Summary
Minimamente invasiva constrição aórtica transversal (MTAC) conserva o essencial da constrição aórtica transversal regulares (TAC), eliminando o uso de um ventilador com intubação traqueal. Ele revela-se um método altamente desejável para os estudos de alto rendimento sobre a sobrecarga do ventrículo esquerdo, particularmente em estudos translacionais.
Abstract
Minimamente invasiva constrição da aorta transversal (MTAC) é um método mais conveniente para a constrição da aorta transversal em ratinhos que constrição padrão de tórax aberto transversal da aorta (TAC). Embora a constrição da aorta transversal é um método altamente funcional para a indução de alta pressão no ventrículo esquerdo, é um processo mais difícil e demorado devido ao seu uso de ventilação artificial com entubação traqueal. TAC é muitas vezes também menos de sobrevivência, como o método mais recente, MTAC, nem exige o corte das costelas e dos músculos intercostais nem intubação traqueal com uma configuração de ventilação. Em MTAC, por oposição ao de uma toracotomia para acesso à cavidade torácica, o arco aórtico é alcançado através de uma incisão na linha média anterior no pescoço. A tireóide é puxado para trás para revelar o entalhe esternal. O esterno é posteriormente reduzido para o segundo nível de costela, e o arco aórtico é alcançado simplesmente através da separação dos tecidos conjuntivos e timo. A partir deHá, um fio de sutura pode ser enrolado em torno do arco e amarrado com um espaçador, e em seguida, o corte do esterno e a pele pode ser fechada. MTAC é uma maneira muito mais rápida e menos invasiva para induzir hipertensão ventricular esquerda e permite a possibilidade de estudos de alto rendimento. O sucesso da constrição pode ser verificado usando-alta frequência ecocardiografia trans-torácica, especialmente Doppler colorido e pulsátil Doppler, para determinar as velocidades de fluxo do arco aórtico e à esquerda e artérias carótida direita, a dimensão dos vasos sanguíneos, e a função ventricular esquerda e morfologia. A constrição sucesso também irá desencadear alterações histopatológicas significativas, tais como hipertrofia das células do músculo cardíaco com fibrose intersticial e perivascular. Aqui, o procedimento de MTAC é descrita, demonstrando como as mudanças de fluxo resultantes nas artérias carótidas podem ser examinados com ecocardiografia, morfologia, e as alterações histopatológicas no coração.
Introduction
O objetivo geral deste artigo é demonstrar como transversal constrição aórtica (TAC) em ratos podem ser modificados para produzir uma cirurgia mais simples e mais conveniente. TAC foi introduzido pela primeira vez em 1991 1 e permitiu que os biólogos moleculares para estudar as vias celulares e moleculares que levam à hipertrofia no ventrículo esquerdo e insuficiência cardíaca, particularmente em pequenos animais com genomas manipuladas 2, 3, 4, 5, 6. Apesar da sua eficácia em produzir a sobrecarga de pressão desejado, em última análise, a técnica está limitada pela dificuldade em realizar o procedimento, e a sua baixa taxa de sobrevivência. Um cirurgião realização TAC devem ser capazes de realizar a entubação endotraqueal, toracotomia, e usar a ventilação artificial, a fim de evitar o colapso do pulmão 1.
conteúdo "> Muitas vezes, um método simples e menos invasiva é desejada. Como consequência, minimamente invasiva constrição da aorta transversal (MTAC) foi concebido 3. Embora o resultado (especificamente, hipertrofia do ventrículo esquerdo) é o mesmo, o procedimento envolve um número significativamente menor aparelhos e menos danos para o animal. MTAC revela-se um método conveniente que tem uma taxa de sobrevivência maior, acima de 90%, e tem um tempo de operação de apenas 15 a 25 min. os raros casos de morte após cirurgia bem sucedida pode ser atribuída ao excesso constrição -tight do arco aórtico, resultando em sobrecarga ventricular esquerda tremenda e redução fatal de fornecimento de sangue para os órgãos críticos, tais como os rins.Após o processo é completado, a ecocardiografia pode ser usado para avaliar o sucesso de bandas e a morfologia e da função cardíaca. Um sistema de ultra-som de alta frequência pode ser utilizado para medir o diâmetro e as alterações no fluxo na esquerda e direitaartérias carótidas, para visualizar o arco aórtico constrição para medições de pico de velocidade de fluxo, e para determinar a espessura da parede do ventrículo esquerdo e parâmetros funcionais 7, 8. Após a eutanásia, os órgãos também podem ser recolhidos para estudos histopatológicos com hematoxilina e eosina e colágeno coloração Picrosirius, sendo este último particularmente útil para a observação de fibrose.
