Name: Purificación eficiente de polipéptidos similares a la elastina (ELPs) de E. coli mediante un método de extracción y precipitación a base de disolventes orgánicos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Aprende a purificar polipéptidos similares a la elastina de E. coli mediante extracción con disolventes orgánicos. Este método rápido y escalable conserva la actividad de las proteínas de fusión y controla los endotoxinas para aplicaciones biomédicas.

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<ol><li>Despanie, J., Dhandhukia, J. P., Hamm-Alvarez, S. F., MacKay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides%3A+therapeutic+applications+for+an+emerging+class+of+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides: therapeutic applications for an emerging class of nanomedicines.</a> J Control Release. 240, 93-108 (2016).</li>
<li>MacEwan, S. R., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in drug delivery.</a> J Control Release. 190, 314-330 (2014).</li>
<li>Jenkins, I. C., Milligan, J. J., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+encoded+elastin-like+polypeptides+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Genetically encoded elastin-like polypeptides for drug delivery.</a> Adv Healthc Mater. 10 (13), e2100209(2021).</li>
<li>Ju, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+targeting+of+immunosuppressants+using+a+bifunctional+elastin-like+polypeptide%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular targeting of immunosuppressants using a bifunctional elastin-like polypeptide.</a> Bioconjug Chem. 30 (9), 2358-2372 (2019).</li>
<li>Nettles, D. L., Chilkoti, A., Setton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 62 (15), 1479-1485 (2010).</li>
<li>Meyer, D. E., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+recombinant+proteins+by+fusion+with+thermally+responsive+polypeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Purification of recombinant proteins by fusion with thermally responsive polypeptides.</a> Nat Biotechnol. 17 (11), 1112-1115 (1999).</li>
<li>VerHeul, R., Sweet, C., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+simple+purification+of+elastin-like+polypeptides+directly+from+whole+cells+and+cell+lysates+by+organic+solvent+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and simple purification of elastin-like polypeptides directly from whole cells and cell lysates by organic solvent extraction.</a> Biomater Sci. 6 (4), 863-876 (2018).</li>
<li>Sweet, C., Aayush, A., Readnour, L., Solomon, K. V., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+fast+organic+extraction-precipitation+method+for+improved+purification+of+elastin-like+polypeptides+that+is+independent+of+sequence+and+molecular+weight%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of a fast organic extraction-precipitation method for improved purification of elastin-like polypeptides that is independent of sequence and molecular weight.</a> Biomacromolecules. 22 (5), 1990-1998 (1990).</li>
<li>Darji, S., Aayush, A., Estes, K. M., Strock, J. D., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+mechanism+of+elastin-like+polypeptide-enzyme+fusion+stabilization+in+organic+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Unravelling the mechanism of elastin-like polypeptide-enzyme fusion stabilization in organic solvents.</a> Biomacromolecules. 25 (1), 272-281 (2024).</li>
<li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+chemistry+of+biological+free+energy+transduction+as+demonstrated+by+elastic+protein-based+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Physical chemistry of biological free energy transduction as demonstrated by elastic protein-based polymers.</a> J Phys Chem B. 101 (51), 11007-11028 (1997).</li>
<li>Guo, Y., Liu, S., Jing, D., Liu, N., Luo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+construction+of+elastin-like+polypeptides+and+their+applications+in+drug+delivery+system+and+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">The construction of elastin-like polypeptides and their applications in drug delivery system and tissue repair.</a> J Nanobiotechnology. 21, 418(2023).</li>
<li>Yi, A., Sim, D., Lee, S. -B., Sarangthem, V., Park, R. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+bioengineered+elastin-like+polypeptide-based+system+for+targeted+gene+delivery+in+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Biosyst%22%5BJournal%5D)">Application of bioengineered elastin-like polypeptide-based system for targeted gene delivery in tumor cells.</a> Biomater Biosyst. 6, 100050(2022).</li>
<li>Clement, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+the+recombinant+expression+and+chemical+synthesis+of+a+short+cysteine-rich+insecticidal+spider+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Venom+Anim+Toxins+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison between the recombinant expression and chemical synthesis of a short cysteine-rich insecticidal spider peptide.</a> J Venom Anim Toxins Trop Dis. 21, 19(2015).</li>
<li>Miranda, L. P., Alewood, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+chemical+synthesis+of+peptides+and+small+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accelerated chemical synthesis of peptides and small proteins.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (4), 1181-1186 (1999).</li>
<li>Eweje, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+protein+nanoparticles+for+cytosolic+delivery+of+nucleic+acids+and+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Self-assembling protein nanoparticles for cytosolic delivery of nucleic acids and proteins.</a> Nat Biotechnol. , (2025).</li>
<li>Hassouneh, W., Christensen, T., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides+as+a+purification+tag+for+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides as a purification tag for recombinant proteins.</a> Curr Protoc Protein Sci. 6 (11), 1-16 (2010).</li>
<li>Yakhnin, A. V., Vinokurov, L. M., Surin, A. K., Alakhov, Y. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+fluorescent+protein+purification+by+organic+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Green fluorescent protein purification by organic extraction.</a> Protein Expr Purif. 14 (3), 382-386 (1998).</li>
<li>Aayush, A., Darji, S., Estes, K. M., Yeh, E., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+elastin-like+polypeptide-based+nucleic+acid+delivery+system+targeted+to+EGFR%2B+bladder+cancer+cells+using+a+layer-by-layer+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of an elastin-like polypeptide-based nucleic acid delivery system targeted to EGFR+ bladder cancer cells using a layer-by-layer approach.</a> Biomacromolecules. 25 (9), 5729-5744 (2024).</li>
<li>Christensen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+order+controls+expression+level+and+activity+of+elastin-like+polypeptide+fusion+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Fusion order controls expression level and activity of elastin-like polypeptide fusion proteins.</a> Protein Sci. 18 (7), 1377-1387 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-Mercaptoetanol</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0710</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>30% Acrilamida/Bis-acrilamida</td><td>TCI</td><td>A3218</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Acetona</td><td>Fisher Scientific</td><td>A949</td><td>Disolvente orgánico</td></tr><tr><td>Acetonitrilo</td><td>Fisher Scientific</td><td>A996</td><td>Disolvente orgánico</td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Bio-Oro Biotecnología</td><td>A-301-25</td><td>Antibiótico</td></tr><tr><td>APS (Persulfato de amonio)</td><td>Bio-Rad</td><td>1610700</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Butanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>L13171</td><td>Disolvente orgánico</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP118-500</td><td>Componente búfer de lisis</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Laboratorios de Descontaminación</td><td>UN1170</td><td>Disolvente orgánico</td></tr><tr><td>Acetato de etilo</td><td>Fisher Scientific</td><td>E195</td><td>Disolvente orgánico</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Productos de Investigación Internacional</td><td>G22020-0.5</td><td>Componente de medios de Terrific Broth (TB)</td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144SI-212</td><td>Componente búfer de lisis</td></tr><tr><td>Tinción instantánea de Coomasie</td><td>Abcam</td><td>ab119211</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Bio-Oro Biotecnología</td><td>12481C25</td><td>Componente de expresión proteica</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A451-1</td><td>Disolvente orgánico</td></tr><tr><td>K2HPO4 (Monobásico de fosfato de potasio)</td><td>Ciencia de los Wards</td><td>470302-246</td><td>Parte 2 Componente de búfer</td></tr><tr><td>KH2PO4 (Dibásico fosfato de potasio)</td><td>Ciencia de los Wards</td><td>470302-254</td><td>Parte 2 Componente de búfer</td></tr><tr><td>L-Proline</td><td>Productos de Investigación Internacional</td><td>P5200-500.0</td><td>Componente de medios de Terrific Broth (TB)</td></tr><tr><td>Lisozima</td><td>Bio-Oro Biotecnología</td><td>L-040-1</td><td>Componente búfer de lisis</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A452</td><td>Disolvente orgánico</td></tr><tr><td>Búfer de muestra nativo</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0738</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Escalera de proteínas</td><td>Bio-Oro Biotecnología</td><td>P008-500</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Amortiguador de gel de resolución</td><td>Bio-Rad</td><td>1610798</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Sodim Dodeciil Sulfato (SDS)</td><td>Termo Científica</td><td>J18220-36</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-500</td><td>Componente búfer de lisis</td></tr><tr><td>Buffer de gel apilado</td><td>Bio-Rad</td><td>1610799</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>1610801</td><td>Componente SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP-152</td><td>Componente búfer de lisis</td></tr><tr><td>Triptona</td><td>Productos de Investigación Internacional</td><td>T60065-1000.0</td><td>Componente de medios de Terrific Broth (TB)</td></tr><tr><td>Extracto de levadura</td><td>Productos de Investigación Internacional</td><td>Y20025-1000.0</td><td>Componente de medios de Terrific Broth (TB)</td></tr></tbody></table>

