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वसा ऊतक के उत्पादन के नैदानिक प्रोटोकॉल-संभावित उपास्थि पुनर्जनन के लिए Stromal संवहनी अंश व्युत्पंन

Published: September 29, 2018 doi: 10.3791/58363
Automatic Translation
*1, *1,2, 1, 2, 2, 2, 2
1Mipro Medical Clinic, 2National Leading Research Laboratory, Department of Biological Sciences, Myongji University
* These authors contributed equally

Summary

यहाँ, हम एक वसा ऊतक का उत्पादन करने के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद-stromal संवहनी अंश और अपने आवेदन के पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस के साथ मानव रोगियों में उपास्थि की तरह ऊतक पुनः उत्पन्न करके घुटने के कार्यों में सुधार करने के लिए व्युत्पंन.

Abstract

पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस (OA) सबसे आम दुर्बल विकारों में से एक है । हाल ही में, mesenchymal स्टेम सेल (MSCs) के विभिंन रूपों का उपयोग करके घुटनों के कार्यों में सुधार करने के लिए कई प्रयास किए गए हैं । कोरिया में, अस्थि मज्जा ध्यान केंद्रित और गर्भनाल रक्त व्युत्पंन स्टेम सेल कोरियाई खाद्य और औषधि प्रशासन द्वारा अनुमोदित किया गया है (KFDA) उपास्थि पुनर्जनन के लिए. इसके अलावा, मानव रोगियों में संयुक्त इंजेक्शन के लिए KFDA द्वारा एक वसा ऊतक-व्युत्पंन stromal संवहनी अंश (SVF) की अनुमति दी गई है । ऑटोलॉगस वसा ऊतक-व्युत्पन्न SVF में ECM स्टेम कोशिकाओं के अलावा extracellular मैट्रिक्स (mesenchymal) होता है. ECM विभिंन साइटोकिंस है कि, hyaluronic एसिड (हेक्टेयर) और प्लेटलेट युक्त प्लाज्मा (पीआरपी) कैल्शियम क्लोराइड द्वारा सक्रिय के साथ, उपास्थि पुनर्जीवित करने के लिए MSCs मदद कर सकते है और घुटने के कार्यों में सुधार उत्सर्जित करता है । इस अनुच्छेद में, हम एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करने के लिए OA के साथ मानव रोगियों में उपास्थि की तरह ऊतक फिर से उत्पंन करके घुटने कार्यों में सुधार । प्रोटोकॉल का परिणाम पहले २०११ में कुछ अतिरिक्त प्रकाशनों के बाद रिपोर्ट किया गया था । प्रोटोकॉल ऑटोलॉगस lipoaspirates कि collagenase के साथ मिश्रित कर रहे है प्राप्त करने के लिए liposuction शामिल है । इस lipoaspirates-collagenase मिश्रण तो काट लिया जाता है और इंजेक्शन के दौरान सुई को रोकना हो सकता है कि बड़े रेशेदार ऊतक को हटाने के लिए homogenized. बाद में, मिश्रण वसा ऊतक प्राप्त करने की मशीन है-SVF व्युत्पंन । परिणामस्वरूप वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF, दोनों वसा ऊतक युक्त-MSCs और ECM के अवशेष व्युत्पंन, रोगियों के घुटनों में इंजेक्ट किया जाता है, हा और कैल्शियम क्लोराइड के साथ संयुक्त पीआरपी सक्रिय । शामिल रोगियों जो हमारे घुटने के दर्द, सूजन के सुधार में जिसके परिणामस्वरूप प्रोटोकॉल के साथ इलाज किया गया के तीन मामले हैं, और hyaline उपास्थि ऊतक की तरह एमआरआई सबूत के साथ गति की सीमा ।

Introduction

Mesenchymalस्टेम सेल (MSCs) को उपास्थि1,2,3,4,5,6पुनर्जीवित करने की क्षमता है जाना जाता है । वे आसानी से विभिंन स्रोतों से प्राप्त किया जा सकता है: अस्थि मज्जा, गर्भनाल रक्त, और कई अंय लोगों के बीच वसा ऊतक । इन स्रोतों के अलावा, वसा ऊतक ही स्रोत है जहां MSCs की एक पर्याप्त संख्या किसी भी संस्कृति के विस्तार के बिना प्राप्त किया जा सकता नैदानिक सेटिंग्स7,8में उपास्थि पुनर्जंम है । ऑटोलॉगस अस्थि मज्जा stromal संवहनी अंश (SVF) आसानी से के रूप में अच्छी तरह से प्राप्त किया जा सकता है । हालांकि, स्टेम कोशिकाओं की संख्या में निहित गैर संस्कृति का विस्तार मज्जा बहुत कम है7,8. गर्भनाल-रक्त में पर्याप्त संख्या में MSCs शामिल हो सकते हैं । हालांकि, गर्भनाल रक्त ऑटोलॉगस SVF के एक आसानी से उपलब्ध स्रोत नहीं है ।

SVF प्राप्त करने के लिए वसा ऊतक प्रसंस्करण के कई तरीकों नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए उपलब्ध हैं । इन के अलावा, collagenase का उपयोग वसा ऊतक से MSCs प्राप्त करने की विधि, विकसित और Zuk एट अल द्वारा पुष्टि की । 5 , 6, बहुत अच्छी तरह से स्वीकार किया है । collagenase का उपयोग करने की इस पद्धति में आर्थोपेडिक्स नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए संशोधित किया गया है । आदेश में नैदानिक सेटिंग्स को लागू किया जा करने के लिए, प्रणाली एक बंद प्रणाली के लिए सुविधा रखते हुए बाँझ बनाए रखने होना चाहिए । एक विशेष संशोधन इस अनुच्छेद में प्रस्तुत lipoaspirates के homogenization शामिल है । छोटे आकार lipoaspirates अपेक्षाकृत तेजी से बड़े लोगों कि वसा ऊतक के असमान टूटने में जिसके परिणामस्वरूप कर रहे है से पचा रहे हैं । इसके अलावा, इन बड़े आकार lipoaspirates रेशेदार ऊतकों है कि सीरिंज और सुई संयुक्त इंजेक्शन9,10प्रदर्शन करते समय रोकना कर सकते हैं उत्पादन कर सकते हैं । आदेश में इन मुद्दों को रोकने के लिए, lipoaspirates काटने से homogenized जा सकता है और collagenase के साथ lipoaspirates से पहले नख़रेबाज़ । परिणामस्वरूप वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF अधिक यूनिफ़ॉर्म extracellular मैट्रिक्स (ECM) lipoaspirates कि11नहीं है homogenized की तुलना में हो सकता है । टूटी-ECM SVF में समाहित नीचे एक पाड़12के रूप में काम कर सकते हैं ।

२००९ में, ऑटोलॉगस वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF कोरियाई खाद्य और औषधि प्रशासन (KFDA) द्वारा अनुमति दी गई है जब एक चिकित्सक द्वारा ंयूनतम प्रसंस्करण के साथ एक चिकित्सा सुविधा के भीतर संसाधित13। बाद में, ऑटोलॉगस वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF एक संभावित एजेंट के रूप में उपयोग किया गया है पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस में घुटने कार्यों में सुधार (OA) संभावित रूप से पुनः प्राप्त करने के ऊतकों की तरह उपास्थि10,14,15 , 16 , 17 , 18 .

२०११ में, पाक पहली बार है कि वसा ऊतक-व्युत्पन्न स्टेम सेल (ASCs) वसा ऊतक में निहित-व्युत्पंन SVF घुटने के कार्यों में सुधार कर सकते है के लिए दिखाया संभावित मानव OA रोगियों जब प्लेटलेट के साथ इंजेक्शन अमीर में उपास्थि की तरह ऊतक regenerating प्लाज्मा (पीआरपी) 14. इसके अलावा पाक एट अल. ने ९१ मरीजों को शामिल करते हुए २०१३ में सेफ्टी डाटा की जानकारी दी है । इस सुरक्षा डेटा में रिपोर्ट की गई माध्य प्रभावकारिता दर ६७%15थी । इसके बाद, पाक एट अल द्वारा अतिरिक्त अध्ययन । संभावित घुटने के कारण एक meniscus आंसू और chondromalacia patellae10,16,17 के साथ रोगियों में उपास्थि की तरह ऊतक उत्थान के लिए कार्य में सुधार दिखाया ,18. लेख के आधार पर रिपोर्ट, यह ज्ञात है कि स्टेम वसा ऊतक के १०० जी में निहित कोशिकाओं की संख्या इस लेख में प्रस्तुत प्रोटोकॉल द्वारा संसाधित १,०००,०००-४०,०००,००० रोगियों की विशेषताओं के आधार पर8से रेंज मई, 19 , 20 , 21 , 22 , 23.

यहां, हम ऑटोलॉगस वसा ऊतक का उपयोग करके मानव घुटने OA के एक नैदानिक प्रोटोकॉल वर्तमान-हा और कैल्शियम क्लोराइड के साथ सक्रिय पीआरपी के साथ SVF व्युत्पंन । इस नैदानिक प्रोटोकॉल के पहले संस्करण, एक बंद, मैनुअल प्रणाली को बाँझ बनाए रखने के शामिल, २०११14में बताया गया था । समान प्रोटोकॉल अनुकूलित किया गया था, बाँझ को बनाए रखने, और २०१३ और २०१६10,15में बताया गया था. यहां, अनुकूलित प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है । इस प्रोटोकॉल के योजनाबद्ध सिंहावलोकन चित्रा 1में प्रस्तुत किया है ।

Figure 1
चित्रा 1: प्रोटोकॉल के योजनाबद्ध सिंहावलोकन । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Protocol

Myongji विश्वविद्यालय संस्थागत समीक्षा बोर्ड समिति (MJUIRB) द्वारा मामले की रिपोर्ट के बाद स्वीकृति और सहमति को माफ कर दिया गया । इसके अलावा, इस नैदानिक प्रोटोकॉल हेलसिंकी और KFDA के विनियमन के दिशा निर्देशों की घोषणा के अनुपालन में था । प्रक्रियाओं के लिए, सूचित सहमति रोगियों से प्राप्त किया गया ।

1. Liposuction

नोट: बाँझ तकनीक के साथ प्रदर्शन.

  1. निंनलिखित शामिल किए जाने के मानदंडों का प्रयोग करें: (1) एमआरआई स्टेज के सबूत 3 OA; (2) या तो पुरुष या महिला; (3) उम्र के 18 वर्ष से अधिक; (4) liposuction के लिए पर्याप्त (100-110 ग्राम) वसा ऊतक; (5) शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप के साथ आगे बढ़ने के लिए अनिच्छा; (6) रूढ़िवादी प्रबंधन की विफलता; और (7) चल रहे अक्षम दर्द ।
  2. निंनलिखित अपवर्जन मानदंड का प्रयोग करें: (1) सक्रिय भड़काऊ या संयोजी ऊतक रोग के लिए दर्द की स्थिति को प्रभावित सोचा (यानी,, एक प्रकार का वृक्ष, रुमेटी गठिया, fibromyalgia); (2) सक्रिय अंत: स्रावी विकार है कि दर्द की स्थिति को प्रभावित हो सकता है (यानी, हाइपोथायरायडिज्म, मधुमेह); (3) सक्रिय स्नायविक विकार है कि दर्द की स्थिति को प्रभावित हो सकता है (यानी,, परिधीय न्यूरोपैथी, एकाधिक स्केलेरोसिस); (4) सक्रिय फुफ्फुसीय रोग दवा उपयोग की आवश्यकता; और (5) पिछले 3 महीने स्टेरॉयड संयुक्त इंजेक्शन का कोई इतिहास.
  3. एक के साथ एक ऑपरेटिंग कमरे में रोगी लाओ एक खतरा वर्ग एक डाकू और उसे जगह (या उसे) एक लापरवाह स्थिति में ।
  4. 5% betadine (povidone-आयोडीन) के साथ रोगी के उदर क्षेत्र को साफ और बाँझ तकनीक का उपयोग कर रोगी कपड़े, liposuction के लिए पेट की साफ क्षेत्र को उजागर.
  5. लगभग 5 सेमी infero-नाभि से बाद में, anesthetize दो साइटों (बाईं ओर और नाभि के दाईं ओर दूसरे पर एक) चीरा के लिए-be-एक 5 मिलीलीटर सिरिंज में एक (25 गेज, 1 ½ इंच) सुई के साथ एड्रेनालाईन बिना 2% lidocaine के 2 मिलीलीटर का उपयोग किया एपिडर्मल स्तर पर प्रत्येक साइट इंजेक्शन द्वारा ।
  6. Anesthetize चीरा की साइट के लिए-be-tumescent समाधान के 5 मिलीलीटर का उपयोग कर बनाया (सामान्य खारा के ५०० मिलीलीटर, ४० मिलीलीटर की 2% lidocaine, 20 मिलीलीटर की ०.५% bupivacaine, ०.५ मिलीलीटर की 1:1000 एड्रेनालाईन) एक सुई (25 गेज, 1 ½ इंच) के साथ एक 10 मिलीलीटर सिरिंज में ।
  7. नाभि नीचे ०.५ सेमी के 2 चीरा लगभग 5 सेमी के नीचे त्वचा चुटकी द्वारा चमड़े के नीचे के स्तर की गहराई बढ़ाने के लिए बनाओ ।
  8. No .11 ब्लेड का प्रयोग, उठाया त्वचा प्रहार करने के लिए चमड़े के नीचे स्तर के माध्यम से घुसना लेकिन पेट की दीवार के माध्यम से घुसना नहीं है ।
  9. 20 सेमी 16 गेज प्रवेशनी का उपयोग करके, पूरे निचले पेट क्षेत्र के उपचर्म स्तर anesthetize, जो करने के लिए है-liposuctioned, tumescent समाधान के ८०० मिलीलीटर के साथ ७०० ।
  10. tumescent समाधान के साथ पूरे निचले पेट की घुसपैठ खत्म करने के बाद, एक ६० मिलीलीटर (या एक 30 एमएल) मैनुअल liposuction या एक विशेष रूप से डिजाइन ३.० मिमी प्रवेशनी के लिए सिरिंज से जुड़े एक ३.० मिमी प्रवेशनी कनेक्ट करके एक liposuction उपकरण तैयार एक केंद्रापसारक किट, बाँझ रखने के प्रयोजन के लिए एक बंद प्रणाली सिरिंज, निर्वात के लिए एक वैक्यूम मशीन से जुड़े liposuction सहायता ।
  11. tumescent समाधान को छोड़कर वसा ऊतक के 100-110 g प्राप्त करने के लिए liposuction निष्पादित करें । जब liposuction प्रदर्शन, वसा ऊतक tumescent समाधान है, जो अलग और हटा दिया जाना चाहिए के साथ प्राप्त किया जाएगा ।
  12. tumescent समाधान, गुरुत्वाकर्षण द्वारा पहले अलग करने के लिए, एक ६० मिलीलीटर सिरिंज के लिए केंद्रापसारक किट में वसा ऊतक हस्तांतरण और नीचे सिरिंज जगह (यानी, सिरिंज के हिस्से में नीचे है). 5-6 मिनट प्रतीक्षा करके, वसा ऊतक और tumescent द्रव अलग हो जाएगा । सिरिंज के ऊपरी भाग पर दबाकर सिरिंज के तल पर द्रव को गोताख़ोर.
  13. ऊपर दिए गए चरणों का पालन करें 1.9-1.11 जब तक वसा ऊतक (lipoaspirates) प्रति घुटने की कुल 100-110 ग्राम जमा किया गया है ।

