Incorporando cabeças de drosophila adultas em parafina: preparando tecido para histologia

Abstract

Fonte: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila . J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve como incorporar cabeças de Drosophila em parafina usando o método de colarinho, uma técnica que prepara cabeças de mosca para seção serial. As seções de parafina são usadas para exames histológicos da anatomia do cérebro e para a avaliação da neurodegeneração. O protocolo em destaque demonstra como várias moscas podem ser processadas em uma preparação, aumentando assim a eficiência do tempo e minimizando artefatos experimentais.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Sunderhaus e Kretzschmar, Histologia em Massa para Quantificar a Neurodegeneração em Drosophila, J. Vis. Exp. (2016). 1. Fixação da Cabeça em Colares e Incorporação em Parafina NOTA: Todas as etapas do processo de fixação devem ser feitas em um capô de fumaça. O metilbenzoato, embora não represente um risco para a saúde, tem um odor altame…

Representative Results

Figura 1: Seções de Série parafina. A) Utilizando o método da coleira, moscas experimentais e de controle podem ser processadas como uma amostra, enfiando-as em uma coleira. Moscas oculis sem olhos são inseridas para orientação (setas). B) Esquema mostrando a orientação das cabeças de mosca no colarinho. C) Nesta imagem, seções de diferentes cabeças …

Materials

Collar	Genesee Scientific	TS 48-100	We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding	Household store		The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish	Fisher Scientific Company	08-762-3
Ether	Fisher Scientific Company	E138-1
Ethanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroform	Fisher Scientific Company	C298-500
Glacial Acetic Acid	Fisher Scientific Company	A38-212
Methylbenzoate	Fisher Scientific Company	M205-500	Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax	Fisher Scientific Company	T565	Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath