Waiting
Traitement de la connexion…

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Protocol voor klinische adipeus weefsel afkomstige stromale vasculaire breuk oplevert potentiële regeneratie van het kraakbeen

Published: September 29, 2018 doi: 10.3791/58363
Automatic Translation
*1, *1,2, 1, 2, 2, 2, 2
1Mipro Medical Clinic, 2National Leading Research Laboratory, Department of Biological Sciences, Myongji University
* These authors contributed equally

Summary

Hier presenteren we een protocol voor de productie van een adipeus weefsel afkomstige stromale vasculaire breuk en de toepassing ervan te verbeteren functies van de knie door het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel in menselijke patiënten met artrose.

Abstract

Osteoartritis (OA) is een van de meest voorkomende invaliderende aandoeningen. Onlangs, hebben talrijke pogingen gedaan om de functies van de knieën met behulp van verschillende vormen van mesenchymale stamcellen (MSCs). In Korea, het beenmerg concentraten en koord zijn bloed-afgeleide cellen van de stam goedgekeurd door de Korean Food and Drug Administration (KFDA) voor regeneratie van het kraakbeen. Daarnaast heeft een adipeus weefsel afkomstige stromale vasculaire breuk (SVF) gekregen door de KFDA voor gezamenlijke injecties in menselijke patiënten. Autologe adipeus weefsel afkomstige SVF bevat extracellulaire matrix (ECM) naast mesenchymale stamcellen. ECM excretes verschillende cytokines waarmee, samen met hyaluronzuur (HA) en platelet-rich plasma (PRP) geactiveerd door calciumchloride, MSCs te regenereren van kraakbeen en knie functies te verbeteren. In dit artikel presenteerden we een protocol ter verbetering van de functies van de knie door het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel in menselijke patiënten met OA. Het resultaat van het protocol werd voor het eerst gemeld in 2011 gevolgd door een paar extra publicaties. Het protocol houdt liposuctie met het oog op autologe lipoaspirates die zijn vermengd met collagenase. Dit lipoaspirates-collagenase mengsel vervolgens gesneden en gehomogeniseerd Schakel grote vezelig weefsel dat de naald tijdens de injectie kan verstoppen. Daarna is het mengsel geïncubeerd om te verkrijgen van SVF adipeus weefsel-afgeleide. De resulterende adipeus weefsel afkomstige SVF, met zowel adipeus weefsel afkomstige MSCs en restanten van ECM, wordt geïnjecteerd in de knieën van patiënten, gecombineerd met HA en calciumchloride geactiveerd PRP. Opgenomen zijn drie gevallen van patiënten die werden behandeld met ons protocol leidt tot verbetering van de kniepijn, zwelling en bereik van de beweging samen met MRI bewijs van hyalien kraakbeen-achtig weefsel.

Introduction

Mesenchymale stamcellen (MSCs) is bekend dat er de mogelijkheid om te regenereren van kraakbeen1,2,3,4,5,6. Deze kunnen gemakkelijk worden verkregen uit verschillende bronnen: beenmerg, navelstrengbloed en vetweefsel onder vele anderen. Onder deze bronnen is adipeus weefsel de enige bron waar een voldoende aantal MSCs kan worden verkregen zonder een uitbreiding van de cultuur om te regenereren van kraakbeen in klinische instellingen7,8. Autologe beenmerg stromale vasculaire breuk (SVF) kan ook gemakkelijk worden verkregen. Het aantal cellen van de stam die zijn opgenomen in de niet-cultuur uitgebreide beenmerg is echter zeer laag7,8. Koord-bloed kan een voldoende aantal MSCs bevatten. Navelstrengbloed is echter niet een beschikbaar bron van autologe SVF.

Tal van methoden van verwerking adipeus weefsel te verkrijgen van SVF zijn beschikbaar voor klinische toepassingen. Onder deze, de methode voor het verkrijgen van MSCs uit vetweefsel met collagenase, ontwikkeld en bevestigd door Zuk et al. 5 , 6, wordt zeer goed geaccepteerd. Deze methode van het gebruik van collagenase is aangepast voor klinische toepassingen in orthopedie. Om te worden toegepast op klinische instellingen, moet het systeem een gesloten systeem te behouden de steriliteit terwijl het gemak. Één bepaalde wijziging gepresenteerd in dit artikel impliceert homogenisering van de lipoaspirates. Klein formaat lipoaspirates zijn relatief sneller dan grotere degenen die leiden de ongelijke verdeling van het vetweefsel tot verteerd. Bovendien kan deze grotere formaat lipoaspirates vezelig weefsels die verstoppen kunnen de spuiten en naalden tijdens het uitvoeren van gezamenlijke injecties9,10produceren. Om te voorkomen dat deze kwesties, kan de lipoaspirates worden gehomogeniseerd door snijden en hakken van de lipoaspirates voordat de incubatie met collagenase. De resulterende adipeus weefsel afkomstige SVF kan bevatten meer uniforme extracellulaire matrix (ECM) in vergelijking met lipoaspirates die niet gehomogeniseerde11. De achtergebleven ECM vervat in de SVF kan werken als een steiger12.

In 2009, heeft autologe adipeus weefsel afkomstige SVF gekregen door de Korean Food and Drug Administration (KFDA) wanneer verwerkt in een medische inrichting met minimale verwerking door een arts-13. Daarna is autologe adipeus weefsel afkomstige SVF gebruikt als een potentiële agent te knie functies bij osteoartritis (OA) patiënten te verbeteren door het potentieel het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel10,14,15 , 16 , 17 , 18 .

In 2011 toonde Pak voor de eerste keer dat vetweefsel afkomstige stamcellen (ASC's) opgenomen in het adipeus weefsel afkomstige SVF knie functies mogelijk het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel in menselijke OA patiënten wanneer geïnjecteerd met platelet-rich kan verbeteren plasma (PRP) 14. Daarnaast hebben Pak et al. veiligheidsgegevens in 2013 waarbij 91 patiënten gemeld. Het tarief van de gemiddelde werkzaamheid gemeld in deze veiligheidsgegevens was 67%15. Daarna aanvullend onderzoek door Pak et al. toonde verbeterde knie functies mogelijk als gevolg van kraakbeen-achtige weefselregeneratie bij patiënten met een meniscus scheuren en Patellofemoraal pijnsyndroom10,16,17 ,18. Op basis van artikelen gemeld, is het bekend dat het aantal cellen van de stam in 100 g adipeus weefsel verwerkt door het protocol gepresenteerd in dit artikel vervatte van 1.000.000-40.000.000 afhankelijk van patiëntenverenigingen kenmerken8, variëren kan 19 , 20 , 21 , 22 , 23.