2. ए एस सी/ECM मिश्रण के बाँझ बंद प्रणाली के साथ तैयारी

  1. गुरुत्वाकर्षण द्वारा tumescent समाधान अलग करने और प्रत्येक ६० मिलीलीटर केंद्रापसारक किट, एक बाँझ बंद प्रणाली प्रति lipoaspirates के 50-55 g जमते के बाद, एक केंद्रापसारक कंटेनर बाल्टी में 2 केंद्रापसारक किट जगह और 5 मिनट के लिए १६०० x g पर स्पिन, संघनित्र lipoaspirates और वसा ऊतक से द्रव को अलग । आगे गाढ़ा की इस प्रक्रिया में, lipoaspirates कुछ मामलों में फैटी तेल का उत्पादन हो सकता है ।
  2. नहीं हिला सतर्क होने के नाते, सुरक्षा टोपी और केंद्रापसारक किट के तल पर प्लग निकालें ।
  3. धीरे से नीचे तरल पदार्थ केंद्रापसारक किट के गोताख़ोर के शीर्ष पर नीचे दबाने से निकालें ।
  4. अलग ६० मिलीलीटर सिरिंज पर, भंग 10 collagenase के मिलीग्राम (5 collagenase की मिलीग्राम संयोजी ऊतक के लिए विशिष्ट24 और collagenase के 5 मिलीग्राम वसा ऊतक के लिए विशिष्ट25) सामान्य खारा के ५० मिलीलीटर के साथ.
  5. मिश्रित collagenase के साथ गाढ़ा lipoaspirate के लगभग 25-30 मिलीलीटर मिश्रण (5 संयोजी ऊतक के लिए विशिष्ट collagenase के मिलीग्राम और 5 वसा ऊतक के लिए विशिष्ट collagenase के मिलीग्राम) 1:1 के अनुपात में (v:v) ६० एमएल सिरिंज का उपयोग करके एक केंद्रापसारक किट को जोड़ने के द्वारा एक विशेष कनेक्टर ।
  6. अच्छी तरह से एक रॉड या एक धक्का का उपयोग करके ६० मिलीलीटर सिरिंज और केंद्रापसारक किट के बीच सामग्री धक्का द्वारा गाढ़ा lipoaspirate और collagenase मिश्रण ।
  7. lipoaspirate और collagenase के मिश्रण को वापस ६० मिलीलीटर सीरिंज में ट्रांसफर कर लें ।
  8. प्रत्येक ६० मिलीलीटर एक ऊतक homogenizer जो ब्लेड शामिल है के साथ मिश्रण युक्त सिरिंज कनेक्ट ।
  9. एक खाली ६० एमएल सिरिंज homogenizer के दूसरे छोर से कनेक्ट करें ।
  10. homogenizer के माध्यम से अंय ६० एमएल सिरिंज के लिए मिश्रण पुश 4 -6 बार, काटने और lipoaspirate के नख़रेबाज़ में जिसके परिणामस्वरूप ।
  11. एक विशेष कनेक्टर के माध्यम से ६० मिलीलीटर केंद्रापसारक किट के लिए homogenized lipoaspirate और collagenase मिश्रण वापस स्थानांतरण
  12. एक कंटेनर में केंद्रापसारक किट प्लेस के लिए एक मशीन है कि पूर्व गया है ३७ डिग्री सेल्सियस पर गरम में रखा जाएगा ।
  13. ३७ डिग्री सेल्सियस पर homogenized मिश्रण के साथ दो केंद्रापसारक किट मशीन ४० मिनट के लिए जबकि ४५ rpm पर घूर्णन ।
  14. मशीन के ४० मिनट के बाद, एक बाँझ फैशन में मशीन से कंटेनर को हटा दें । फिर, केंद्रापसारक किट निकालें और उंहें एक केंद्रापसारक मशीन में जगह है ।
  15. वसा ऊतक अलग करने के लिए 5 मिनट के लिए ८०० x g पर मिश्रण केंद्रापसारक-SVF व्युत्पंन ।
  16. के बाद, supernatant हटाने (जो collagenase और पचा वसा ऊतक शामिल है) प्रत्येक केंद्रापसारक किट से गोताख़ोर के शीर्ष पर सिरिंज टोपी को हटाने और एक 30 मिलीलीटर सिरिंज के माध्यम से गोताख़ोर खोलने पर सिरिंज बंद रखकर कनेक्शन.
  17. धीरे supernatant 30 मिलीलीटर सिरिंज में भरने के लिए 30 मिलीलीटर सिरिंज के बैरल हिस्सा नीचे प्रेस ।
  18. 30 मिलीलीटर सिरिंज प्रति बैरल नीचे प्रेस सभी तरह के केंद्रापसारक किट के नीचे के पिछले 3-4 मिलीलीटर के लिए नीचे, वसा ऊतक के केवल पिछले 3-4 मिलीलीटर छोड़ने-SVF व्युत्पंन । supernatant को छोड दिया जाता है ।
  19. गोताख़ोर के ऊपर से 30 मिलीलीटर सिरिंज निकालें और स्तनपान कराने वाली घंटी समाधान (D5LR) में 5% डेक्सट्रोज के साथ सिरिंज भरें.
  20. 30 मिलीलीटर गोताख़ोर खोलने के शीर्ष पर D5LR से भरा सिरिंज संलग्न करके, केंद्रापसारक किट भरें, वसा ऊतक के 3-4 मिलीलीटर-व्युत्पंन SVF, D5LR के साथ ५५ मिलीलीटर तक ।
  21. 30 मिलीलीटर सिरिंज निकालें, गोताख़ोर कैप, और 4 मिनट के लिए ३०० x g पर फिर से केंद्रापसारक किट केंद्रापसारक ।
  22. एक कुल 4 धोने के लिए कदम 2.17-2.21 दोहराएं । जसको collagenase xenogenic हो । इसलिए, ज्यादातर collagenase 4 धोने से हटा दिया जाता है । हालांकि, एफडीए अनुमोदन के लिए, ठीक-प्रोटोकॉल की ट्यूनिंग के लिए पूरी तरह से अंतिम मात्रा में collagenase अवशेषों को दूर करने के लिए आवश्यक हो सकता है, हालांकि collagenase अवशेषों की वर्तमान राशि है कि किसी भी नैदानिक नहीं है रोगियों के लिए पर्याप्त नगण्य हो सकता है दुष्प्रभाव.
  23. 4वें केंद्रापसारक के बाद, आदेश में इंजेक्शन के लिए अंतिम SVF प्राप्त करने के लिए, सुरक्षा टोपी और केंद्रापसारक किट के नीचे खोलने पर प्लग निकालें, मिलाते हुए या केंद्रापसारक किट मोड़ के बिना ।
  24. एक विशेष रूप से डिजाइन संबंधक का उपयोग करके केंद्रापसारक किट नीचे खोलने के लिए एक 20 मिलीलीटर सिरिंज संलग्न करें ।
  25. सिरिंज के गोताख़ोर कई बार आगे पीछे खींचने के लिए कोशिकाओं है कि केंद्रापसारक किट के तल पर बसे है हिला ।
  26. अंय कोशिकाओं और ऊतक (घुटने संयुक्त इंजेक्शन के लिए प्रत्येक केंद्रापसारक किट से आमतौर पर के बारे में 3-4 मिलीलीटर) के साथ साथ दोनों ASCs और ECM युक्त SVF की वांछित कुल मात्रा निकालें ।

