Encyclopedia of Experiments: Biology
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour afficher ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- ابدأ بتركيب يرقة نظيفة ومخدرة تحت زلة غطاء زجاجي ورأسها لأعلى.
ثم يعرض المحور المستهدف إلى ليزر بفوتونين بقوة أعلى من المستخدمة في التصوير للتسبب في الضرر.
وقف التعرض بالليزر على الفور عندما يكون هناك ضرر للخلية العصبية المستهدفة، مما أدى إلى استئصال الاكستوم، أو قطع المحور.
في بروتوكول المثال ، سنقوم بتركيب يرقة للفحص المجهري ، والحث على إلحاق الضرر بالخلايا العصبية الحسية اليرقات ، وتتبع التجديد العصبي.
- ابدأ بتخدير اليرقات.
بعد ذلك ، على شريحة زجاجية ضع قطرة واحدة من زيت الهالوكربون 27 في المركز ، ووضع بقعة من الشحوم الفراغية على كل من الزوايا الأربع.
بعد ذلك ، استخدم القوة اللطيفة لتمرير زلة الغطاء للفة الخلايا ليتم اجتثاثها إلى حيث سيصيبها الليزر ثنائي الفوتون بسهولة أكبر.
في البرنامج، انتقل إلى وضع المسح الضوئي وحمل البروتوكول المحفوظ. تأكد من فتح الثقب على طول الطريق.
بعد ذلك، أوقف المسح الحي حتى يصبح زر الاقتصاص متاحا. باستخدام وظيفة الاقتصاص، اضبط نافذة المسح الضوئي لتركيز المنطقة المستهدفة على الموقع المحتمل للإصابة فقط. ثم افتح نافذة تصوير جديدة.
بعد ذلك ، قم بالتبديل مرة أخرى إلى نافذة التصوير الأصلية وحدد الوضع المباشر ، وابحث عن المنطقة التي تم استهدافها فقط عن طريق ضبط التركيز.
- من المؤشرات الجيدة على الإصابة الناجحة ظهور حفرة صغيرة أو هيكل يشبه الحلقة أو حطام موضعي في موقع الإصابة.
- الآن إزالة بعناية زلة الغطاء، ونقل اليرقة المصابة على لوحة جديدة مع عجينة الخميرة.
للتصوير اللاحق لليرقة ، استخدم الإعداد الكونفوجال المحفوظ وجمع صور مكدس z بهدف 25x. تأكد من تضمين نقطة التطبيع بحيث يمكن قياس التجديد كميا.
