression+of+apoptosis+via+P2RY12+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Microglia in the developing retina couple phagocytosis with the progression of apoptosis via P2RY12 signaling.</a> Dev Dyn. 249 (6), 723-740 (2020).</li>
<li>Brown, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+are+dispensable+for+experience-dependent+refinement+of+mouse+visual+circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia are dispensable for experience-dependent refinement of mouse visual circuitry.</a> Nat Neurosci. 27 (8), 1462-1467 (2024).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+use+TAM+receptors+to+detect+and+engulf+amyloid+%CE%B2+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia use TAM receptors to detect and engulf amyloid β plaques.</a> Nat Immunol. 22 (5), 586-594 (2021).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+microglial+SIRP%CE%B1+promotes+synaptic+pruning+in+preclinical+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Loss of microglial SIRPα promotes synaptic pruning in preclinical models of neurodegeneration.</a> Nat Commun. 12 (1), 2030(2021).</li>
<li>He, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+mediate+synaptic+material+clearance+at+the+early+stage+of+rats+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia mediate synaptic material clearance at the early stage of rats with retinitis pigmentosa.</a> Front Immunol. 10, 912(2019).</li>
<li>Yu, A., Fang, C., Tan, L. X., Lakkaraju, A., Della Santina, L., Ou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+target+synaptic+sites+early+during+excitatory+circuit+disassembly+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Microglia target synaptic sites early during excitatory circuit disassembly in neurodegeneration.</a> iScience. 28 (4), 112201(2025).</li>
<li>Xu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+changes+and+the+response+of+microglia+in+a+light-induced+photoreceptor+degeneration+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Synaptic changes and the response of microglia in a light-induced photoreceptor degeneration model.</a> Mol Vis. 27, 206-220 (2021).</li>
<li>Paolicelli, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+states+and+nomenclature%3A+a+field+at+its+crossroads%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia states and nomenclature: a field at its crossroads.</a> Neuron. 110 (21), 3458-3483 (2022).</li>
<li>Yu, Z., Gutu, A., Kim, N., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapse+weakening-induced+caspase-3+activity+confers+specificity+to+microglia-mediated+synapse+elimination%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Synapse weakening-induced caspase-3 activity confers specificity to microglia-mediated synapse elimination.</a> bioRxiv. , (2024).</li>
<li>Miller, E. B., Zhang, P., Ching, K., Pugh, E. N., Burns, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+reveals+transient+microglia+recruitment+and+functional+recovery+of+photoreceptor+signaling+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging reveals transient microglia recruitment and functional recovery of photoreceptor signaling after injury.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 116 (33), 16603-16612 (2019).</li>
<li>Wahl, D. J., Ng, R., Ju, M. J., Jian, Y., Sarunic, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorless+adaptive+optics+multimodal+en-face+small+animal+retinal+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Sensorless adaptive optics multimodal en-face small animal retinal imaging.</a> Biomed Opt Express. 10 (1), 252(2019).</li>
<li>Ou, Y., Jo, R. E., Ullian, E. M., Wong, R. O. L., Della Santina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+vulnerability+of+specific+retinal+ganglion+cell+types+and+synapses+after+transient+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Selective vulnerability of specific retinal ganglion cell types and synapses after transient ocular hypertension.</a> J Neurosci. 36 (35), 9240-9252 (2016).</li>
<li>Della Santina, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disassembly+and+rewiring+of+a+mature+converging+excitatory+circuit+following+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Disassembly and rewiring of a mature converging excitatory circuit following injury.</a> Cell Rep. 36 (5), 109463(2021).</li>
<li>Ramírez, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+changes+in+the+early+aging+stage+in+a+healthy+retina+and+an+experimental+glaucoma+model%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Microglial changes in the early aging stage in a healthy retina and an experimental glaucoma model.</a> Prog Brain Res. 256, 125-149 (2020).</li>
<li>de Hoz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+early+activation+of+retinal+microglial+cells+in+a+mouse+model+of+unilateral+laser-induced+experimental+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Bilateral early activation of retinal microglial cells in a mouse model of unilateral laser-induced experimental ocular hypertension.</a> Exp Eye Res. 171, 12-29 (2018).</li>