3. पीआरपी बाँझ तकनीक के साथ तैयारी

  1. जबकि ASCs और ECM तैयार करने, थक्कारोधी साइट्रेट डेक्सट्रोज समाधान के २.५ मिलीलीटर के साथ ऑटोलॉगस रक्त की 30 मिलीलीटर आकर्षित ।
  2. ६० एमएल केंद्रापसारक किट के लिए तैयार रक्त हस्तांतरण ।
  3. 5 मिनट के लिए ७३० x g पर तैयार रक्त केंद्रापसारक और एक नया ६० एमएल केंद्रापसारक किट में supernatant हटा दें । 4 मिनट, पीआरपी के 3-4 मिलीलीटर में जिसके परिणामस्वरूप के लिए १३०० x g पर supernatant केंद्रापसारक ।
  4. सही इंजेक्शन से पहले, यह पीआरपी को सक्रिय करने के लिए 10:2 (पीआरपी: कैल्शियम क्लोराइड, v:v) के अनुपात में 3% (डब्ल्यू/वी) कैल्शियम क्लोराइड जोड़ें ।
  5. एक पाड़ के रूप में, कैल्शियम क्लोराइड के साथ सक्रिय पीआरपी के लिए ०.५% (डब्ल्यू/ ECM के साथ इन ASCs, पीआरपी के साथ, कैल्शियम क्लोराइड द्वारा सक्रिय है, और ए एस सी/ECM मिश्रण के लिए खड़े हो जाओ ।

4. ए एस सी/ECM मिश्रण आधारित उपचार

  1. 5% betadine के साथ रोगी के घुटने साफ और यह एक बाँझ तरीके से कपड़े ।
  2. टटोलना के टिबियल और ऊरु हड्डियों के बीच संयुक्त अंतरिक्ष के लिए घुटने की पूर्वकाल ।
  3. Anesthetize इंजेक्शन साइट को सतही रूप से पतला lidocaine के साथ (1% की 1 मिलीलीटर सामान्य खारा के 4 मिलीलीटर के साथ पतला lidocaine) त्वचा से सिर्फ संयुक्त कैप्सूल के बाहर करने के लिए ।
  4. पतला ropivacaine के साथ संयुक्त कैप्सूल के अंदर Anesthetize (1 मिलीलीटर ०.७५% सामान्य खारा के 3 मिलीलीटर के साथ पतला ropivacaine).
  5. मिश्रण एक 20 मिलीलीटर सिरिंज के माध्यम से सिरिंज कनेक्टर में निहित SVF के 6-8 मिलीलीटर के लिए हा के 2 मिलीलीटर मिक्स ।
  6. एक सिरिंज-से-सिरिंज कनेक्टर का उपयोग करके, ०.४ मिलीलीटर कैल्शियम क्लोराइड की ऑटोलॉगस पीआरपी कि पहले से ही तैयार किया गया है और एक 5 मिलीलीटर सिरिंज में तैयार किया जा रहा है की 3-4 मिलीलीटर के लिए जोड़ें ।
  7. का मिश्रण ३.५-४.५ मिलीलीटर में एक 5 मिलीलीटर सिरिंज/SVF मिश्रण के 8-10 मिलीलीटर के साथ एक 20 मिलीलीटर सिरिंज में सिरिंज-से- सिरिंज कनेक्टर ।
  8. तुरंत (के बारे में 12-15 मिलीलीटर) मिश्रण सुई धीरे पूर्वकाल tibio में घुटनों के ऊरु संयुक्त-३८ मिमी 18-गेज सुई के साथ या बिना अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन का उपयोग कर ।
  9. इंजेक्शन के बाद, तह 4x4 कपास धुंध 4 बार द्वारा दबाव के साथ इंजेक्शन साइट पट्टी और जोड़ 4x4 धुंध पर टेप रखने ।
  10. कक्ष अनुलग्नक के लिए अनुमति देने के लिए ६० मिनट के लिए रोगी अभी भी रहने के लिए निर्देश ।
  11. रोगी क्लिनिक से छुट्टी के बाद 1 सप्ताह के ंयूनतम के लिए गतिविधियों को सीमित करने के लिए निर्देश ।
  12. 3 सप्ताह से अधिक कैल्शियम क्लोराइड द्वारा सक्रिय पीआरपी के तीन अतिरिक्त इंजेक्शन के लिए क्लिनिक में लौटें ।

5. बाद के उपचार का पालन करें

  1. 2, 4, और 16 के सप्ताह में रोगी का आकलन (18 या 22) शारीरिक थेरेपी मापदंडों के संदर्भ में दृश्य एनालॉग स्केल (वॉज) और समारोह में सुधार के मामले में दर्द में सुधार के लिए. निर्धारित कार्यात्मक दर्ज़ा सूचकांक (शुक्र), वॉज, और गति (ROM) की सीमा के रूप में पहले वर्णित26,27।
  2. उपचार के बाद उपचार एमआरआई 3 महीने के बाद रोगी का पालन करें ।

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Representative Results

तीन रोगियों (१ ८७ वर्षीय स्टेज 3 oa, १ ६८ के साथ वर्षीय महिला चरण 3 oa के साथ पुराने पुरुष, और १ ६० वर्षीय महिला चरण 3 oa के साथ) किसी भी महत्वपूर्ण पिछले चिकित्सा लगातार घुटने के दर्द के साथ क्लिनिक के लिए प्रस्तुत इतिहास के बिना और संभावित के लिए वांछित ऑटोलॉगस वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF उपचार । सभी तीन रोगियों को अपने घुटने एक आर्थोपेडिक सर्जन द्वारा की जांच की थी और कुल घुटने प्रतिस्थापन (TKR) की पेशकश की थी और सर्जरी के लिए अनिच्छुक थे । प्रक्रिया से पहले, सभी तीन रोगियों को किसी भी लंबे समय तक सुधार के बिना स्टेरॉयड और हा के कई इंजेक्शन प्राप्त किया था.