Hier presenteren we een protocol voor klinische van menselijke knie OA met behulp van autologe adipeus weefsel afkomstige SVF met HA en PRP geactiveerd met calciumchloride. De eerste versie van dit protocol voor klinische, waarbij een gesloten, handmatige systeem om te handhaven de steriliteit, werd gemeld in 201114. De identieke protocol werd geoptimaliseerd, steriliteit, onderhouden en werd gemeld in 2013 en 201610,15. Hier, wordt het geoptimaliseerde protocol gepresenteerd. Het schematisch overzicht van het protocol is opgenomen in afbeelding 1.

Figure 1
Figuur 1: het schematisch overzicht van het protocol. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

De goedkeuring van en instemming met het verslag na Aanvraagrapporten waren afstand door de Myongji Universiteit institutionele Review Board Comité (MJUIRB). Verder was dit protocol voor klinische met inachtneming van de richtsnoeren van de verklaring van Helsinki en regulering van de KFDA. Voor de procedures, zijn geïnformeerde toestemming verkregen van de patiënten.

1. liposuctie

Opmerking: Presteren met steriele techniek.

  1. Gebruik de volgende criteria: (1) MRI bewijs van fase 3 OA; (2) hetzij mannelijk of vrouwelijk; (3) ouder dan 18 jaar; (4) voldoende (100-110 g) adipeus weefsel voor liposuctie; (5) onwil om te gaan met de chirurgische ingreep; (6) het falen van conservatieve beheer; en (7) lopende invaliderende pijn.
  2. Gebruik de volgende Uitsluitingscriteria: (1) actieve inflammatoire of bindweefsel aandoening dacht dat om de impact van pijn voorwaarde (dat wil zeggen,lupus, reumatoïde artritis, fibromyalgie); (2) actief endocriene aandoening die kan van invloed zijn pijn voorwaarde (d.w.z.,, hypothyreoïdie, diabetes); (3) actief neurologische aandoening die kan van invloed zijn pijn voorwaarde (d.w.z.,, perifere neuropathie, multiple sclerose); (4) actief longziekte waarbij medicatie gebruik; en (5) geen geschiedenis van steroïde gezamenlijke injecties afgelopen 3 maanden.
  3. Breng de patiënt in een operatiekamer met een kap van biohazard klasse A en plaats hem (of haar) in een liggende positie.
  4. Reinig de buikstreek van de patiënt met 5% betadine (Povidon-Jood) en draperen de patiënt met behulp van de steriele techniek, bloot de schoongemaakte gebied van de buik voor liposuctie.
  5. Ca. 5 cm infero-lateraal van de navel, anesthetize twee sites (de ene links en de andere aan de rechterkant van de umbilicus) van incisie aan-be-gemaakt met behulp van 2 mL 2% lidocaïne zonder adrenaline met een naald (25 meter, 1½ inch) in een 5-mL spuit door het injecteren van elke site op de epidermale niveau.
  6. Anesthetize de site van incisie aan-be-gemaakt met behulp van tumescente (500 mL voor normale zout, 40 mL van 2% lidocaïne, 20 mL 0,5% bupivacaine, 0,5 mL 1:1000 epinefrine) 5 mL in een 10 mL spuit met een naald (25 meter, 1½ inch).
  7. Maak 2 insnijdingen van 0,5 cm ongeveer 5 cm onder de navel lateraal door het knijpen van de huid te verhogen van de diepte van de subcutane niveau.
  8. Met behulp van No. 11 blade, steken de verhoogde huid te dringen via naar de subcutane niveau maar niet door te dringen via de buikwand.
  9. Anesthetize met behulp van 20 cm 16-gauge canule, de subcutane niveau van de hele onderbuik, die aan-be-liposuctioned is, met 700 tot 800 mL van de tumescente oplossing.
  10. Na afwerking van infiltratie van de hele onderbuik met de tumescente oplossing, bereiden een liposuctie apparaat door het aansluiten van een 3.0 mm canule verbonden met een 60 mL (of een 30 mL) syringe voor handmatige liposuctie of een speciaal ontworpen 3.0 mm canule verbonden met een centrifuge kit, een spuit van de gesloten-systeem met het oog op het houden van de steriliteit, aangesloten op een vacuum machine voor vacuüm-bijgewoonde liposuctie.
  11. Liposuctie voor 100-110 g adipeus weefsel met uitzondering van tumescente oplossing uit te voeren. Bij het uitvoeren van liposuctie, zal adipeus weefsel worden verkregen samen met de tumescente oplossing, die moet worden gescheiden en verwijderd.
  12. Als u wilt scheiden de tumescente oplossing, eerst door de zwaartekracht, overbrengen in het vetweefsel in de centrifuge kit een injectiespuit 60 mL en plaats de injectiespuit naar beneden (dat wil zeggen, die het gedeelte van de spuit onderaan is). Door te wachten 5-6 min, zal het vetweefsel en de tumescente vloeistof worden gescheiden. De vloeistof op de bodem van de spuit verwijderen door op te drukken op het bovenste gedeelte van de zuiger van de spuit.
  13. Voer de bovenstaande stappen 1.9-1.11 tot een totaal van 100-110 g van vetweefsel (lipoaspirates) per knie is opgebouwd.

2. voorbereiding van ASC/ECM mengsel met steriele gesloten systeem

  1. Na het scheiden van de tumescente oplossing door zwaartekracht en accumulatie van 50-55 g lipoaspirates per elke 60 mL centrifuge kit, een steriele gesloten systeem, plaats de 2 centrifuge kits in een centrifuge container emmer en draai bij 1600 x g gedurende 5 min, condenserend de lipoaspirates en het scheiden van vloeistof van het vetweefsel. In dit proces van verdere condenseert, de lipoaspirates vette olie in bepaalde gevallen kan produceren.
  2. Voorzichtig niet te schudden, verwijder de dop van de veiligheid en de stekker aan de onderkant van de centrifuge kit.
  3. Verwijder de onderste vloeistof door langzaam te drukken op down op de bovenkant van de zuiger van de centrifuge kit.
  4. Los op aparte 60 mL spuit, 10 mg collagenase (5 mg van collagenase specifiek voor bindweefsel24 ) en 5 mg collagenase specifiek voor vetweefsel25met 50 mL van normale zout.
  5. Meng ongeveer 25-30 mL gecondenseerde lipoaspirate met opgeloste collagenase (5 mg van collagenase specifiek voor bindweefsel) en 5 mg collagenase specifiek voor adipeus weefsel bij een verhouding van 1:1 (v: v) door het aansluiten van de 60 mL spuit een centrifuge Kit met behulp van een gespecialiseerde connector.
  6. Meng grondig de verkorte lipoaspirate en de collagenase door het indrukken van de inhoud tussen de 60 mL spuit en de centrifuge kits met behulp van een stang of een Opdringer.
  7. Het mengsel van de lipoaspirate en de collagenase ook terug overzetten naar 60 mL spuiten.
  8. Sluit elke 60 mL spuit het mengsel met de homogenizer van een weefsel waarin messen met.
  9. Sluit een lege 60 mL spuit aan het andere uiteinde van de homogenizer.
  10. Duw het mengsel aan de andere 60 mL spuit via het homogenizer voor 4 -6 keer, wat resulteert in snijden en hakken van de lipoaspirate.
  11. Overdracht van de gehomogeniseerde lipoaspirate en het mengsel van collagenase terug naar 60 mL centrifuge kits via een gespecialiseerde connector
  12. Plaats de centrifuge kits in een container worden geplaatst in een incubator is voorverwarmd bij 37 ° C.
  13. Incubeer de twee centrifuge kits met het gehomogeniseerde mengsel bij 37 ° C gedurende 40 minuten terwijl het draaien van 45 toeren per minuut.
  14. Na de 40 min van incubatie, de container van de incubator in een steriele mode te verwijderen. Daarna verwijderen van de centrifuge-kits en plaats hen in een centrifuge-machine.
  15. Centrifugeer het mengsel bij 800 x g gedurende 5 min om te scheiden van de FØROYA adipeus weefsel-afgeleide.
  16. Na de centrifuge, het supernatant (die bevat collagenase en verteerd adipeus weefsel) van elke centrifuge kits verwijderen door het verwijderen van de dop van de injectiespuit op de bovenkant van de zuiger en het plaatsen van een 30 mL spuit op de plunjer openen via de spuit-lock verbinding.
  17. Druk langzaam naar beneden van het vat-deel van de 30 mL spuit voor de bovendrijvende vloeistof te vullen in de 30 mL spuit.
  18. Druk naar beneden de 30 mL injectieampul helemaal tot aan de laatste 3-4 mL van de bodem van de centrifuge kit, alleen de laatste 3-4 mL van vetweefsel afkomstige SVF verlaten. Het supernatant wordt verwijderd.
  19. De 30 mL spuit verwijderen vanaf de bovenzijde van de plunjer en vul de injectiespuit met 5% dextrose in lactated Ringer's oplossing (D5LR).
  20. Door het aanbrengen van de 30 mL spuit gevuld met D5LR op de bovenkant van de plunjer openen, vul de centrifuge kits, met 3-4 mL adipeus weefsel afkomstige SVF, met D5LR tot 55 mL.
  21. Verwijderen van de 30 mL spuit, de zuiger van het GLB en centrifugeer de centrifuge kits weer bij 300 x g gedurende 4 min.
  22. Herhaal stap 2.17-2.21 voor een totaal van 4 spoelingen. De gebruikte collagenase is xenogene. Daarom wordt de meeste collagenase verwijderd door 4 wasbeurten. Echter voor goedkeuring door de FDA, kan "fine-tuning"-van het protocol nodig zijn voor het verwijderen van de collagenase residuen in het eindvolume, hoewel het huidige bedrag van collagenase residuen wellicht te verwaarlozen genoeg voor de patiënten die geen ieder klinische bijwerkingen.
  23. Na de 4th centrifugeren, met het oog op de definitieve SVF voor injectie, verwijder de dop van de veiligheid en de stekker bij de opening van de onderkant van de centrifuge kit, zonder schudden of draaien van de centrifuge kit.
  24. Een 20 mL spuit aan de centrifuge kit onderkant openen met behulp van een speciaal ontworpen verbindingslijn koppelen.
  25. Trek de zuiger van de spuit meerdere malen heen en weer te schudden van de cellen die op de bodem van de centrifuge kit hebben geregeld.
  26. Verwijder de gewenste totale volume van de FØROYA met zowel ASC's en ECM samen met andere cellen en weefsel (meestal ongeveer 3-4 mL van elk centrifuge kit voor knie gezamenlijke injecties).

3. PRP voorbereiding met steriele techniek

  1. Bij de voorbereiding van de ASC's en ECM, trekken 30 mL autoloog bloed met 2,5 mL anticoagulatie citraatoplossing dextrose.
  2. Het getekende bloed overbrengen in de centrifuge-kits van 60 mL.
  3. Centrifugeer het getekende bloed bij 730 x g gedurende 5 minuten en verwijder de bovendrijvende substantie in een nieuwe 60 mL centrifuge kit. Centrifugeer het supernatant bij 1300 x g gedurende 4 min, wat resulteert in 3-4 mL PRP.
  4. Vlak voor de injectie, 3% (m/v) calciumchloride toevoegen bij een verhouding van 10:2 (PRP: calciumchloride, v: v) tot het Wachtwoordreplicatiebeleid om het te activeren.
  5. Voeg toe 0,5% (w/v) HA, als een steiger, aan het Wachtwoordreplicatiebeleid geactiveerd met calciumchloride. Deze ASC's met ECM, samen met PRP, geactiveerd door calciumchloride, en HA staan voor de ASC/ECM-mengsel.