purificación eficiente de polipéptidos similares a la elastina (elps) de e. coli mediante un método de extracción y precipitación a base de disolventes orgánicos

Efficient Purification of Elastin-Like Polypeptides (ELPs) from E. coli Using an Organic Solvent-based Extraction and Precipitation Method

Tras pasar por las fases finales del protocolo, el siguiente paso es la visualización del resultado extracción-precipitación mediante análisis SDS-PAGE y tinción azul Coomassie. Cuando hay un paso de lisis antes de la extracción orgánica, debe ser visible una banda ELP prominente. En el caso de ELP-I-Cm2, esta banda aparece a 100 kDa (Figura 3A).
El cribado de diferentes combinaciones de disolventes orgánicos demostró eficiencias variables en la extracción (<stron...

Purificación eficiente de polipéptidos similares a la elastina (ELPs) de E. coli mediante un método de extracción y precipitación a base de disolventes orgánicos

Elastin-like polypeptides (ELP) are engineered biopolymers built from repetitive pentapeptide sequences that mimic motifs found in mammalian tropoelastin. ...

efficient-purification-elastin-like-polypeptides-elps-from-e-coli

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Aquí se describe un protocolo para la purificación de gran actividad Hsp104, un AAA hexameric + proteína de la levadura, que se acopla la hidrólisis de ATP con el desglose de proteínas. Este esquema se aprovecha de una construcción de His6-etiquetados para la purificación de afinidad...