८७ वर्षीय कोरियाई महिला रोगी, परीक्षा के समय, गंभीर दर्द की शिकायत की (वॉज स्कोर 8; चित्र 2a) जबकि बाकी पर । वह दर्द को बढ़ाने का वर्णन ([शुक्र: ३७; चित्र 2a) जब ऊपर और नीचे सीढ़ियों घूमना । शारीरिक परीक्षा पर, कम ROM और फ्लेक्स के साथ कोमलता के साथ हल्के संयुक्त सूजन (चित्रा बीए) नोट किया गया । हालांकि, कोई बंधन laxity की सराहना की थी । McMurray और Apley के परीक्षण नकारात्मक थे । एक से पहले उपचार एमआरआई विकृति और थकावट के साथ एक कम आकार औसत दर्जे का meniscus का प्रदर्शन किया । (चित्रा 2c 2E, 2g, और 2I) ।

दूसरे रोगी, एक ६८ वर्षीय कोरियाई पुरुष, गंभीर बाएं घुटने के दर्द की शिकायत की (वॉज स्कोर: 7; चित्र 3ए) जबकि बाकी पर । दर्द (शुक्र: ३३; चित्र 3ए) जब ऊपर और नीचे सीढ़ियों घूमना बढ़ाने के रूप में वर्णित किया गया था । शारीरिक परीक्षा पर, वहां हल्के संयुक्त सूजन के साथ हल्के विकृति थी । ROM (चित्र बी) में कमी आई थी । इसके अलावा, कोई बंधन laxity की सराहना की थी । McMurray और Apley के परीक्षण नकारात्मक थे । एक से पहले उपचार एमआरआई एक कम आकार और पिछले meniscectomy (चित्रा 3सी, 3E, 3 जी, और 3I) के लिए माध्यमिक meniscus विकृत औसत दर्जे के साथ उपास्थि thinning दिखाया । मरीज को स्टेज 3 OA का निदान किया गया ।

तीसरे रोगी, एक ६० वर्षीय कोरियाई महिला, भी गंभीर दर्द की सूचना (वॉज score: 8; चित्र 4a) पर आराम । दर्द (शुक्र: ३६; चित्र 4a) चलने पर बढ़ती बताई गई । मरीज में हल्के घुटने की सूजन भी थी और रोम (फिगर 4B) में कमी आई । कोई बंधन laxity की सराहना की थी । McMurray और Apley के परीक्षण नकारात्मक थे । एक से पहले उपचार एमआरआई विकृति और थकावट के साथ कम आकार औसत दर्जे का meniscus दिखाया, और वहाँ उपास्थि thinning था (चित्रा 4c, 4E, 4g, और 4i).

उपचार योजना । सभी तीन प्रतिनिधि रोगियों स्टेरॉयड लेने से प्रतिबंधित किया गया, एस्पिरिन, गैर-स्टेरॉयड विरोधी भड़काऊ दवाओं (एनएसएआईडी), और एशियाई हर्बल दवाओं के लिए 1 प्रक्रिया से पहले सप्ताह. एमआरआई इमेजिंग अध्ययन लेने के बाद, lipoaspirates प्राप्त की और ऊपर संदर्भित के रूप में संसाधित किया गया । बाद में, ऑटोलॉगस वसा ऊतक-ASCs, ECM, हा युक्त SVF व्युत्पंन, और कैल्शियम क्लोराइड सक्रिय ऑटोलॉगस पीआरपी 0 दिन में घुटनों के लिए इंजेक्शन थे । liposuctions और ज्वाइंट इंजेक्शन के कारण जटिलता नहीं थी । बाद में, रोगियों को एक सप्ताह में क्लिनिक में लौटे, तो 2 सप्ताह, और फिर 3 सप्ताह के अतिरिक्त इंजेक्शन के लिए हा और ऑटोलॉगस पीआरपी कैल्शियम क्लोराइड के साथ सक्रिय ।

परिणाम है । ए एस सी/ECM मिश्रण इंजेक्शन के दूसरे सप्ताह के बाद, ८७ वर्षीय महिला मरीज के दर्द और ROM में सुधार (चित्रा 2a और बी b) । 16 सप्ताह तक, रोगी के दर्द और ROM काफी ७०% (चित्रा 2a और बी) से अधिक द्वारा सुधार हुआ । बाद उपचार एमआरआई लिया 16वें सप्ताह के बाद घुटने के औसत दर्जे की ओर hyaline उपास्थि की तरह ऊतक की वृद्धि की मोटाई दिखाया (चित्रा 2d, 2F, 2H, और 2J). एक तुलना के रूप में, मतलब प्रभावकारिता दर इस नैदानिक प्रोटोकॉल का उपयोग कर डेटा में ६७% था, ९१ रोगियों को शामिल, और २०१३15में सूचना दी ।

Figure 2
चित्रा 2: दर्द माप के परिणाम (क) और गति की सीमा (ख); और एमआरआई sagittal (सी-एफ) और कोरोनर (जी-जे) रोगी मामले से घुटने के अनुक्रमिक टी 2 विचार 1. * एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण खोज (p < ०.०५) को इंगित करता है । पूर्व उपचार एमआरआई स्कैन (सी: अनुक्रमिक छवि, 5/20; ई: 6/20; छ: 10/20; और मैं: 11/20) उपास्थि घावों (तीर) दिखाएँ. बाद उपचार एमआरआई 16 सप्ताह में स्कैन (D: 6/20; एफ: 7/20; H: 10/20; और जंमू: 11/20) के संकेत उपास्थि की तरह ऊतक पुनर्जनन (arrowhead) कि ए एस सी/ECM मिश्रण आधारित उपचार द्वारा मरंमत की गई है । यह आंकड़ा पाक एट अल की पिछली रिपोर्ट से संशोधित किया गया है । 10. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

६८ वर्षीय पुरुष मरीज के दर्द और ROM ए एस सी/ECM मिश्रण इंजेक्शन के दूसरे सप्ताह के बाद सुधार (3 ए और3 बी) । 18वें सप्ताह तक, अपने दर्द और ROM काफी आगे ८०% (आंकड़ा 3 ए और बी1) में सुधार हुआ । दोहराया एमआरआई 18वें सप्ताह के बाद लिया घुटने (चित्रा 3 डी, 3F, 3H, और 3J) के पूर्वकाल औसत दर्जे की ओर hyaline उपास्थि की ऊंचाई में वृद्धि की तरह दिखाया ।

Figure 3
चित्रा 3 : दर्द माप के परिणाम (क) और गति की सीमा (ख); और एमआरआई sagittal (सी-एफ) और कोरोनर (जी-जे) रोगी मामले 2 से घुटने की अनुक्रमिक टी 1 विचार । * एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण खोज (p < ०.०५) को इंगित करता है । पूर्व उपचार एमआरआई स्कैन (सी: अनुक्रमिक छवि, 6/20; ई: 7/20; छ: 13/20; और मैं: 14/20) उपास्थि घावों (तीर) दिखाएँ. बाद उपचार एमआरआई 16 सप्ताह में स्कैन (D: 6/20; एफ: 7/20; H: 13/20; और जंमू: 14/20) के संकेत उपास्थि की तरह ऊतक पुनर्जनन (arrowhead) कि ए एस सी/ECM मिश्रण आधारित उपचार द्वारा मरंमत की गई है । यह आंकड़ा पाक एट अल की पिछली रिपोर्ट से संशोधित किया गया है । 10. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

६० वर्षीय महिला मरीज के दर्द और रोम ए एस सी के दूसरे सप्ताह के बाद लगभग ५०% सुधार/ECM मिश्रण इंजेक्शन, (चित्रा 4a और 4B) । द्वारा 22एन डी सप्ताह, दर्द और ROM काफी ८०% (चित्रा 4a और 4B) में सुधार हुआ । दोहराया एमआरआई 22एन डी सप्ताह के बाद लिया घुटने की औसत पक्ष पर hyaline उपास्थि की तरह ऊतक की ऊंचाई में वृद्धि दिखाया (चित्रा 4d, 4F, 4H, और 4J) ।

Figure 4
चित्र 4 : दर्द माप के परिणाम (क) और गति की सीमा (ख); और एमआरआई sagittal (सी-एफ) और कोरोनर (जी-जे) रोगी मामले 3 से घुटने की अनुक्रमिक टी 2 विचार । * एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण खोज (p < ०.०५) को इंगित करता है । पूर्व उपचार एमआरआई स्कैन (सी: अनुक्रमिक छवि, 4/20; ई: 5/20; छ: 10/20; और मैं: 11/20) उपास्थि घावों (तीर) दिखाएँ. बाद उपचार एमआरआई 16 सप्ताह में स्कैन (D: 4/20; एफ: 5/20; H: 10/20; और जंमू: 11/20) के संकेत उपास्थि की तरह ऊतक पुनर्जनन (arrowhead) कि ए एस सी/ECM मिश्रण आधारित उपचार द्वारा मरंमत की गई है । यह आंकड़ा पाक एट अल की पिछली रिपोर्ट से संशोधित किया गया है । 10. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

२००१ में, Zuk एट अल. वसा ऊतक से अलग स्टेम कोशिकाओं के नीचे collagenase6के साथ कोलेजन मैट्रिक्स को तोड़ने के द्वारा । बाद में, समूह से पता चला कि इन स्टेम वसा ऊतक से पृथक कोशिकाओं उपास्थि और मूल में मध्य त्वक स्तर के अंय ऊतकों में बदल सकता है, साबित करना है कि इन स्टेम कोशिकाओं के मूल में mesenchymal थे ।

इसी तरह, इस अनुच्छेद में प्रस्तुत की प्रक्रिया मानव रोगियों के लिए इसी तरह की विधि लागू करने के लिए एक संशोधित प्रोटोकॉल है । प्रोटोकॉल के मुख्य संशोधन lipoaspirates को प्राप्त करने और प्रसंस्करण में बंद प्रणाली सीरिंज का शामिल है ताकि प्रक्रिया के प्रदर्शन की आसानी को बनाए रखते हुए हवाई संपर्क को कम किया जा सके । इस तरह बंद प्रणाली सीरिंज का उपयोग, वसा ऊतक liposuction के माध्यम से प्राप्त किया गया था । फिर, lipoaspirates बंद प्रणाली सीरिंज के भीतर collagenase के साथ मिलाया गया । बाद में, collagenase बंद प्रणाली सीरिंज के भीतर collagenase एकाग्रता कमजोर द्वारा मिश्रण से हटा दिया गया था । अंतिम परिणाम एक बाँझ वसा ऊतक प्रक्रिया में आसानी के साथ प्राप्त SVF व्युत्पंन है ।

इसी तरह की विधि का उपयोग करके, पाक २०११ में दिखाया, पहली बार के लिए, कि ऑटोलॉगस वसा ऊतक व्युत्पंन SVF संभावित रूप से उपास्थि ऊतक की तरह पुनः उत्पन्न द्वारा OA रोगियों के इलाज के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । बाद में पाक एट अल. यह भी दिखा दिया है कि ऑटोलॉगस वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF meniscus आंसू और chondromalacia के patellae के रेशेदार उपास्थि की तरह ऊतक और hyaline उपास्थि की तरह ऊतक, क्रमशः पैदा करने के इलाज के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । २०१३ में पाक एट अल. एक सुरक्षा ९१ ऑटोलॉगस वसा ऊतक के साथ इलाज रोगियों-व्युत्पंन SVF शामिल अध्ययन की सूचना दी । मतलब अध्ययन की प्रभावकारिता की रिपोर्ट ६७% था, ऑटोलॉगस वसा ऊतक लागू करने की संभावना के लिए सड़क फ़र्श-उपास्थि क्षति के साथ सामान्य रोगी जनसंख्या में SVF व्युत्पंन.

पाक एट अलद्वारा रिपोर्ट सबसे आम दुष्प्रभावों में से एक । में २०१३ सुरक्षा अध्ययन के बाद उपचार घुटने संयुक्त सूजन, जो 1 द्वारा समझाया जा सकता है) स्टेम सेल मौत, 2) RBCs द्वारा सूजन पीआरपी में निहित है, और/अवशिष्ट collagenase कि वसा ऊतक के अंतिम मात्रा में रह गया है-SVF व्युत्पंन । के बाद से MSCs वसा ऊतक11,12के ECM के भीतर मौजूद हैं, collagenase के साथ lipoaspirates को पचाने के लिए नीचे मैट्रिक्स को तोड़ने के लिए स्टेम सेल पट्टे पर एक अनिवार्य प्रक्रिया12है । हालांकि, नीचे मैट्रिक्स को तोड़ने के लिए स्टेम सेल जारी करने के बाद, शेष अवशिष्ट collagenase पूरी तरह से अंतिम मात्रा से हटा दिया जाना चाहिए ताकि किसी भी संभावित सूजन है कि अवशिष्ट collagenase28द्वारा उत्पादित किया जा सकता को रोकने के लिए । हालांकि collagenase सूजन पैदा कर सकता है, वसा ऊतक के अंतिम मात्रा में collagenase की एक तुच्छ राशि-व्युत्पंन SVF एक संयुक्त सूजन ट्रिगर नहीं हो सकता है । ऑटोलॉगस वसा ऊतक के इस तरह के अंतिम मात्रा-collagenase की एक तुच्छ राशि के साथ SVF व्युत्पंन पिछले कुछ वर्षों के लिए सुरक्षित रूप से इस्तेमाल किया गया है के लिए उपास्थि ऊतक की तरह पुनः उत्पन्न द्वारा घुटनों के OA का इलाज ।