4. ASC/ECM mengsel gebaseerde behandeling

  1. De knie van de patiënt met 5% betadine reinigen en het in een steriele manier te draperen.
  2. De voorzijde van de knie voor de gewrichtsruimte tussen de botten tibiale en femur palperen.
  3. Anesthetize de injectieplaats oppervlakkig met verdunde lidocaïne (1 mL van de 1% lidocaïne verdund met 4 mL van normale zout) uit de huid tot net buiten de gezamenlijke capsule.
  4. Anesthetize van de binnenkant van de gezamenlijke capsule met verdunde ropivacaine (1 mL 0,75% ropivacaine met normale zout 3 mL verdund).
  5. Meng 2 mL HA aan de 6-8 mL SVF vervat in een 20 mL spuit via de spuit-naar-spuit-connector.
  6. Voeg met behulp van een spuit-naar-spuit-connector, 0.4 mL calciumchloride aan de 3-4 mL autologe PRP die reeds is opgesteld en wordt op een 5 mL-spuit klaar.
  7. Combineer 3.5-4.5 mL PRP/calciumchloride in een 5 mL-spuit met 8-10 mL van het mengsel van de HA/SVF in een 20 mL spuit via de connector van de spuit-naar-spuit.
  8. Onmiddellijk injecteren het mengsel (ongeveer 12-15 mL) langzaam in het anterior tibio-femorale gewricht van de knieën met behulp van 38 mm 18-gauge naald met of zonder de hulp van de echografie.
  9. Na de injectie, Spalken de injectieplaats met druk door het vouwen 4 x 4 katoen gaas 4 keer en plaatsen van banden over de gevouwen gaas 4 x 4.
  10. Instrueer de patiënt blijven nog steeds voor 60 min voor cel bijlage.
  11. Instrueren van de patiënt te beperken van de activiteiten voor minimaal 1 week na ontslag uit de kliniek.
  12. Terug naar de kliniek voor drie aanvullende injecties van PRP geactiveerd door calciumchloride over 3 weken.

5. na de behandeling opvolgen

  1. Patiënt op de week van 2, 4 en 16 (18 of 22) voor pijn verbetering in termen van visuele analoge schaal (VAS) en functie verbetering in termen van fysiotherapie parameters te beoordelen. Bepalen functionele Classificatie index (VR), VAS en bereik van de beweging (ROM) als eerder beschreven26,27.
  2. Volg de patiënt door nabehandeling MRI 3 maanden na de behandeling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Drie patiënten (een 87-jarige vrouw met fase 3 OA, een 68-jarige man met fase 3 OA, en een 60-jarige danseres met fase 3 OA) zonder enige significante verleden medische geschiedenis gepresenteerd naar de kliniek met persistente kniepijn en gewenst voor potentiële autologe adipeus weefsel afkomstige SVF behandeling. Alle drie patiënten hadden hun knie onderzocht door een orthopedisch chirurg en werden aangeboden aan totale knie vervanging (TKR) en waren terughoudend om de operatie. Vóór de ingreep, hadden alle drie patiënten kregen meerdere injecties van steroïden en HA zonder enige langdurige verbetering.

De 87-jarige Koreaanse vrouwelijke patiënt, op het moment van onderzoek, klaagde over ernstige pijn (VAS score van 8; Figuur 2A) terwijl op rest. Ze beschreef de pijn toe te nemen ([FRI: 37; Figuur 2A) bij het lopen op en neer trappen. Op fysiek examen, milde gezamenlijke zwelling met verminderde ROM en tederheid met flexie (figuur 2B) werden geconstateerd. Echter werd geen ligament laksheid gewaardeerd. McMurray de en Apley de testen waren negatief. Een MRI vóór-behandeling aangetoond een verminderde grootte mediale meniscus samen met vervorming en maceratie. (Figuur 2C, 2E, 2 Gen 2I).

De tweede patiënt, een 68-jarige Koreaanse mannetje, klaagde over ernstige linker kniepijn (VAS score: 7; Figuur 3A) terwijl op rest. De pijn (FRI: 33; Figuur 3A) werd omschreven als de verhoging van bij het trappen op en af lopen. Op fysiek examen was er een milde misvorming met lichte gezamenlijke zwelling. ROM (figuur 3B) werd verlaagd. Verder werd geen ligament laksheid gewaardeerd. McMurray de en Apley de testen waren negatief. Een MRI vóór-behandeling toonde kraakbeen dunner worden samen met een verminderde grootte en vervormd mediale meniscus ondergeschikt zijn aan de vorige meniscectomy (Figuur 3 c, 3E, 3 Gen 3I). De patiënt werd gediagnosticeerd te hebben etappe 3 OA.

De derde patiënt, een 60-jarige Koreaanse vrouw, ook gemeld ernstige pijn (VAS score: 8; Figuur 4A) op de rest. De pijn (FRI: 36; Figuur 4A) werd omschreven als de verhoging van bij het lopen. De patiënt had ook lichte knie zwelling en daalde ROM (figuur 4B). Geen ligament laksheid werd gewaardeerd. McMurray de en Apley de testen waren negatief. Een MRI vóór-behandeling toonde daalde van de mediale meniscus grootte met vervorming en maceratie, en was er kraakbeen dunner (figuur 4C, 4E, 4 Gen 4I).

Behandelplan. Alle drie representatieve patiënten waren beperkt van het nemen van steroïden, aspirine, niet-steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen (NSAID's) en Aziatische kruiden medicijnen ten minste 1 week vóór de ingreep. Na het nemen van MRI beeldvorming studies, werden lipoaspirates verkregen en verwerkt als waarnaar hierboven wordt verwezen. Daarna werden de autologe adipeus weefsel afkomstige SVF met ASC's, ECM, HA en autologe PRP calcium-chloride-geactiveerd ingespoten op de knieën op dag 0. Er was geen complicatie als gevolg van liposuctions en gezamenlijke injecties. De patiënten keerde vervolgens terug naar de kliniek in een week, daarna 2 weken, en dan 3 weken voor aanvullende injecties van HA en autologe PRP geactiveerd met calciumchloride.

Uitkomst. Na de tweede week van de ASC/ECM mengsel injectie verbeterde de 87-jarige vrouwelijke patiënt pijn en ROM (figuur 2A en 2B). Door de 16e week was de pijn van de patiënt en de ROM aanzienlijk verbeterd met meer dan 70% (figuur 2A en 2B). Nabehandeling MRI genomen na de 16e week bleek de verhoogde dikte van hyalien kraakbeen-achtig weefsel aan de mediale zijde van de knie (figuur 2D, 2F, 2 Hen 2J). Ter vergelijking: de gemiddelde werkzaamheid tarief was 67% in de gegevens met behulp van dit protocol voor klinische, waarbij 91 patiënten en gemeld in 201315.

Figure 2
Figuur 2: uitkomsten van metingen van de pijn (A) en scala van motion (B); en MRI Sagittaal (C-F) en coronale (G-J) sequentiële T2 weergaven van de knie van de patiënt case 1. * geeft een statistisch significante vinden (p < 0,05). Voorbehandeling MRI-scans (C: sequentieel afbeelding, 5/20; E: 6/20; G: 10/20; en ik: 11/20) Toon kraakbeen letsels (pijlen). Nabehandeling MRI scans op 16 weken (D: 6/20; F: 7/20; H: 10/20; en J: 11/20) kraakbeen-achtige weefselregeneratie (pijlpunt) dat is gerepareerd door ASC/ECM mengsel gebaseerde behandeling geven. Dit cijfer is uit het vorige verslag van Pak et al. gewijzigd 10. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

De 68-jarige mannelijke patiënt pijn en ROM verbeterd na de tweede week van de ASC/ECM mengsel injectie (figuur 3A en 3B). Door de 18th -week, zijn pijn en ROM aanzienlijk verbeterd tot 80% (figuur 3A en 3B). Herhaald MRI genomen na 18th week sprake van een toename in de hoogte van hyalien kraakbeen-achtig weefsel op de voorste mediale zijde van de knie (figuur 3D, 3F, 3 H en 3J).

Figure 3
Figuur 3 : Uitkomsten van metingen van de pijn (A) en scala van motion (B); en MRI Sagittaal (C-F) en coronale (G-J) sequentiële T2 uitzicht op de knie van de patiënt case 2. * geeft een statistisch significante vinden (p < 0,05). Voorbehandeling MRI-scans (C: sequentieel afbeelding, 6/20; E: 7/20; G: 13/20; en ik: 14/20) Toon kraakbeen letsels (pijlen). Nabehandeling MRI scans op 16 weken (D: 6/20; F: 7/20; H: 13/20; en J: 14/20) kraakbeen-achtige weefselregeneratie (pijlpunt) dat is gerepareerd door ASC/ECM mengsel gebaseerde behandeling geven. Dit cijfer is uit het vorige verslag van Pak et al. gewijzigd 10. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

De 60-jarige vrouwelijke patiënt pijn en ROM verbeterd ongeveer 50% na de tweede week van het ASC/ECM mengsel injectie (figuur 4A en 4B). Door de week van 22nd verbeterd de pijn en de ROM aanzienlijk meer dan 80% (figuur 4A en 4B). Herhaalde MRI genomen na de week 22nd sprake van een toename in de hoogte van het hyalien kraakbeen-achtig weefsel aan de mediale zijde van de knie (Figuur 4 d, 4F, 4 Hen 4J).

Figure 4
Figuur 4 : Uitkomsten van metingen van de pijn (A) en bereik van motion (B); en MRI Sagittaal (C-F) en coronale (G-J) sequentiële T2 uitzicht op de knie van de patiënt case 3. * geeft een statistisch significante vinden (p < 0,05). Voorbehandeling MRI-scans (C: sequentieel afbeelding, 4/20; E: 5/20; G: 10/20; en ik: 11/20) Toon kraakbeen letsels (pijlen). Nabehandeling MRI scans op 16 weken (D: 4/20; F: 5/20; H: 10/20; en J: 11/20) kraakbeen-achtige weefselregeneratie (pijlpunt) dat is gerepareerd door ASC/ECM mengsel gebaseerde behandeling geven. Dit cijfer is uit het vorige verslag van Pak et al. gewijzigd 10. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

In 2001, Zuk et al. geïsoleerde stamcellen uit adipeus weefsel door het afbreken van de collageen-matrix met collagenase6. Nadien, toonde de Fractie dat deze stamcellen geïsoleerd van het vetweefsel kan transformeren in kraakbeen en andere weefsels van mesoderm in oorsprong, waaruit blijkt dat deze stamcellen mesenchymale in oorsprong waren.

Ook is de procedure die in dit artikel een gemodificeerde protocol bij soortgelijke methode toepassen op de menselijke patiënten. De belangrijkste wijziging van het protocol is de integratie van gesloten systeem spuiten bij het verkrijgen en verwerken van de lipoaspirates om te minimaliseren van de lucht-contact met behoud van het gemak van het uitvoeren van de procedure. Met behulp van dergelijke gesloten systeem spuiten, is vetweefsel verkregen via liposuctie. Vervolgens waren de lipoaspirates gemengd met collagenase binnen de gesloten systeem spuiten. Daarna werd de collagenase verwijderd uit het mengsel door verdunning van de collagenase concentratie binnen de gesloten systeem spuiten. Het eindresultaat is een steriele adipeus weefsel afkomstige FØROYA verkregen met gemak van het proces.

Met de vergelijkbare methode, Pak, bleek in 2011, voor de eerste keer, dat autologe adipeus weefsel afkomstige SVF OA om patiënten te behandelen door het potentieel het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel kan worden gebruikt. Later, Pak et al. ook aangetoond kan dat autologe adipeus weefsel afkomstige SVF worden gebruikt voor de behandeling van de meniscus scheuren en Patellofemoraal van Patella door regenereren vezelig kraakbeen-achtig weefsel en hyalien kraakbeen-achtig weefsel, respectievelijk. In 2013, Pak et al. een studie van de veiligheid met betrekking tot 91 patiënten behandeld met autologe adipeus weefsel afkomstige SVF gemeld. De gemiddelde efficiëntie van de studie gemeld was 67%, effenen de weg naar de mogelijkheid van de toepassing van autologe adipeus weefsel afkomstige SVF in het algemeen populatie met kraakbeen beschadiging.

Een van de meest voorkomende bijwerkingen gemeld door Pak et al. in 2013 was de veiligheid studie nabehandeling knie gezamenlijke zwelling, die kan worden verklaard door de dood van de stam cel 1), 2) ontsteking door ige suspensie van RBC opgenomen in het Wachtwoordreplicatiebeleid, en/of 3) residuele collagenase die is gebleven in het eindvolume van SVF adipeus weefsel-afgeleide. Aangezien MSCs bestaan binnen ECM van vetweefsel11,12, is verteren de lipoaspirates met collagenase te breken van de matrix aan de cellen van de stam lease een verplicht proces12. Echter na het afbreken van de matrix om de cellen van de stam vrij te geven, moet de resterende residueel collagenase worden volledig verwijderd uit het eindvolume om te voorkomen dat elke mogelijke ontsteking die kan worden geproduceerd door de resterende collagenase28. Hoewel collagenase een ontsteking veroorzaken kan, een onbeduidend deel van collagenase in het eindvolume van vetweefsel afkomstige SVF kan niet leiden tot een gezamenlijke zwelling. Dergelijke eindvolume van autologe adipeus weefsel afkomstige SVF met een onbeduidend deel van collagenase is veilig voor de laatste paar jaar gebruikt voor de behandeling van OA van knieën door het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel.

