Protocol
1. H. pylori vekst i ulike Betingelser Iron Tilgjengelighet og Co-kultur med menneskelige Gastric Epitelceller
- Velg H. pylori belastning PMSS1 for disse studiene fordi den har en intakt CAG patogenitet øya og uttrykker et fungerende type IV sekresjon system. Også bruke en isogen bur mutant (PMSSI Δ Cage) som en negativ kontroll. Dyrke bakteriene på TSA-plater supplert med 5% saueblod (blodagarplater) i 24 timer ved 37 ° C i nærvær av 5% CO2.
MERK: Forbered reagenser og montere materialer som beskrevet i Materialer og utstyr Table. Sluttkonsentrasjoner for hver reagens er oppført i parentes. - Skrap bakterier fra platen ved hjelp av en steril bomull-tipped applikator og vaksinere inn modifisert Brucella buljong fremstilt av komponenter (se Materialer og utstyr Table) og supplert med kolesterol. Inkuber kulturer over natten ved 37° C i romluft supplert med 5% CO 2 med rysting ved 200 omdreininger per minutt (rpm).
MERK: Kolesterol blir brukt i stedet for føtalt bovint serum på grunn av det faktum at serum er komplisert; inneholder en rekke kilder til næringsstoffer jern som heme som forårsaker variasjon i resultatene. - På dagen for bakteriell dyrking, seede AGS humane gastriske epitel-celler (ATCC CRL-1739) på poly-D-lysin-behandlede dekkglass i 12-brønners plater (ca. 1 x 10 5 celler per brønn).
- Den følgende dag, bakteriekulturer fortynnet til en OD600 på 0,3 i modifisert Brucella kjøttkraft alene eller supplert med 100 uM FeCl3, 200 uM dipyridyl (a jern-chelator syntetisk), eller 200 pM dipyridyl pluss 250 uM FeCl3. Disse kulturene inkuberes i 4 timer ved 37 ° C i romluft supplert med 5% CO 2 med rysting ved 200 rpm.
- Sentrifuger bakterier ved 1000 xg å samle celler og fjerne Supernatantene før resuspending jegn et like stort volum ferskt modifisert Brucella buljong supplert med kolesterol. Mål OD600 av kulturen (OD600 = 1,0 = 5,5 x 10 8 celler / ml) og tilsett bakterier til epitelcellene i en multiplisitet for infeksjon (MOI) på 20: 1. Utføre serielle fortynninger og platebakterieceller på blodagarplater for å vurdere bakteriecellelevedyktighet.
- Inkuber H. pylori og AGS humane gastriske epitel-celler ko-kulturer i 4 timer ved 37 ° C i nærvær av 5% CO2 i statiske betingelser før utføring scanning elektronmikroskopi (SEM) prøvepreparering.
2. SEM Prøvepreparering å Visual H. pylori Cag-T4SS Pili
- Fjern H. pylori og AGS co-kulturer fra inkubatoren og decant kultursupernatant (lagre for IL-8 ELISA). Vask forsiktig tre ganger med 0,05 M natrium kakodylat-buffer (pH 7,4). Fiks prøver for 2-4 timer ved værelsestemperatur i en oppløsning av 2,0% paraformaldehyd, 2,5% Glutaraldehyd og 0,05 M natrium-kakodylat-buffer. Etter primær fiksering, vaskes prøvene tre ganger med 0,05 M natrium kakodylat-buffer.
- Utfør sekundærfiksering ved hjelp av 0,1% osmiumtetroksyd i 0,05 M natriumkakodylat buffer i to min feste skritt sekvensiell 10. Etter sekundær fiksering, vaskes prøvene tre ganger med 0,05 M natrium kakodylat-buffer.
- Etter primær og sekundær fiksering, dehydrerer prøvene ved sekvensiell vasking med økende konsentrasjoner av etanol per tabell 1.
- Etter dehydrering etanol, utfører tre sekvensielle vaskinger med flytende karbondioksid. Deretter tørre prøver på et kritisk punkt ved hjelp av et kritisk punkt tørketrommel ved en temperatur på 31,1 ° C og trykk på 1073 PSI.
- Mount Dekk på aluminium SEM prøve stubber og male med en tynn linje av kolloidalt sølv på prøven kanten for å oppnå en hensiktsmessig jording og unngå å lade under SEM bildebehandling.
- Frakk prøver med 5 nm fragull-palladium bruker en frese pels maskin for å øke utvalget sekundærelektron signal og kant effekt.