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Protocol
O protocolo segue as orientações da Comissão sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) da Universidade de Hong Kong.
1. Operação Preparação do Site
- Desinfectar o local da operação com álcool isopropílico 75%. Ajustar a temperatura da almofada de aquecimento a 37 ° C para evitar alterações no coração e taxas respiratórias do indivíduo animal.
- Use instrumentos cirúrgicos esterilizados num esterilizador gravidade deslocamento a 121 ° C durante 30 min ou por outros métodos apropriados.
- Aqui 2 - 4 agulhas de calibre 30 e curva-los com um suporte de agulha, como pode ser visto na Figura 1, para fazer uma ferramenta para a ligação e separação do tecido e para o uso como um retractor. Montar a agulha agora curvada sobre um aplicador de algodão para uso em cirurgia.
- Blunt uma agulha de calibre 27 e curvá-lo 90º com o suporte da agulha. Suavizar a ponta, esfregando uma superfície dura para fazer um espaçador de 0,4 mm na etapa ligadura.
- Anestesiar a 2 meses de idade, do sexo masculino, 22-25 g rato C57BL / 6N com uma cetamina apropriado e mistura de xilazina em relação ao peso corporal: 100 mg / kg + 10 mg / kg ip Confirme a anestesia com a pitada reflex cauda negativa .
- Remova o cabelo na região anterior do pescoço e no peito com uma aplicação de 2 a 3 min de creme depilatório. Retire o creme com água morna e um aplicador de algodão.
- Aplicar pomada oftálmica ou gel para os olhos do animal para evitar a secagem da córnea.
- Colocar o animal em uma almofada de aquecimento na posição supina e realizar monitoramento intra-operatório, tendo a certeza de manter a documentação apropriada a cada intervalo de 15 min.
- Use fita de papel cirúrgica para fixar as extremidades para a almofada de aquecimento, a fim de manter o animal na posição correcta durante a cirurgia.
- Desinfectar a pele alternadamente com álcool e solução de iodo-povidona três vezes.
- Use um dr estérilmacaco com um campo de funcionamento exposto a evitar a contaminação. Utilizar novas luvas estéreis para cada rato e, se necessário.
3. Ligadura Procedimento
- Abra a pele do rato na posição de linha média do pescoço e peito com um bisturi.
- Puxe a glândula tireóide para a cabeça, separando gentilmente tecidos conjuntivos com uma tesoura sem corte.
- Separar a camada muscular na traqueia na linha média em relação ambos os lados com as agulhas curvas.
- Usando a tesoura sem corte, corte do esterno para a segunda nervura (aproximadamente 5 mm). Abra o corte com uma válvula ou uma pinça curva.
- Separa-se os lóbulos timo um do outro e da parede torácica inferior, separando o tecido conjuntivo com a agulha curvada; o arco aórtico e duas artérias carótidas será claramente visível neste ponto.
- Coloque a agulha curvada sob o arco e perfurar entre a parede do vaso e do tecido conjuntivo, do outro lado por purulentahing a cabeça curvada para fora.
- Usando a agulha curva, puxar o fio de sutura 6-0 de monofilamento sob o arco aórtico.
- Coloque o espaçador no circuito e fixar a sutura no lugar com um duplo nó. Remover o espaçador suavemente.
- Confirmar uma constrição bem sucedida com a posição nó e cortar as extremidades da sutura.
- Feche a parede torácica utilizando 6/0 fio de seda com um padrão de sutura simples interrompido. Fechar a pele com uma sutura 6/0 mono filamento num teste padrão de sutura contínua.
Cuidados 4. Pós-operatório
- Aplicar a solução de iodo-povidona para o local de sutura e colocar o animal em uma gaiola pré-aquecido para a recuperação e acompanhamento pós-operatório.
- Injectar buprenorfina (0,05-0,1 mg / kg sc a cada 12 h) após o animal ter recuperado a consciência para aliviar a dor e proporcionar o mouse com alimentos moles apropriado.
- Devolver o animal para uma criança de 12 h de luz / quarto ciclo escuro após a recuperação completa.
5.Ecocardiografia: Confirmação da ligadura de sucesso e Medidas
- Depois de uma semana, anestesiar o rato previamente em tiras com 3-5% de isoflurano, por indução, e 1-1,5%, para manutenção, com uma taxa de 1 L / min de fluxo de oxigénio.