Twee niet-enzymatische methoden voor het verkrijgen van vetweefsel afkomstige SVF hebben onlangs geïntroduceerde29,30. Deze methoden maken gebruik van een mechanische kracht of echografie (vibrationele) kracht, in plaats van collagenase. In 2018, D'Ambrosi et al. rapporteerde een resultaat van de behandeling van de vier osteochondrale laesies van de talus van de enkel met micro-gebroken, gezuiverd autologe adipeus weefsel dat is verkregen met behulp van mechanische kracht tot afbraak van de matrix29. Geen collagenase werd gebruikt voor het breken van de matrix. Vier patiënten werden behandeld met de micro-gebroken adipeus weefsel (d.w.z., mechanisch achtergebleven vetweefsel), voor hun talus29. Alle deze vier patiënten toonden klinische verbetering zes maanden na de ingreep. Geen had complicaties. Op deze studie29was er echter geen verslag van potentiële regeneratie van het kraakbeen. Een andere studie gepubliceerd dit jaar waarbij vibrerende energie toonde aan dat trillingsenergie in bepaalde frequentie niet voldoende te isoleren van stamcellen30was.

Zoals hierboven vermeld, hebben verschillende groepen verschillende protocollen voor het gebruik van een autologe adipeus weefsel voor de behandeling van verschillende degeneratieve gezamenlijke aandoeningen. Het protocol kan variëren van de grootte van de canule gebruikt voor liposuctie, de hoeveelheid vetweefsel gebruikt, type en hoeveelheid collagenase (indien aanwezig), de wijze van injecties, enzovoort. Aangezien MSCs binnen ECM van vetweefsel bestaan, kan het effect van collagenase, of zuivering methode met behulp van mechanische krachten, een belangrijke rol spelen. Met name kan de werkzaamheid van collagenase afhangen van factoren zoals de grootte van het vetweefsel, het bedrag van het vetweefsel, concentratie van collagenase, tijd- en temperatuurdisplays van incubatie met collagenase, en het proces van het verwijderen van de overgebleven Collagenase, die leiden cel schade28 tot kan.

Opgemerkt moet worden dat collagenase, want het is een belangrijk onderdeel van deze procedure voor de productie van de cel van de stam met vetweefsel afkomstige SVF, kan een negatief effect hebben op het uiteindelijke volume van vetweefsel afkomstige SVF. In deze procedure, is collagenase gemengd met verkorte lipoaspirates, gehomogeniseerd geïncubeerd en vervolgens afgewassen. In dit hele proces, worden stamcellen blootgesteld aan collagenase, die een nadelig effect op de overleving van de stamcellen28kan hebben. Te veel concentratie of langdurige blootstelling van collagenase, mag de levensvatbaarheid van de cel van de stam in het eindvolume28verlagen. Verder, teveel van collagenase links in het eindvolume kan leiden tot ontsteking van het gewricht omdat collagenase de kraakbeen matrix van de gezamenlijke ingespoten28 breken kan.

Naast de potentiële negatieve gevolgen van collagenase, kan liposuctie dragen andere mogelijke complicaties. Met het oog op een adipeus weefsel afkomstige SVF, moet liposuctie eerst worden uitgevoerd. Uitvoeren van liposuctions, als de andere medische procedures, draagt enkele mogelijke complicaties zoals onregelmatigheden in de huid contour, seromas, infectie, perforatie van de buikwand, necrotiserende fasciitis, vet longembolie en longembolie. Onder deze complicaties zijn contour onregelmatigheden van de huid een veel voorkomende bijwerking dat gemakkelijk kan worden voorkomen door met behulp van kleine cannulas en het vermijden van oppervlakkige liposuctions31,32. Seromas, dat een verzameling van met vloeistof in het suctioned gebied is, kan ook een gevolg zijn van agressieve liposuctie33. Andere mogelijke complicaties zoals infectie, necrotizing fasciitis, perforatie van abdominale muren, vet embolie of longembolie zijn allemaal mogelijk. Deze complicaties kunnen echter ook worden voorkomen met behulp van strenge steriele technieken en door verbetering van de naleving van de patiënt34.

Verder alle drie patiënten opgenomen in de studie in eerste instantie aangeboden met een milde gezamenlijke effusie, een duidelijk teken van synovitis. Na de behandeling met vetweefsel afkomstige SVF, alle van deze gezamenlijke zwelling verbeterde patiënten. Om deze reden is het ook redelijk te veronderstellen dat de verbetering van de klinische symptomen niet te wijten aan de regeneratie van het kraakbeen mogelijk, maar in plaats daarvan, als gevolg van de f en anti-inflammatoire effect van stamcellen en/of PRP op synoviale membraan35 is , 36. als alternatief, de verbetering van het symptoom kan worden bijgedragen aan zowel f en anti-inflammatoire effect van stamcellen en/of PRP op synoviale membraan samen met mogelijk regeneratie van het kraakbeen-achtig weefsel. Hoewel meer onderzoek nodig is om af te bakenen het ware mechanisme van symptoom verbetering, deze percutane intra-articulaire injectie van celtherapie in de vorm van autologe, gehomogeniseerd adipeus weefsel afkomstige SVF met autologe PRP geactiveerd met calciumchloride en/of HA kunnen bieden een alternatieve behandeling de huidige strategie van behandelende knie OA.

Wat betreft de toevoeging van autologe PRP gaat, dat het is algemeen aanvaard dat PRP verschillende groeifactoren bevat en onderscheidende factoren voor geïnjecteerd MSCs onderscheiden37,38,39te groeien. PRP heeft ook aangetoond dat een collagenase effect40te neutraliseren. Met betrekking tot de toevoeging van hyaluronzuur is (HA), HA aangetoond dat een potentiële rol als een steiger materiaal, als gevolg van de hoge affiniteit aan kraakbeen weefsel, en een mogelijke rol weggelegd bij stamcellen penetreren het kraakbeen matrix41.

Meer nieuwe procédés voor het verkrijgen van vetweefsel afkomstige SVF beschikbaar zijn, is een optimalisering van een methode voor het verwerken van lipoaspirates noodzakelijk om te standaardiseren het proces. Dit kan echter een moeilijke taak als gevolg van het aantal mogelijke variaties in het proces van verkrijgen en verwerken van autologe adipeus weefsel afkomstige SVF. Bijvoorbeeld kunnen verschillen in de textuur van onderhuids vetweefsel in elke individuele patiënt, als gevolg van veroudering of de mate van obesitas, hebben verschillende reacties op collagenase activiteiten, resulterend in een verschillend aantal ASC's in de autologe adipeus weefsel afkomstige SVF42. Daarnaast is het aantal cellen van de stam in elke gram van vetweefsel afwijken van één patiënt naar een ander als blijkt uit de grote variatie van de cel van de stam van de gerapporteerde cijfers in talrijke publicaties7,19,,20, 21 , 22 , 23.