3. Imaging Parametere for High Resolution SEM Analyser
- Vis eksempler med Feltet-Emission Gun Scanning Electron Microscope (FEG-SEM).
- Bildet i høyvakuum modus ved en arbeidsavstand på 5-10 mm.
- Sett akselererende spenning til 5 kV.
- Sett spot størrelse til 2-2,5.
- Vipp utvalget mellom 15-25 grader for å oppnå en bedre visning av host-patogen grensesnitt.
- Prioriter avbilding adherente bakterier til kantene av de epiteliale celler for høy forstørrelse visning, da disse områder av verts-patogen interaksjon blir anriket for pili-dannende bakterier.
4. Statistiske analyser for å evaluere Pili Kvantifiseringen
- Analyser H. pylori Cag-T4SS pili ved hjelp ImageJ programvare for å kvantifisere antallet pili / cellen så vel som prosent av celler som oppviser den piliated phenotype per instruksjonene nedenfor.
- Åpne Micrograph filer i ImageJ programvare. Pili identifisere strukturer som er dannet mellom det bakteriecelle og vertcelle, med jevn bredde (10-13 nm) og lengde (60-150 nm).
MERK: pilus strukturen er til stede på WT bakteriestammer, men fraværende på isogene stammer slik som Δ bur mutante stammer, som rommer en inaktivering i genet som koder for de store krefter som ATPase type IV sekresjon pilus sammenstillingen. - Kalibrere måleverktøyet ved å tegne en linje med den rette linjen verktøyet og deretter klikke på "Analyze" -kategorien. Velg "Set Scale" fra rullegardinmenyen, og angi forstørrelse bar verdi inn i boksen merket "kjent avstand" og sett lengdeenhet til riktig innstilling (nm). Klikk "OK".
- Mål Cag-T4SS pili lineært verktøy for å tegne over lengden eller bredden på pilus og trykk deretter "Ctrl-M" for å måle hver pilus. Observere en dialogboks med de målte verdiene. Skriv ned disse verdiene eller kopiere og lime inn i et regnearkprogram.
- Bruk lengde og bredde parametere tidligere etablert 24, se bort funksjoner som ikke passer profilen til Cag-T4SS. Deretter kvantifisere antall pili basert på verdier som er innenfor 10-13 nm bredde og 60-150 nm lengde cutoffs de.
- Analyser kvantifisering av pili statistisk ved tosidige Student t test med GraphPad Prism programvare.
5. Valgfritt: Evaluering av IL-8 sekresjon å korrelere med pilus Produksjon
- Bruke Supernatantene fra trinn 2.1, utføre en IL-8 ELISA henhold til produsentens anvisninger med settet (Se Materialer og utstyr Table).
- Analyser IL-8 utskilles av vertsceller, og beregne prosent IL-8 induksjon med hensyn til WT PMSS1 dyrket i medium alene. Utføre statistisk analyse ved hjelp av tosidige Student t test med GraphPad Prism såftware.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I denne rapporten har vi demonstrert at betingelser varierende tilgjengeligheten av jern har kapasitet til å modulere H. pylori Cag-T4SS pilus biogenese på verten patogen grensesnittet. Når dyrket i medium alene, H. pylori danner et gjennomsnitt på 3 pili / cellen. Når H. pylori er dyrket i jern utarme forhold (ved bruk av det syntetiske chelator dipyridyl) som er sub-hemmende overfor bakterievekst (figur 1), bakterier produserer mange Cag-T4SS pili (~ 7 pili / cellen) når ko-dyrket med humane gastriske celler (Figur 2). Motsatt, når en eksogen kilde for nærings jern er tilstede, er dannelsen av Cag-T4SS pili trykt (mindre enn 1 pilus / FE celle i prøven, mindre enn 1 pilus / celle i FE + DIP-prøve) (figur 2). Kvantifisering av pili på verten-patogen grensesnittet avslører at i betingelser med jernbegrensning, H. pylori viser en to-fold økning i Cag-T4SS pili (p <0.000 1), og de prosentvise piliated celler øker med 11% (p <0,05) sammenlignet med celler dyrket i medium alene (figur 3). Interessant er aktiviteten av Cag-T4SS, som målt ved verts IL-8-sekresjon, forbedret 107% under betingelser med jernbegrensning, og 49% undertrykt under betingelser med overskudd av jern tilgjengelighet sammenlignet med medium alene (p = 0,03 og p < 0,001, henholdsvis) et resultat som støtter SEM-dataene. Men pili dimensjoner forblir konsistente blant alle forhold av jern tilgjengelighet (figur 4). Videre gjør tilgjengeligheten av jern ikke endre biogenese av pili på overflaten av et bur-mutant, og heller ikke endrer den denne isogene derivat evne til å indusere en IL-8 respons fra vertsceller, støtter hypotesen om at strukturene vist er faktisk Cag-T4SS og ikke en ekstra urelatert overflatestruktur.