- Remova o cabelo do peito usando creme depilatório. Completamente remover o creme com água morna e um aplicador de algodão.
- Garantir o mouse na posição supina para a plataforma de manipulação animal, mantida a 37 ° C. Aplique gel eletrodo para as patas e gravá-los para o bloco com eletrodos.
- Aplique o gel de ultra-som para o peito do rato. Com uma sonda de 40 MHz MS550D e um sistema de ultra-som de alta frequência, realizar Doppler colorido e pulsátil Doppler de varrimento sobre as artérias carótidas direita e esquerda, bem como sobre o arco aórtico.
- Usando B-Mode, localize o ventrículo esquerdo. Usando M-Mode, as pressões sistólica e diastólica espessura da parede pode ser medido. Use Cine loja e quadro de loja para guardar dados e imagens conforme necessário.
- vocêcantar B-Mode, localizar a artéria carótida comum esquerda antes do ponto de ramificação. Use pulsada de onda e Doppler colorido para avaliar o fluxo. Repita com a artéria carótida direita em um ponto similar. Salvar as imagens no Cine loja e modos Quadro loja para analisar mais tarde.
- Inclinar a plataforma de manipulação de animais para a esquerda para que o mouse está na posição de decúbito esquerdo. Coloque a sonda no mouse, a 30 ° compensados a partir de uma posição paralela à cabeça na posição para-esternal e manipular X e Y para encontrar o arco aórtico.
- Localize a constrição. Usar um modo de Doppler a cores para fazer o local da constrição mais visível, como o sangue será que flui através de um canal estreito entre o ponto onde as duas artérias carótidas ramificar-se do arco aórtico.
- Use pulsada de onda e Doppler colorido para medir a velocidade do fluxo de pico. Use Cine loja e quadro de loja para guardar dados e imagens conforme necessário.
- Permitir que o animal se recuperar em uma almofada de aquecimento na posição prona.Devolver o animal para a gaiola original em um 12 horas de luz / quarto ciclo escuro depois que ele se recuperou totalmente da anestesia.
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Representative Results
MTAC permite a indução da hipertensão significativa no ventrículo esquerdo de uma forma atempada.
Como visto na Figura 1, a preparação das ferramentas principais para o procedimento é simples e mínima, requerendo apenas 2-4 agulhas de calibre 30 para ser dobradas e mantidas no lugar com um tubo de poliuretano. O próprio procedimento cirúrgico também é menos complicado, como comparado a TAC, e pode ser realizada facilmente. Uma vez que a tireóide tem sido retraído, o esterno é cortado e o timo é movido para limpar a vista. O arco aórtico é facilmente localizável para o processo de ligação (Figura 2).
MTAC produz de forma confiável sobrecarga de pressão ventricular esquerda em ratos infartados. A Figura 3 ilustra esta claramente, como aorta constringida transversal pode ser claramente observado na Figura 3C, como well como uma velocidade de pico de fluxo aumentado através do site constrição em 3D. Isto pode ser comparado com o rato operação simulada, visto na Figura 3A e 3B, o qual exibe nenhuma constrição com a velocidade de pico de fluxo normal. Como uma consequência da ligação visto na Figura 4C, a velocidade de fluxo é aumentada de forma significativa na artéria carótida direita, e a pressão pode construir-se a aorta ascendente e no coração para produzir hipertrofia ventricular esquerda. No entanto, como consequência da constrição a montante, a velocidade de fluxo é significativamente reduzida na artéria carótida comum esquerda, como na Figura 4D. Por outro lado, o fluxo de sangue da artéria carótida quase idêntico é observado no rato operação simulada, como na Figura 4A (artéria carótida direita) e 4B (artéria carótida esquerda).
O parâmetro relacionado com o hipertrofia resultantes e a curva de sobrevivência são facilmente observado na Figura 5, na qual o coração do rato MTAC-ligado pode ser observado para ser significativamente alargada e deformada. Isto só é ainda visto a nível celular, como demonstrado na Figura 6A e 6B, o qual exibe o aumento do coração do rato MTAC-operado, em comparação com o rato operação simulada. O que pode ser ainda observado é o aumento do tamanho da célula do músculo cardíaco e fibrose em ratinhos MTAC (Figura 6D, 6F, e 6H) em comparação com ratinhos não ligado (Figura 6C, 6E e 6G).