Dit protocol gepresenteerd in dit artikel is een nieuwe, innovatieve procedure proberen te verbeteren van de huidige strategie voor de behandeling van menselijke knie OA door potentieel het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel met percutane injecties van autologe adipeus weefsel afkomstige SVF. Het juiste gebruik van collagenase is een belangrijke en kritische stap in dit protocol. Werken met gesloten systeem spuiten om te houden van de steriliteit, terwijl de grote herziening van het protocol ontwikkeld door Zuk et al.het behoud van het gemak van het uitvoeren van de procedure is. 5 Daarnaast, voor toepassing op de mens, de overblijvende hoeveelheid collagenase opgenomen in de definitieve adipeus weefsel afkomstige SVF dient onbelangrijk om te voorkomen dat een gewrichtsontsteking. Er zijn beperkingen van dit protocol: de collagenase residuen in het eindvolume (hoewel dit te verwaarlozen wellicht), geen controlegroepen die afzonderlijk ingespoten PRP en HA, geen biopsieën, geen bewijs, met uitzondering van de verbetering van de klinische symptomen als gevolg van PRP, de kleine het aantal patiënten (pilot-studie), geen tarten onderdelen van het vetweefsel afkomstige SVF en geen specificatie van het aantal cellen van de stam in elk van de 3 patiënten. Toepassing van vetweefsel afkomstige SVF voor aandoeningen zoals een scheur van de meniscus, Patellofemoraal pijnsyndroom, spinale schijf aandoeningen, een vertraagde genezing (of niet-genezende) bot fractuur, een niet-genezende cutane ulceratie, borstreconstructie, en andere medische aandoeningen kan de klinische resultaten te verbeteren. Hoewel deze zijn de potentiële klinische toepassingen van SVF adipeus weefsel-afgeleide, zijn meer grondige en krachtige klinische onderzoeken nodig voor de integratie van vetweefsel afkomstige SVF in werkelijke klinische instellingen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgments

De auteur erkent de steun van het personeel van Mipro medische kliniek en het ontwerp van de figuur door Jaepil/David Lee. Dit werk werd gesteund door onderzoekssubsidies van de Bio & medische programma van de ontwikkeling van de technologie van de NRF gefinancierd door de MSIT (nummer NRF-2017M3A9E4078014); en de nationale onderzoek Stichting van Korea (NRF) gefinancierd door het ministerie van wetenschap en ICT (getallen NRF-2017R1A2B4002315 en de NRF-2016R1C1B2010308).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Material
5% Betadine (povidone-iodine)  Firson Co., Ltd. 657400260
2% Lidocaine  Daehan Pharmaceutical Co. 670603480
Tumescent solution  Myungmoon Pharm. Co. Ltd. N01BB01 The solution was composed of 500 mL normal saline, 40 mL 2% lidocaine, 20 mL 0.5% marcaine, and 0.5 mL epinephrine 1:1000.
Liberase TL and TM research grade  Roche Applied Science 5401020001
D5LR Dahan Pharm. Co., Ltd. 645101072 Dextrose 5% in lactated Ringer's solution 
Anticoagulant citrate dextrose solution  Fenwal, Inc. NDC:0942-0641 The solution was composed of 0.8% citric acid,
0.22% sodium citrate, and 0.223% dextrose.
3% (w/v) Calcium chloride  Choongwae Pharmaceutical Co. 644902101
0.5% (w/v) HA (Hyaluronic acid ) Dongkwang pharm. Co., Ltd. 645902030
0.25% Ropivacaine Huons Co., Ltd. 670600150
Equipment
3.0 mm Cannula  WOOJU Medical Instruments Co. ML30200
60-mL Luer-Lock syringe BD (Becton Dickinson)  309653
Centrifuge Barrel Kit  CPL Co., Ltd. 30-0827044
Tissue homogenizer that contains blades CPL Co., Ltd. 30-0827045
Rotating incubator mixer Medikan Co., Ltd MS02060092
Centrifuge Hanil Scientific Inc. CE1133
Magnetic Resonance Imaging Philips Medical Systems Inc. 18068
Ultrasound Imaging System Samsung Medison co., Ltd CT-LK-V10-ICM-09.05.2007