<li>Soliño, M., Yu, A., Della Santina, L., Ou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+survey+of+excitatory+synapses+reveals+sublamina-specific+and+asymmetric+synapse+disassembly+in+a+neurodegenerative+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Large-scale survey of excitatory synapses reveals sublamina-specific and asymmetric synapse disassembly in a neurodegenerative circuit.</a> iScience. 26 (8), 107262(2023).</li>
<li>Negrini, M., Wang, G., Heuer, A., Björklund, T., Davidsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV+production+everywhere%3A+a+simple%2C+fast%2C+and+reliable+protocol+for+in-house+AAV+vector+production+based+on+chloroform+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">AAV production everywhere: a simple, fast, and reliable protocol for in-house AAV vector production based on chloroform extraction.</a> Curr Protoc Neurosci. 93 (1), e103(2020).</li>
<li>Imaris reference manual. , 
 <a target="_blank" href="https://lims.gzzoc.com/files/instrument/20240722/2024072212391299299_ImarisManual.pdf">https://lims.gzzoc.com/files/instrument/20240722/2024072212391299299_ImarisManual.pdf</a> (2024).</li>
<li>Joseph, A., Power, D., Schallek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+dynamics+of+individual+processes+of+microglia+in+the+living+retina+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Imaging the dynamics of individual processes of microglia in the living retina in vivo.</a> Biomed Opt Express. 12 (10), 6157(2021).</li>
<li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+in+mouse+spinal+cord+reveals+that+microglia+prevent+degeneration+of+injured+axons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging in mouse spinal cord reveals that microglia prevent degeneration of injured axons.</a> Nat Commun. 15 (1), 8837(2024).</li>
<li>Lee, J. E., Liang, K. J., Fariss, R. N., Wong, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+dynamic+imaging+of+retinal+microglia+using+time-lapse+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Ex vivo dynamic imaging of retinal microglia using time-lapse confocal microscopy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49 (9), 4169-4176 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Aguja de calibre 25</td><td>Alcon</td><td>8065420920</td><td></td></tr><tr><td>Escala 26s 10 y micro; Jeringuilla L</td><td>Hamilton</td><td>701RNWG</td><td></td></tr><tr><td>7m8</td><td>Addgene</td><td>64839</td><td>http://n2t.net/addgene:64839</td></tr><tr><td>Alambre multipropósito de acero inoxidable 304 doblable y permanecer</td><td>Materiales Avanzados de Stanford</td><td>SS3368</td><td>Alambre de acero para hacer anillos</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio hexahidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5080-500G</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Amscope</td><td></td><td>Diseccionar y montar retinas</td></tr><tr><td>Tijeras de disección</td><td>FST</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7528-250G</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>Dumont</td><td>11252-21</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-500G</td><td></td></tr><tr><td>Imaris 10.0.2</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td>Software de análisis</td></tr><tr><td>Convertidor de archivos Imaris</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Control del Gel Ultra Superglue Loctite</td><td>Loctite</td><td>1363589</td><td>Pegamento para hacer anillos</td></tr><tr><td>Cloruro de Magnesio Hexahidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272-100G</td><td></td></tr><tr><td>Papel filtro de membrana MCE (13 mm)</td><td>Millipore</td><td>HABG01300</td><td>0,45 & mu; m Tamaño de los poros</td></tr><tr><td>Cámara Microambiental</td><td>Tokai Hit</td><td>STXG-TIZBX-SET</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertido Nikon Eclipse Ti2-E</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elementos NIS</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neomicina y sulfas de polimixina B y bacitracina Ungüento para solución de cinc para oftalámica, USP</td><td>Bausch + Lomb</td><td>24208-780-55</td><td></td></tr><tr><td>Pincel Tamaño 00</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 8.0</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proparacaína Solución Hidroclorhídrica Óptica USP, 0,5%</td><td>Sandoz</td><td>61314-0016-01</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri recubierta con PDL (35 mm)</td><td>Matek</td><td>P35GC-1.5-14-C</td><td>Cubierta nº 1.5</td></tr><tr><td>PSD95_pTagRFP</td><td>Addgene</td><td>52671</td><td>http://n2t.net/addgene:52671</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Monohidrato monobásico de fosfato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-25G</td><td></td></tr></tbody></table>

imágenes en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía e interacciones con sinapsis en retina murina enferma

Live Imaging and Characterization of Microglia Dynamics and Interactions with Synapses in Diseased Murine Retina

Imágenes en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía e interacciones con sinapsis en retina murina enferma

Microglia are the resident macrophages of the central nervous system (CNS) that respond to tissue infection and injury. In addition to their role in ...

live-imaging-characterization-microglia-dynamics-interactions-with

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Fuente: Maruoka, H., et. al. Imágenes simultáneas de la dinámica microglial y la actividad neuronal en ratones despiertos. J. Vis. Exp.  (2022) Este video muestra un procedimiento de microscopía de dos fotones para obtener imágenes de la actividad neuronal y la dinámica microglial en un ratón despierto durante la estimulación visual, destacando los transitorios de calcio y las interacciones celulares.

Imágenes simultáneas de la dinámica microglial y la actividad neuronal en un ratón despierto

Source: Bosco, A., et al. Dinámica in vivo de la activación de la microglía retiniana durante la neurodegeneración: imagen oftalmoscópica confocal y morfometría celular en glaucoma de ratón. J. Vis. Exp. (2015) Este video muestra imágenes in vivo de la microglía de la retina en un modelo de ratón de glaucoma. Un ratón transgénico con microglía retiniana fluorescente que expresa proteínas se coloca debajo de un oftalmoscopio. La iluminación infrarroja se utiliza para localizar la cabeza del...

Obtención de imágenes in vivo de la microglía de la retina en un modelo murino de glaucoma

La activación de la microglia y microgliosis son respuestas clave a la neurodegeneración crónica. A continuación, presentamos los métodos para in vivo, visualización a largo plazo de la retina células microgliales CX3CR1-GFP + por oftalmoscopía confocal y de umbral y los análisis morfométricos para identificar y cuantificar su activación. Hacemos un seguimiento de los cambios microgliales durante las primeras etapas del glaucoma relacionada con la edad.

En Vivo Dinámica de Retina Microglial Activación Durante Neurodegeneración: Confocal oftalmoscópico Imaging y Morfometría celular en el ratón Glaucoma

Este protocolo describe cómo alta resolución técnicas imagenológicas como una tomografía de coherencia óptica de dominio espectral y exploración oftalmoscopia de láser puede ser utilizada en pequeños roedores, utilizando un sistema de plataforma imagen oftálmica, para obtener información sobre espesor retiniano y microglía células distribución, respectivamente.

En Vivo Proyección de imagen de ratones de reportero Cx3cr1gfp/gfp con tomografía de coherencia óptica de dominio espectral y exploración oftalmoscopia de láser

Este protocolo describe una técnica crónica de implantación de ventanas craneales que se puede utilizar para imágenes longitudinales de estructuras neuro-glio-vasculares, interacciones y función en condiciones saludables y enfermas. Sirve como una alternativa complementaria al enfoque de imagen transcraneal que, aunque a menudo se prefiere, posee algunas limitaciones críticas.

Mapeo cerebral preciso para realizar imágenes in vivo repetitivas de dinámica neuroinmunitaria en ratones

La imagen in vivo es una herramienta poderosa para el estudio de la biología en la salud y la enfermedad. Este protocolo describe imágenes transpupilares de la retina del ratón con un microscopio estándar de dos fotones. También demuestra diferentes métodos de imagen in vivo para etiquetar fluorescentemente múltiples cohortes celulares de la retina.

Imágenes transpupilares de dos fotones in vivo de la retina del ratón

Aquí, describimos un protocolo que combina la inyección de virus adenoasociados con la implantación de ventana craneal para obtener imágenes simultáneas de la dinámica microglial y la actividad neuronal en ratones despiertos.

Imágenes simultáneas de la dinámica microglial y la actividad neuronal en ratones despiertos

Demostramos un método que aprovecha la microscopía confocal de barrido rápido para realizar imágenes en vivo de las células de la microglía en el tectum óptico del pez cebra en desarrollo, lo que permite el análisis de la dinámica de estas células in vivo.

Imagen en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía en el embrión de pez cebra

Se describe un método para visualizar repetidamente microglia murina y los monocitos...

Una delgada del cráneo ventana Técnica para la crónica de dos fotones En vivo Imágenes de la microglía murina en los modelos de la neuroinflamación

El vídeo de la actualidad muestra un método que aprovecha las ventajas de la combinación de electroporación y la microscopía confocal para realizar las imágenes en vivo en cada células progenitoras neurales en el cerebro anterior pez cebra en desarrollo.

Time-lapse de imágenes en vivo de la relación clonal con células progenitoras neurales en el cerebro anterior El desarrollo de pez cebra

Explore la dinámica microglial y sus interacciones sinápticas en retina murina mediante microscopía confocal de disco giratorio y análisis de imágenes con aprendizaje automático. Este protocolo ex vivo permite cuantificar la motilidad celular y los contactos con PSD95 en condiciones homeostáticas y de lesión.

Imágenes en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía e interacciones con sinapsis en retina murina enferma

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