Desde MTAC pode ser verificada por meio de um sistema de ultra-som de alta-frequência, a incapacidade de se contraem com sucesso o arco aórtico será revelada por uma ausência de uma constrição da aorta visível transversal na ecocardiografia bidimensional, tal como na Figura 3B 3D. Este pode ainda ser verificada com os modos Doppler pulsado e de onda da cor, uma constrição de sucesso deve demonstrar uma maior velocidade de fluxo na artéria carótida direita e a velocidade de fluxo reduzido na artéria carótida esquerda (Figura 4C e 4D).
Figura 1: processo para formar os ganchos de agulha desejada por dobragem de uma ponta da agulha 1-in, de 30 gauge. A) A ponta da agulha 1-in, 30 de medida original. B) Segure a ponta da agulha com o suporte da agulha e dobrar aproximadamente a meio caminho ao longo do seu comprimento. Dobrar a agulha em um loop, usando o suporte da agulha e as mãos, se necessário, para formar o circuito representado na parte superior direita da figura. C) cobrir a agulha com um tubo de poliuretano a fim de manter o segmento dobrado no lugar. D) Usando osuporte de agulha, dobrar a ponta da ansa na forma desejada. Neste caso, uma ponta de agulha com duas 45 - 60 ° curvas foi mostrado para fins ilustrativos. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: O Processo de ligadura do arco aórtico transversal. A) O arco aórtico é claramente visível. B) Usando o gancho de agulha acima referida, separar o arco aórtico do tecido conjuntivo nas proximidades. C) Usando a agulha enganchado, guiar o fio de sutura sob o arco aórtico, e com o uso de um espaçador, amarrar uma constrição do diâmetro desejado. D) ligadura concluída. Pl facilitar clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: Cor e pulsada de onda Doppler Ecografia do arco aórtico de ligado e ratos não-ligados. A) Doppler colorido do arco aórtico de um mouse não-ligados. As duas artérias carótidas são claramente visível, bem como a falta de uma constrição entre eles. B) a velocidade de pico de fluxo aórtico de um mouse não-ligados. C) Cor Doppler do arco aórtico de um rato ligado. A constrição entre as duas artérias carótidas no arco aórtico é visível (setas amarelas). D) a velocidade do fluxo de pico no local constrição. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: Pulsed-wave Doppler das artérias esquerda e direita carótidas de ratos ligados e não ligados. A) imaging Pulsed-Doppler da artéria carótida esquerda de um rato não-ligado. B) Doppler pulsado de onda da artéria carótida direita de um rato não-ligado. É digno de nota que a velocidade do fluxo sanguíneo é quase idêntico ao da artéria carótida esquerda. C) Doppler pulsado de onda da artéria carótida direita de um rato com uma constrição em seu arco aórtico. A velocidade do sangue é significativamente aumentado devido à constrição a jusante da entrada para a artéria carótida esquerda. D) Doppler pulsado de onda da artéria carótida esquerda de um rato com uma constrição em seu arco aórtico. A velocidade do fluxo de sangue é significativamente reduzido devido à constrição a montante da entrada dea artéria carótida esquerda. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5: A hipertrofia cardíaca e parâmetros relacionados com uma curva de sobrevivência a partir de 3 semanas ligadas e não-ligadas Mice. A) O coração de um rato de 3 meses de idade, sem constrição aórtica transversal. O coração é saudável e de uma forma normal, sem quaisquer patologias imediatamente evidente. B) O coração de um rato de 3 meses de idade, que sofreu MTAC por 3 semanas. Observe a natureza claramente deformada do coração devido ao alargamento da parede do ventrículo esquerdo. A ligadura sobre o arco aórtico também é visível. C) A seção transversal do coração de um rato não-ligado de 3 meses de idade. D) Uma secção transversal do coração de um 3rato -mês de idade que foram submetidos a constrição aórtica transversal por 3 semanas. O alargamento do ventrículo esquerdo é claramente visível. O coração, em geral, também é ampliada devido à sobrecarga de pressão ventricular esquerda causada por MTAC. E) A proporção de coração para o peso corporal é aumentada significativamente nos ratos unido por 3 semanas. F) A relação do comprimento do osso da tíbia do coração para a esquerda é aumentado significativamente em ratinhos unido por 3 semanas (*, p <0,05; **, p <0,01; ***, P <0,001). Curva G) Sobrevivência para um experimento 3 semanas de duração (MTAC = 12 e SHAM = 12). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6: histológica Slides do Coração Mouse. A) Uma secção transversal de um SHcoração do rato am-operado. B) Uma secção transversal de um coração MTAC-ligado durante 3 semanas, com uma parede do ventrículo esquerdo espessada e fibrose parcial. O tamanho global do coração é aumentado também. C) Corte longitudinal das fibras musculares cardíacas de um mouse operação simulada. D) Corte longitudinal das fibras musculares cardíacas de um rato MTAC-ligado. As células são ampliados significativamente, como evidenciado pelo seu diâmetro aumentado, enquanto que o núcleo se manteve o mesmo tamanho. E) a secção transversal das fibras musculares de um rato operação simulada. F) secção transversal das fibras musculares cardíacas a partir de um rato MTAC-ligado. As células são aumentados devido à sobrecarga de pressão como resultado do MTAC. G) As artérias coronárias de um mouse operação simulada corados com Picrosirius Red para colágeno. H) As artérias coronárias de um rato MTAC-ligado. Uma quantidade significativa de tecido colágeno é observada around do vaso sanguíneo dilatada, indicativo de fibrose perivascular devido à sobrecarga da pressão nas artérias coronárias. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Rockman e colegas desenvolveu o primeiro método para bandagem aórtica como um método para estudar sobrecarga de pressão no coração. Esta pesquisa permitiu começar a descobrir as conseqüências celulares e moleculares da hipertensão e insuficiência cardíaca 1. Um método melhorado, minimamente invasiva constrição da aorta transversal (MTAC), fornece um método passível, dependente do tempo para a indução de sobrecarga de pressão ventricular esquerda e insuficiência cardíaca, sem os inconvenientes da constrição aórtico transverso 9 convencional. O procedimento em si pode ser realizada de forma significativa com mais facilidade e com o aumento das taxas de sobrevivência, em comparação com TAC. A principal vantagem deste método é que ele permite que o desempenho do ensaio de constrição da aorta, mas com significativamente menos equipamento, habilidade cirúrgica, e tempo de operação para o mesmo ou um melhor resultado.
O método de tórax aberto no procedimento TAC não permitem gAcesso reater e uma melhor visão da totalidade do coração e vasos. A potencial vantagem é que ele pode ser facilmente realizado em combinação com outros procedimentos, tais como o desempenho de constrição da artéria pulmonar para a sobrecarga da pressão ventricular direita ou para a ligação da artéria coronária condições isquémicas, ao mesmo tempo que o arco aórtico bandas é feito. Por outro lado, o método minimamente invasivo não é adequado para qualquer coisa diferente de ascendente ou transversal do arco aórtico constrição.
É notável que este método foi adaptado e modificado numa variedade de maneiras. Em alguns casos, a utilização de grampos de titânio em vez de um fio de sutura para a constrição da aorta foi considerado mais apropriado, tendo em conta que é uma condição experimental que é facilmente reprodutível: as bandas não pode escorregar quanto possível em procedimentos padrão de TAC e MTAC envolvendo suturas 6. No caso em que, quando testada com o sistema de ultra-som de alta frequência,um grande número de ratinhos não foram ligados com sucesso ao longo do experimento, a prática adicional é necessária. Talvez a aplicação dos grampos de titânio acima mencionados podem melhorar a taxa de sucesso da cirurgia 6.
Ao conduzir o ensaio, é importante que o fio de sutura em torno da aorta não é muito apertado. Ele pode ferir a aorta ou causar uma redução do fluxo de sangue fatal para o resto do corpo, incluindo os órgãos críticos, tais como os rins. Além disso, deverá ser considerado como sendo suave ao usar o gancho curvo para separar a aorta a partir do tecido conjuntivo e vasos circundantes, uma vez que pode ferir as veias pulmonares e outros vasos e pode conduzir a perda de sangue fatal. A cavidade torácica tem negativo e o ambiente externo tem pressão positiva. Neste procedimento, embora a parede do tórax foi aberto a partir do esterno e o arco aórtico foi unida, a cavidade torácica e ambiente de pressão negativa estavam intactos. Se houve accidental danos e a pressão negativa no interior foi mudado, os pulmões teria entrado em colapso, e o animal teria morrido instantaneamente, uma vez que não teria havido nenhuma ventilação com pressão positiva. Normalmente, o procedimento pode ser realizado de forma segura dentro de 30 min, mesmo com baixa performance, se não houver uma lesão fatal. cuidados pós-operatórios é também crítica, uma vez que a pressão pode ser reduzida se o animal é desidratado, ou o animal pode passar fome devido à dor e dificuldade em atingir a comida. Facilmente disponíveis alimentos moles, analgésicos e re-hidratação são essenciais para a recuperação, bem como para um bom resultado.
O uso subsequente de sistemas de ultra-som, particularmente o modo Doppler colorido, permite a visualização do arco aórtico, a constrição bem sucedido, e os efeitos da MTAC. O sistema de ultra-sons permite a medição da velocidade de fluxo nas artérias carótidas, da espessura das paredes arteriais, e da morfologia do ventrículo esquerdo.Nomeadamente, a relação entre as taxas de fluxo em ratinhos normais ou operados por simulação deve ser aproximadamente 1 10. A velocidade de fluxo de pico no local de constrição pode ser usado para calcular o gradiente de pressão através da equação de Bernoulli modificada (4 x V máx 2) para um parâmetro de confiança como a razão da carótida. Vale a pena notar que, durante a ecocardiografia, que a temperatura corporal e freqüência cardíaca deve ser mantida o mais próximo possível da faixa fisiológica normal e deve ser similar entre os animais para a produção de pontos de dados comparáveis 10.
Diferentes níveis de constrição pode ser derivado de diferentes níveis de experiência de operadores e podem influenciar significativamente a morfologia obtida. Para obter resultados consistentes, verificando constrição sucesso com níveis gradiente de pressão e apenas utilizando ratinhos dentro de certos limites, como um gradiente de pressão entre 40-80 mmHg, é importante. Sempre que possível, ech de alta frequênciaocardiography deve ser usado para critérios de confirmação e selecção de animais para alcançar consistência nos resultados do estudo. No entanto, a ecocardiografia não é necessário para o método MTAC si.
Se a ecocardiografia de alta frequência não está disponível, a constrição de sucesso pode ser verificada com o peso do coração e proporções relativas e com o estudo histopatológico no final da experiência. A constrição sucesso vai aumentar o peso do coração magra e a proporção em relação ao peso corporal e comprimento do osso da tíbia esquerda. Da mesma forma, hipertrofia das células do músculo cardíaco e ambos fibrose intersticial e perivascular também pode ser observado em ratos ligados com sucesso. Esta experiência de 3 semanas de tempo é destinado apenas para induzir a hipertrofia cardíaca, mas não para provocar uma falha. A dilatação cardíaca e insuficiência cardíaca geralmente se iniciou após 6 - 8 semanas, ou mais tarde.
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Acknowledgments
Gostaríamos de reconhecer o Mecanismo de Pesquisa da Universidade de Ciências da Vida (ULS) do Hong Kong Polytechnic University para a prestação de Vevo 2100 sistema de ultra-som. Um agradecimento especial ao Dr. Chunyi Wen da Divisão Interdisciplinar de Engenharia Biomédica, Hong Kong Polytechnic University, de formação e de facilitação. Este trabalho foi apoiado pelo governo HK RGC Grant GRF 17127215, 764812 e HKU6 / CRF / 11G para Billy KC Chow.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 inch 30 Gauge Needles | BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA. | 305128 | Curved as in the procedure and Figure 1 |
| 27 Gauge Needle | BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA. | 301629 | Make blunt and smooth for spacer |
| 6/0 Dafilon | B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany. | C0933066 | |
| 6/0 Silkam | B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany. | C0762067 | |
| Sterile gloves | A.R. Medicom, Inc (Asia), Hong Kong. | ||
| Cotton Applicator | Mannings, Quarry Bay, Hong Kong. | Local Shopping Center | |
| Depilatory Cream | Veet (Hong Kong), Kwun Tong, Kowloon, Hong Kong | Local Shopping Center | |
| Lexer-Baby Scissor | FST, British Columbia V7H 0A6, Canada. | 14078-10 | |
| Curved Iris Forcep | FST, British Columbia V7H 0A6, Canada. | 11065-07 | |
| Micro Olsen-Hegar Needle Holder | WPI, Sarasota, FL 34240, USA. | 501989 | |
| Stereo Micrioscope | WPI, Sarasota, FL 34240, USA. | PZMIII-BS | |
| GenTeal Eye Gel | Novartis, East Hanover, NJ 07936, USA. | Local Pharmacy | |
| Heating Pad | Kent Scientific Corporation, Torrington, CT 06790, USA. | DCT-20 | |
| Surgical tape | Laboratory Animal Unit | ||
| Ketamine and Xylazine | Laboratory Animal Unit | ||
| Betadine | Laboratory Animal Unit | ||
| Buprenorphine | Laboratory Animal Unit |
References
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