हाल ही में वसा ऊतक प्राप्त करने के दो गैर एंजाइमी तरीकों-व्युत्पंन SVF29,30पेश किया गया है । इन तरीकों या तो यांत्रिक बल या अल्ट्रासाउंड (कंपन) बल का उपयोग, के बजाय collagenase । २०१८ में, D'Ambrosi एट अल. सूक्ष्म खंडित, शुद्ध ऑटोलॉगस वसा ऊतक है कि यांत्रिक शक्ति के टूटने के लिए29मैट्रिक्स का उपयोग करके प्राप्त किया गया था के साथ टखने की टखना के चार osteochondral घावों के इलाज का एक परिणाम की सूचना दी । कोई collagenase मैट्रिक्स को तोड़ने के लिए इस्तेमाल किया गया था । चार रोगियों को सूक्ष्म खंडित वसा ऊतक के साथ इलाज किया गया (यानी, यांत्रिक रूप से टूट-नीचे वसा ऊतक), उनके टखना के लिए29. इन सभी चार रोगियों नैदानिक सुधार प्रक्रिया के बाद छह महीने दिखाया । कोई भी जटिलताओं था । हालांकि, इस अध्ययन पर29, उपास्थि के संभावित पुनर्जनन की कोई रिपोर्ट नहीं था. एक और इस कंपन ऊर्जा को शामिल वर्ष प्रकाशित अध्ययन से पता चला है कि कुछ आवृत्ति में कंपन ऊर्जा स्टेम कोशिकाओं को अलग करने के लिए पर्याप्त नहीं था30।

जैसा कि ऊपर दिखाया गया है, विभिंन समूहों के विभिंन अपक्षयी संयुक्त विकारों के इलाज के लिए एक ऑटोलॉगस वसा ऊतक का उपयोग करने के लिए विभिंन प्रोटोकॉल है । प्रोटोकॉल liposuction के लिए इस्तेमाल किया प्रवेशनी के आकार से भिन्न हो सकते हैं, उपयोग वसा ऊतक की राशि, प्रकार और collagenase की राशि (यदि कोई हो), इंजेक्शन की विधि, और इतने पर. चूंकि MSCs वसा ऊतक के ECM के भीतर मौजूद हैं, collagenase का प्रभाव है, या यांत्रिक बलों का उपयोग शुद्धि विधि, एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं । विशेष रूप से, collagenase की प्रभावकारिता इस तरह के वसा ऊतक के आकार, वसा ऊतक की मात्रा, collagenase, समय और collagenase के साथ गर्मी के तापमान की एकाग्रता, और बचे हुए को हटाने की प्रक्रिया के रूप में कारकों पर निर्भर हो सकता है collagenase, जो सेल नुकसान28पैदा कर सकता है ।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि collagenase, के रूप में यह इस प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण घटक है वसा ऊतक युक्त स्टेम सेल का उत्पादन-SVF व्युत्पंन, वसा ऊतक के अंतिम मात्रा-SVF व्युत्पंन पर एक नकारात्मक प्रभाव हो सकता है । इस प्रक्रिया में, collagenase गाढ़ा lipoaspirates के साथ मिश्रित है, homogenized, मशीन, और फिर धोया । इस प्रक्रिया के दौरान, स्टेम सेल collagenase को उजागर कर रहे हैं, जो28स्टेम कोशिकाओं के अस्तित्व पर एक हानिकारक प्रभाव हो सकता है । बहुत अधिक एकाग्रता या collagenase के लंबे समय तक जोखिम स्टेम सेल व्यवहार्यता अंतिम28मात्रा में कम हो सकता है । इसके अलावा, collagenase की बहुत अंतिम मात्रा में छोड़ दिया संयुक्त की सूजन पैदा कर सकता है के बाद से collagenase नीचे संयुक्त के उपास्थि मैट्रिक्स टूट सकता है28इंजेक्शन ।

collagenase के संभावित नकारात्मक प्रभाव के अलावा, liposuction अन्य संभावित जटिलताओं को ले जा सकता है । वसा ऊतक प्राप्त करने के क्रम में-व्युत्पंन SVF, liposuction पहले किया जाना चाहिए । liposuctions प्रदर्शन, अंय चिकित्सा प्रक्रियाओं के रूप में, त्वचा समोच्च, seromas, संक्रमण, पेट की दीवार के छिद्र, नेक्रोटाइज़िंग fasciitis, वसा आवेश, और फुफ्फुसीय आवेश में अनियमितताओं जैसे कुछ संभावित जटिलताओं वहन करती है । इन जटिलताओं के बीच, त्वचा समोच्च अनियमितताओं एक बहुत ही आम पक्ष प्रभाव है कि आसानी से छोटे cannulas का उपयोग करके रोका जा सकता है और सतही liposuctions31,३२से परहेज कर रहे हैं । Seromas, जो चूषण क्षेत्र में तरल द्रव का एक संग्रह है, भी आक्रामक liposuction३३का परिणाम हो सकता है । अंय संभावित जटिलताओं जैसे संक्रमण, नेक्रोटाइज़िंग fasciitis, पेट की दीवारों के छिद्र, वसा आवेश, या फुफ्फुसीय आवेश सभी संभव हैं । हालांकि, इन जटिलताओं को भी सख्त बाँझ तकनीक का उपयोग करके और रोगी अनुपालन३४में सुधार के द्वारा रोका जा सकता है ।

इसके अलावा, सभी तीन रोगियों को शुरू में एक हल्के संयुक्त बहाव, श्लेषक कलाशोथ का एक स्पष्ट संकेत के साथ प्रस्तुत अध्ययन में शामिल थे । वसा ऊतक के साथ उपचार के बाद-व्युत्पंन SVF, इन सभी रोगियों संयुक्त सूजन में सुधार । इस कारण से, यह भी मान लेना उचित है कि नैदानिक लक्षणों के सुधार संभव उपास्थि पुनर्जनन के कारण नहीं है, लेकिन इसके बजाय, modulatory और श्लेष झिल्ली३५ पर स्टेम कोशिकाओं और/या पीआरपी के विरोधी भड़काऊ प्रभाव के कारण , ३६. वैकल्पिक रूप से, लक्षण सुधार उपास्थि की तरह ऊतक के संभव पुनर्जनन के साथ साथ श्लेष झिल्ली पर स्टेम कोशिकाओं और/या पीआरपी के दोनों modulatory और विरोधी भड़काऊ प्रभाव के लिए योगदान किया जा सकता है । हालांकि अधिक शोध के लिए लक्षण सुधार के सही तंत्र चित्रित आवश्यक है, ऑटोलॉगस के रूप में इस percutaneous सेल थेरेपी के इंट्रा जोड़दार इंजेक्शन, homogenized वसा ऊतक-SVF पीआरपी के साथ सक्रिय ऑटोलॉगस के साथ व्युत्पंन कैल्शियम क्लोराइड और/या हा घुटने OA के इलाज की मौजूदा रणनीति के लिए एक वैकल्पिक उपचार प्रदान कर सकते हैं ।

ऑटोलॉगस पीआरपी के अलावा के लिए के रूप में संबंध है, यह व्यापक रूप से स्वीकार किए जाते है कि पीआरपी विभिंन विकास कारकों और इंजेक्शन MSCs के लिए अंतर कारकों को बढ़ने और३७,३८,३९अंतर होता है । पीआरपी भी एक collagenase बेअसर प्रभाव४०है दिखाया गया है । hyaluronic एसिड के अलावा के बारे में (हा), हा एक मचान सामग्री के रूप में एक संभावित भूमिका है, उपास्थि ऊतक के लिए अपने उच्च अपनत्व के कारण, और एक संभावित भूमिका के लिए उपास्थि मैट्रिक्स४१मर्मज्ञ में स्टेम सेल की सहायता के लिए दिखाया गया है ।