n "src =" / files / ftp_upload / 52122 / 52122fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Fig. 1: Bakteriell levedyktighet bestemmes i forskjellige tilstander av tilgjengeligheten av jern H. pylori var dyrket i modifisert Brucella buljong alene (Medium Alone), eller suppleres med 100 mikrometer FeCl3 (FE), 200 mikrometer dipyridyl (DIP), eller 200 mikrometer dipyridyl pluss 250 mikrometer FeCl3 (FE + DIP). Bakterier ble serielt fortynnet og sådd ut på bakteriologiske medium før inkubering i 2 dager ved 37 ° C i nærvær av 5% CO2. Kolonier ble tellet og kolonidannende enheter / ml (CFU / ml) ble beregnet. Linjene indikerer gjennomsnitt av tre uavhengige eksperimenter +/- SEM. Behandling med DIP, FE, eller FE + DIP ikke vesentlig endre bakteriell levedyktighet.
Figur 2: High resolution scanning elektronmikroskopi-analyser av H. pylori Cag-T4SS pili. Bakterier ble dyrket i A) medium alene, B) medium supplementert med 100 uM FeCl3, C) medium supplert med 200 pM dipyridyl, eller D) medium supplert med 200 pM dipyridyl pluss 250 uM FeCl3 før ko-kultur med AGS human mage celler. Pilene angir Cag-T4SS pili dannet på host-patogen grensesnitt. Prøvene ble analysert ved høyoppløselig scanning elektronmikroskopi for å vurdere Cag-T4SS biogenesis. Betingelser for lavt jern tilgjengeligheten øke utbredelsen av Cag-T4SS pilus formasjon, mens forholdene i overkant tilgjengelig næringsstoff jern undertrykke Cag-T4SS pilus formasjon.
Figur 3: Kvantifisering av pili / celle og prosent piliated celler dyrket i ulikebetingelsene for tilgjengeligheten av jern. Bakterier ble dyrket i modifisert Brucella buljong alene (medium alene), eller i medium supplementert med 100 uM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), eller 200 pM dipyridyl pluss 250 uM FeCl3 (FE + DIP) før co- kultur med menneskelige mage epitelceller. Prøvene ble analysert ved høyoppløselig scanning elektronmikroskopi og pili ble nummerert hjelp ImageJ programvare. A) spredningsplott av pili per celle (* p <0,0001, sammenlignet med medium alene) og B) Søylediagram som viser prosent av piliated celler (* p <0,05 sammenlignet med medium alene) avledet 60 til 112 celler per kultur tilstand avledet fra tre separate biologiske eksperimenter.
Figur 4: pilus dimensjoner målt fra celler dyrket i forskjellige tilstander av jern tilgjengelighet. Bacteria ble dyrket i modifisert Brucella buljong alene (medium alene), eller i medium supplementert med 100 uM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), eller 200 pM dipyridyl pluss 250 uM FeCl3 (FE + DIP) før co- kultur med menneskelige mage epitelceller. Prøvene ble analysert ved høyoppløselig scanning elektronmikroskopi og pili dimensjoner ble målt ved hjelp ImageJ programvare. A) pilus bredden er et gjennomsnitt på 13,1 +/- 2,4 nm blant alle forhold. B) pilus lengde er et gjennomsnitt på 75,8 +/- 16,0 nm blant alle forhold. Ingen signifikant forskjell i pilus dimensjoner er sett i de forskjellige betingelser med jern tilgjengelighet.
Supplerende Figur 1: Høy oppløsning scanning elektronmikroskopi analyser av H. pylori CAGE mutant i ulike tilstander av jern tilgjengelighet. Bakterier ble dyrket i A) medium supplementert med 100 uM FeCl3, B) medium supplert med 200 pM dipyridyl (DIP) eller C) medium supplert med 200 pM dipyridyl (DIP) pluss 250 uM FeCl3 før ko-kultur med AGS humane gastriske celler. Prøvene ble analysert ved høyoppløselig scanning elektronmikroskopi for å vurdere Cag-T4SS biogenesis. Betingelser for lavt eller høyt jern ikke modulere noen Cag-uavhengig pilus biogenesis, støtter hypotesen om at strukturene visualisert i figur 2 er Cag-T4SS pili.