La purificación de Hsp104, una proteína Disaggregase

En este vídeo, demostramos la cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa para purificar péptidos de una mezcla de lisado de proteínas digeridas. A continuación, estos péptidos purificados se liofilizan y se almacenan para aplicaciones posteriores. El análisis de péptidos puede ayudar a comprender la mecánica involucrada en la señalización celular y el cáncer.

Purificación de péptidos: una técnica basada en RP-HPLC para extraer péptidos de lisados de proteínas digeridas

Polipéptidos elastina-como son biopolímeros de estímulo sensible con aplicaciones que van desde la purificación de proteínas recombinantes para la administración de fármacos. Este protocolo describe la purificación y caracterización de polipéptidos tipo elastina y sus péptidos o proteínas fusiones a partir de Escherichia coli utilizando su comportamiento de transición de fase la temperatura de solución crítica inferior como una alternativa simple a cromatografía.

La purificación no cromatográfico de polipéptidos recombinantes Elastina-como y sus fusiones con Péptidos y Proteínas de<em&gt; Escherichia coli</em

Las tecnologías recombinantes han permitido a los diseñadores de materiales crear nuevas proteínas artificiales con funcionalidades personalizadas para aplicaciones de ingeniería de tejidos. Por ejemplo, las proteínas de la matriz extracelular artificial pueden diseñarse para incorporar dominios estructurales y biológicos derivados de las MEC nativas. Aquí, describimos la construcción y purificación de proteínas aECM que contienen repeticiones similares a la elastina.

Diseño y Construcción de Artificial matriz extracelular (AECM) Las proteínas de<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Para la piel Ingeniería de Tejidos

El protocolo proporciona una metodología para solubilizar lodo granular aeróbico con el fin de extraer los polímeros extracelulares de alginato-como (ALE).

La extracción de sustancias poliméricas extracelulares estructural de lodo granular aerobio

Hidrogeles de ingeniería de la proteína recombinantes son ventajosos para el cultivo celular 3D ya que permiten completa afinabilidad de la espina dorsal del polímero y por lo tanto, el microambiente de la célula. Aquí, describimos el proceso de purificación de proteína recombinante como elastina y su aplicación en la encapsulación de la célula de hidrogel 3D.

Producción de la proteína elastina como hidrogeles para encapsulación y el Immunostaining de células en 3D

Aquí se presentan protocolos para la creación de pequeñas vesículas unilamelares basadas en péptidos capaces de crecer. Para facilitar la producción vesiculo del péptido de membrana, estas vesículas están equipadas con un sistema de transcripción-traducción y el plásmido codificante de péptidos.

En Vesiculo Síntesis de Precursores de Membrana De péptido para crecimiento de la vesícula Autónoma

En la interfaz de disolventes orgánicos y acuosos, las proteínas anfifílicas a medida similares a la elastina se ensamblan en estructuras supramoleculares complejas como vesículas, fibras y coacervados desencadenados por parámetros ambientales. Los protocolos de montaje descritos producen compartimentos basados en membranas de proteínas (PMBC) con propiedades ajustables, lo que permite la encapsulación de varias cargas.

Montaje dirigido de proteínas similares a la elastina en estructuras supramoleculares definidas y encapsulación de carga in Vitro

Las bacterias secretan vesículas extracelulares (EV) de tamaño nanométrico que transportan moléculas biológicas bioactivas. La investigación EV se centra en comprender su biogénesis, su papel en las interacciones y enfermedades microbio-microbio y huésped-microbio, así como sus posibles aplicaciones terapéuticas. Se presenta un flujo de trabajo para el aislamiento escalable de vehículos eléctricos de varias bacterias para facilitar la estandarización de la investigación de vehículos eléctricos.

Aislamiento escalable y purificación de vesículas extracelulares de Escherichia coli y otras bacterias

El presente protocolo describe la precipitación de proteínas a base de disolventes en condiciones controladas para una recuperación y purificación robustas y rápidas de muestras de proteoma antes de la espectrometría de masas.

Precipitación de proteínas a base de disolventes orgánicos para una purificación robusta del proteoma antes de la espectrometría de masas

Este artículo describe una metodología para sobreexpresar Nsp15 recombinante, una nucleasa tóxica, en un sistema de expresión C41 (DE3), seguida de la purificación de la proteína marcada utilizando cromatografía de afinidad y exclusión de tamaño. Estos protocolos se pueden adaptar para otras proteínas tóxicas desafiantes.

Sobreexpresión y purificación de una nucleasa tóxica de Escherichia coli

Aprende a purificar polipéptidos similares a la elastina de E. coli mediante extracción con disolventes orgánicos. Este método rápido y escalable conserva la actividad de las proteínas de fusión y controla los endotoxinas para aplicaciones biomédicas.

Purificación eficiente de polipéptidos similares a la elastina (ELPs) de E. coli mediante un método de extracción y precipitación a base de disolventes orgánicos (Video) | JoVE Journal

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