वसा ऊतक प्राप्त करने की अधिक नई प्रक्रियाओं के रूप में-व्युत्पंन SVF उपलब्ध हैं, lipoaspirates प्रसंस्करण की एक विधि का एक अनुकूलन प्रक्रिया को मानकीकृत करने के लिए आवश्यक है । हालांकि, यह प्राप्त करने और ऑटोलॉगस वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF प्रसंस्करण की प्रक्रिया में संभावित बदलाव की संख्या के कारण एक मुश्किल काम हो सकता है । उदाहरण के लिए, प्रत्येक व्यक्ति के रोगी में चमड़े के नीचे वसा ऊतक की बनावट में अंतर, उंर बढ़ने या मोटापे की डिग्री के कारण, collagenase गतिविधियों के लिए अलग प्रतिक्रियाओं हो सकता है, ऑटोलॉगस वसा में ASCs की एक अलग संख्या में जिसके परिणामस्वरूप ऊतक-व्युत्पंन SVF४२। इसके अलावा, वसा ऊतक के प्रत्येक ग्राम में स्टेम कोशिकाओं की संख्या एक रोगी से दूसरे को अलग कर सकते है के रूप में रिपोर्ट स्टेम सेल संख्या के महान रूपांतर द्वारा दिखाए गए कई प्रकाशनों में7,19,20, 21 , 22 , 23.

यह इस अनुच्छेद में प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक उपंयास है, अभिनव के लिए संभावित ऑटोलॉगस वसा ऊतक के percutaneous इंजेक्शन के साथ उपास्थि की तरह ऊतक पुनः उत्पंन द्वारा मानव घुटने OA के इलाज की वर्तमान रणनीति में सुधार की प्रक्रिया-व्युत्पंन SVF. collagenase का सही इस्तेमाल इस प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण और अहम कदम है । बंद प्रणाली सीरिंज का उपयोग करते हुए बाँझता रखने के लिए प्रक्रिया के प्रदर्शन की सुविधा को बनाए रखते हुए Zuk एट अलद्वारा विकसित प्रोटोकॉल के प्रमुख संशोधन है. 5 इसके अलावा, मानव आवेदन के लिए, अंतिम वसा ऊतक में निहित collagenase की अवशिष्ट राशि-व्युत्पंन SVF किसी भी संयुक्त सूजन को रोकने के लिए तुच्छ होना चाहिए । इस प्रोटोकॉल की सीमाएं हैं: अंतिम मात्रा में collagenase अवशेषों (हालांकि यह नगण्य हो सकता है), कोई नियंत्रण समूह है कि अकेले पीआरपी और हा इंजेक्शन, कोई बायोप्सी, नैदानिक पीआरपी के कारण लक्षण के सुधार को छोड़कर कोई सबूत नहीं, छोटे रोगियों की संख्या (पायलट अध्ययन), वसा ऊतक के कोई धता घटक-व्युत्पंन SVF, और 3 रोगियों में से प्रत्येक में स्टेम सेल की संख्या का कोई विनिर्देश । एक meniscus आंसू, chondromalacia patellae, रीढ़ की हड्डी की डिस्क विकारों, एक देरी चिकित्सा (या गैर चिकित्सा) अस्थि भंग, एक गैर चिकित्सा त्वचा अल्सर, स्तन पुनर्निर्माण, और अन्य चिकित्सा विकारों के रूप में विकारों के लिए वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF लागू हो सकता है नैदानिक परिणाम में सुधार. हालांकि इन संभावित नैदानिक अनुप्रयोगों वसा ऊतक-व्युत्पंन SVF, और अधिक गहन और जोरदार नैदानिक शोध कर रहे है वसा ऊतक शामिल करने के लिए आवश्यक है-वास्तविक नैदानिक सेटिंग्स में SVF व्युत्पंन ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखक Mipro चिकित्सा क्लिनिक के कर्मचारियों से समर्थन और Jaepil/डेविड ली द्वारा चित्रा डिजाइन स्वीकार करता है । यह काम MSIT (संख्या एनआरएफ-2017M3A9E4078014) द्वारा वित्त पोषित एनआरएफ के जैव और चिकित्सा प्रौद्योगिकी विकास कार्यक्रम से अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था; और कोरिया के नेशनल रिसर्च फाउंडेशन (एनआरएफ) विज्ञान और आईसीटी (संख्या एनआरएफ-2017R1A2B4002315 और एनआरएफ-2016R1C1B2010308) मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Material
5% Betadine (povidone-iodine)  Firson Co., Ltd. 657400260
2% Lidocaine  Daehan Pharmaceutical Co. 670603480
Tumescent solution  Myungmoon Pharm. Co. Ltd. N01BB01 The solution was composed of 500 mL normal saline, 40 mL 2% lidocaine, 20 mL 0.5% marcaine, and 0.5 mL epinephrine 1:1000.
Liberase TL and TM research grade  Roche Applied Science 5401020001
D5LR Dahan Pharm. Co., Ltd. 645101072 Dextrose 5% in lactated Ringer's solution 
Anticoagulant citrate dextrose solution  Fenwal, Inc. NDC:0942-0641 The solution was composed of 0.8% citric acid,
0.22% sodium citrate, and 0.223% dextrose.
3% (w/v) Calcium chloride  Choongwae Pharmaceutical Co. 644902101
0.5% (w/v) HA (Hyaluronic acid ) Dongkwang pharm. Co., Ltd. 645902030
0.25% Ropivacaine Huons Co., Ltd. 670600150
Equipment
3.0 mm Cannula  WOOJU Medical Instruments Co. ML30200
60-mL Luer-Lock syringe BD (Becton Dickinson)  309653
Centrifuge Barrel Kit  CPL Co., Ltd. 30-0827044
Tissue homogenizer that contains blades CPL Co., Ltd. 30-0827045
Rotating incubator mixer Medikan Co., Ltd MS02060092
Centrifuge Hanil Scientific Inc. CE1133
Magnetic Resonance Imaging Philips Medical Systems Inc. 18068
Ultrasound Imaging System Samsung Medison co., Ltd CT-LK-V10-ICM-09.05.2007

DOWNLOAD MATERIALS LIST

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चिकित्सा मुद्दा १३९ दवा वसा ऊतक-व्युत्पन्न स्टेम सेल Extracellular मैट्रिक्स मानव उपास्थि पुनर्जनन पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस पुनर्जन्म चिकित्सा Mesenchymal स्टेम सेल
वसा ऊतक के उत्पादन के नैदानिक प्रोटोकॉल-संभावित उपास्थि पुनर्जनन के लिए Stromal संवहनी अंश व्युत्पंन
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Pak, J., Lee, J. H., Pak, N. J., Park, K. S., Jeon, J. H., Jeong, B. C., Lee, S. H. Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration. J. Vis. Exp. (139), e58363, doi:10.3791/58363 (2018).

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