Opplysning Figur 2: ELISA-analyse av verts IL-8-sekresjon i respons til bakterier som var dyrket i varierende betingelser med jern tilgjengelighet. Wild-type (hvite søyler) eller buret mutant (grå søyler) bakteriene ble dyrket i modifisert Brucella buljong alene (Medium Alone), eller medium supplert med 100 mikrometer FeCl3 (FE), 200 mikrometer dipyridyl (DIP), eller 200 mikrometer dipyridyl pluss 250 uM FeCl3 (FE + DIP) før co-kultur med menneskelige mage epitelceller. Jern restriksjons resulterer i øket IL-8, En rekke svar som er avhengig Cag-T4SS aktivitet. Linjene indikerer middelverdien +/- SEM, avledet fra tre separate biologiske eksperimenter. (* P <0,05 sammenlignet med PMSS1 dyrket i medium alene).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Jern er et essensielt mikronæringsstoff for de fleste former for liv, inkludert bakterielle patogener. I et forsøk på å begrense levedyktighet av invaderende mikroorganismer, virveldyr verter beslag næringsstoff jern i en prosess som kalles "ernæringsmessig immunitet" 18. Som svar på dette har bakterielle patogener utviklet seg til å bruke jern som en global signalmolekyl til å oppfatte sine omgivelser og regulere utarbeidelsen av virulens funksjoner som jern oppkjøp systemer, giftstoffer og toksiner sekresjon maskiner 19,20.
H. pylori krever mikronæringsstoffer slik som jern, sink og magnesium til å vokse 22 og kan bruke alternative jernkilder som heme, hemoglobin, transferrin og laktoferrin 23. H. pylori, som de fleste vellykkede patogener, har utviklet et bredt repertoar av virulensfaktorer å hjelpe det skattekart næringsstoff jern fra verten 21. En virulensfaktor, CagA, effektor molecule av Cag-T4SS, er implisert i reruting transferrin fra den basolaterale side av polariserte celler til den apikale overflate der den lett kan brukes av bakterieceller som en næringskilde jern og markeds 15 replikasjon. Således virker det en intuitiv evolusjonær strategi for å fremme sekresjon av CagA under forhold med lavt jern tilgjengelighet.
H. pylori Cag-T4SS er en viktig bakteriell organelle, på grunn av de proinflammatoriske responser vertscelle det utløser. Virkningene av Cag-T4SS har blitt godt undersøkt i begge co-kulturer og dyremodeller av infeksjon. Men studier av makromolekylstruktur og sammensetning av dette toksinet sekresjon systemet blitt hindret av mangelen på høyoppløselige bilde protokoller. Våre tidligere publiserte rapporter som studerer Cag-T4SS har rapportert et gjennomsnitt på fire Cag-T4SS pili per bakteriecellen ved høyoppløselig elektronmikroskopi analyser 24. Vår forbedret metode giren robust avbildningsteknikk for å visualisere Cag-T4SS ved hjelp av en kultur teknikk som fremmer produksjonen av denne funksjonen på overflaten av bakteriecellen. Utnyttelse av kultur teknikker i forbindelse med høy oppløsning field-utslipp pistol scanning elektronmikroskop er kritisk for denne bildeprotokollen. To-gangers anrikning av Cag-T4SS overflate funksjon er en betydelig økning for undersøkere som er interessert i å utføre immunhistokjemiske analyser som immunofluorescens eller immunoutfellingsstudier teknikker for ytterligere å karakterisere den subcellulære beliggenheten eller sammensetning av Cag-T4SS. Når den høyoppløselige elektronmikros avbildning av Cag-T4SS har blitt mestret, er det også mulig å utvikle andre programmer, for eksempel immungull-merking, for å bestemme plasseringen av bakterielle proteiner med hensyn til Cag-T4SS pilus 25.
En begrensning av vår teknikk er det faktum at undersøkeren er fortsatt begrenset til USIng et ko-kultur-system for visualisering av Cag-T4SS. I et enkelt felt, bare et delsett av H. pylori under vanlige kulturbetingelser danner disse strukturene (omtrent 50-70 prosent, se figur 3 panel B). Så mange celler i et felt vil være ikke-piliated. Det er ikke kjent hvorfor disse subpopulasjoner eksisterer på samme sted, men disse cellene er alltid sto i både kvantifisering av pili / cellen og prosent av celler med pili på overflaten. Ettersom CAG-T4SS er bare observert ved bakteriell vert-grensesnitt, primære og sekundære feste trinnene i SEM prøvepreparering, er kritiske for bevaring av både proteinholdige strukturer og membranene i eukaryote og prokaryote celler. Imidlertid kan over-fiksering skje hvis feste trinn utføres lenger enn skissert, eller om løsningene ikke er nylaget. Hvis over-fiksering skjer, vil prøvene har en steinete utseende sett under SEM og Cag-T4SS vil bli maskert av dette. Å troubleshoot, gjenta SEM prøvepreparering bruke mindre konsentrerte fiksativ og / eller kortere tid inkubert i nærvær av fikseringsmiddel.
Den ko-kultursystemet gjør også biokjemiske karakteristikk (slik som massespektrometri analyser) tungvint på grunn av forurensning av store mengder av vertsproteiner. Imidlertid forstå de molekylære mekanismene som regulerer produksjonen av denne bakterie sekresjon systemet kan til slutt føre til nye teknikker som vil utløse Cag-T4SS pilus dannelse i fravær av vertsceller. Dette vil gi betraktelig bedre isolering og rensing teknikker for biokjemiske analyser.
I konklusjonen, rapporterer vi at vilkårene for begrenset tilgjengeligheten av jern resultat i økt produksjon av H. pylori Cag-T4SS som kan visualiseres ved høyoppløselig scanning elektronmikroskopi teknikker. Vi rapporterer også jernavhengige undertrykkelse av denne overflaten funksjonen på host-patogen interface. Denne analysen kan optimaliseres og anvendes for en rekke bakterielle patogener som danner jernregulerte toksin-sekreter og er bredt anvendelig på en rekke vert-mikrobe interaksjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Modified brucella broth | |||
| Peptone from casein (10 g/L) | Sigma | 70172 | |
| Peptic digest of animal tissue (10 g/L) | Sigma | 70174 | |
| Yeast extract (2 g/L) | Sigma | 92144 | |
| Dextrose (1 g/L) | Sigma | D9434 | |
| Sodium chloride (5 g/L) | Thermo Fisher | S271-10 | |
| Cholesterol (250X) (4 ml/L) | Life Technologies | 12531018 | |
| Ferric chloride (100 or 250 uM) | Sigma | 157740-100G | |
| Dipyridyl (200 uM) | Sigma | D216305-100G | |
| Modified RPMI | |||
| RPMI+HEPES (1X) | Life Technologies | 22400-121 | |
| Fetal bovine serum (100 ml/L) | Life Technologies | 10438-026 | |
| Electron Microscopy Preparation | |||
| Paraformaldehyde (2.0% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 15713 | |
| Gluteraldehyde (2.5% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 16220 | |
| Sodium cacodylate (0.05 M) | Electron Microscopy Sciences | 12300 | |
| Osmium tetroxide (0.1% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 19150 | |
| Ethanol (absolute) | Sigma | E7023 | |
| Colloidal silver paint | Electron Microscopy Sciences | 12630 | |
| SEM sample stubs | Electron Microscopy Sciences | 75220 | |
| Coverslips | Thermo Fisher | 08-774-383 | |
| IL-8 Secretion Evaluation | |||
| Quantikine IL-8 ELISA kit | R&D Systems | D8000C |
References
- Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).
- Sycuro, L. K., et al. Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization. Cell. 141 (5), 822-833 (2010).
- Kodaman, N., et al. Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).
- Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis. FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).
- Fischer, W. Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus. FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).
- Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion. Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).
- Bourzac, K., Guillemin, K. Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion. Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).
- Bronte-Tinkew, D. M., et al. Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo. Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).
- Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17 (2012).
- Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system. Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).
- Cover, T. L., Peek, R. M. Jr Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer. Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).
- Queiroz, D. M., et al. Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children. PLoS One. 8 (2), 57420 (2013).
- Harris, P. R., et al. Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency. J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).
- Noto, J. M., et al. Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans. J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).
- Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface. PLoS Pathog. 7 (5), (2011).
- Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis. J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).
- Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes. Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).
- Cassat, J. E., Skaar, E. P.
- Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. Host-pathogen interactions in urinary tract infection. Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).
- Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression. J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).
- Mobley, H. L. Helicobacter pylori factors associated with disease development. Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).
- Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined. J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
- Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media. Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).
- Shaffer, C. L., et al. Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface. PLoS Pathog. 7 (9), (2011).
- Barrozo, R. M., et al. Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori. PLoS Pathog. 9 (2), (2013).