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Arnoczky, S. P. Building a meniscus. Biologic considerations. Clinical Orthopaedics and Related Research. (367 Suppl), S244-S253 (1999).
  2. Barry, F. P. Mesenchymal stem cell therapy in joint disease. Novartis Foundation Symposium. 249, 86-241 (2003).
  3. Usuelli, F. G., et al. Adipose-derived stem cells in orthopaedic pathologies. British Medical Bulletin. 124 (1), 31-54 (2017).
  4. Zhang, H. N., Li, L., Leng, P., Wang, Y. Z., Lv, C. Y. Uninduced adipose-derived stem cells repair the defect of full-thickness hyaline cartilage. Chinese Journal of Traumatology. 12 (2), 92-97 (2009).
  5. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
  6. Zuk, P. A., et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering. 7 (2), 211-228 (2001).
  7. Baer, P. C., Geiger, H. Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: tissue localization, characterization, and heterogeneity. Stem Cells International. 2012, 812693 (2012).
  8. Zhu, Y., et al. Adipose-derived stem cell: a better stem cell than BMSC. Cell Biochemistry and Function. 26 (6), 664-675 (2008).
  9. Bellei, B., Migliano, E., Tedesco, M., Caputo, S., Picardo, M. Maximizing non-enzymatic methods for harvesting adipose-derived stem from lipoaspirate: technical considerations and clinical implications for regenerative surgery. Scientific Reports. 7 (1), 10015 (2017).
  10. Pak, J., Lee, J. H., Park, K. S., Jeong, B. C., Lee, S. H. Regeneration of Cartilage in Human Knee Osteoarthritis with Autologous Adipose Tissue-Derived Stem Cells and Autologous Extracellular Matrix. BioResearch Open Access. 5 (1), 192-200 (2016).
  11. Alexander, R. W. Understanding Adipose-derived Stromal Vascular Fraction (AD-SVF) Cell Biology and Use on the Basis of Cellular, Chemical, Structural and Paracrine Components: A Concise Review. Journal of Prolotherapy. 4, e855-e869 (2012).
  12. Benders, K. E., et al. Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration. Trends in Biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).
  13. Korean Food and Drug Administration (KFDA). Cell therapy: Rules and Regulations. KFDA. , (2009).
  14. Pak, J. Regeneration of human bones in hip osteonecrosis and human cartilage in knee osteoarthritis with autologous adipose-tissue-derived stem cells: a case series. Journal of Medical Case Reports. 5, 296 (2011).
  15. Pak, J., Chang, J. J., Lee, J. H., Lee, S. H. Safety reporting on implantation of autologous adipose tissue-derived stem cells with platelet-rich plasma into human articular joints. BMC Musculoskeletal Disorders. 14, 337 (2013).
  16. Pak, J., Lee, J. H., Kartolo, W. A., Lee, S. H. Cartilage Regeneration in Human with Adipose Tissue-Derived Stem Cells: Current Status in Clinical Implications. BioMed Research International. 2016, 4702674 (2016).
  17. Pak, J., Lee, J. H., Lee, S. H. A novel biological approach to treat chondromalacia patellae. PLoS One. 8 (5), e64569 (2013).
  18. Pak, J., Lee, J. H., Lee, S. H. Regenerative repair of damaged meniscus with autologous adipose tissue-derived stem cells. BioMed Research International. 2014, 436029 (2014).
  19. Aust, L., et al. Yield of human adipose-derived adult stem cells from liposuction aspirates. Cytotherapy. 6 (1), 7-14 (2004).
  20. De Ugarte, D. A., et al. Comparison of multi-lineage cells from human adipose tissue and bone marrow. Cells Tissues Organs. 174 (3), 101-109 (2003).
  21. Guilak, F., et al. Clonal analysis of the differentiation potential of human adipose-derived adult stem cells. Journal of Cellular Physiology. 206 (1), 229-237 (2006).
  22. Mitchell, J. B., et al. Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers. Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).
  23. Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure. Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).
  24. Liberase TL information available from Sigma Millipore online. , https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/05401020001?lang=en®ion=US (2018).
  25. Liberase TM information available from Sigma Millipore online. , https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/Libtmro?lang=en®ion=US (2018).
  26. Childs, J. D., Piva, S. R. Psychometric properties of the functional rating index in patients with low back pain. European Spine Journal. 14 (10), 1008-1012 (2005).
  27. Price, D. D., McGrath, P. A., Rafii, A., Buckingham, B. The validation of visual analogue scales as ratio scale measures for chronic and experimental pain. Pain. 17 (1), 45-56 (1983).
  28. Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells. Regenerative Medicine. 3 (5), 705-715 (2008).
  29. D'Ambrosi, R., Indino, C., Maccario, C., Manzi, L., Usuelli, F. G. Autologous Microfractured and Purified Adipose Tissue for Arthroscopic Management of Osteochondral Lesions of the Talus. Journal of Visualized Experiments. (131), e56395 (2018).
  30. Packer, J. D., Chang, W. T., Dragoo, J. L. The use of vibrational energy to isolate adipose-derived stem cells. Plastic Reconstructive Surgery-Global Open. 6 (1), e1620 (2018).
  31. Hanke, C. W., Bernstein, G., Bullock, S. Safety of tumescent liposuction in 15,336 patients. National survey results. Dermatologic Surgery. 21 (5), 459-462 (1995).
  32. Illouz, Y. G. Complications of liposuction. Clinics in Plastic Surgery. 33 (1), 129-163 (2006).
  33. Dixit, V. V., Wagh, M. S. Unfavourable outcomes of liposuction and their management. Indian Journal of Plastic Surgery. 46 (2), 377-392 (2013).
  34. Lehnhardt, M., et al. Major and lethal complications of liposuction: a review of 72 cases in Germany between 1998 and 2002. Plastic and Reconstructive Surgery. 121 (6), 396e-403e (2008).
  35. Iyer, S. S., Rojas, M. Anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells: novel concept for future therapies. Expert Opinion on Biological Therapy. 8 (5), 569-581 (2008).
  36. Zhang, J., Middleton, K. K., Fu, F. H., Im, H. J., Wang, J. H. HGF mediates the anti-inflammatory effects of PRP on injured tendons. PLoS One. 8 (6), e67303 (2013).
  37. Li, N. Y., Yuan, R. T., Chen, T., Chen, L. Q., Jin, X. M. Effect of platelet-rich plasma and latissimus dorsi muscle flap on osteogenesis and vascularization of tissue-engineered bone in dogs. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 67 (9), 1850-1858 (2009).
  38. Parsons, P., et al. The biological effect of platelet rich-plasma on the fracture healing process. The Journal of bone and joint surgery. British volume. 91-B, 293 (2009).
  39. Wu, W., Chen, F., Liu, Y., Ma, Q., Mao, T. Autologous injectable tissue-engineered cartilage by using platelet-rich plasma: experimental study in a rabbit model. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 65 (10), 1951-1957 (2007).
  40. Cooper, T. W., Eisen, A. Z., Stricklin, G. P., Welgus, H. G. Platelet-derived collagenase inhibitor: characterization and subcellular localization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (9), 2779-2783 (1985).
  41. Uzuki, M., Sawai, T. A. A comparison of the affinity of sodium hyaluronate of various molecular weights for degenerated cartilage: a histochemical study using hyaluronic acid binding protein. International Congress Series. 1223, 279-284 (2001).
  42. Pagano, C., et al. Molecular and morphometric description of adipose tissue during weight changes: a quantitative tool for assessment of tissue texture. International Journal of Molecular Medicine. 14 (5), 897-902 (2004).

Tags

Geneeskunde kwestie 139 geneeskunde adipeus weefsel-afgeleide cellen van de stam extracellulaire Matrix menselijk kraakbeen regeneratie artrose regeneratieve geneeskunde mesenchymale stamcellen
Protocol voor klinische adipeus weefsel afkomstige stromale vasculaire breuk oplevert potentiële regeneratie van het kraakbeen
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Pak, J., Lee, J. H., Pak, N. J.,… More

Pak, J., Lee, J. H., Pak, N. J., Park, K. S., Jeon, J. H., Jeong, B. C., Lee, S. H. Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration. J. Vis. Exp. (139), e58363, doi:10.3791/58363 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter