Ciblage fonctionnalisé du cancer de l’ovaire par nanoparticules fonctionnalisées : une technique pour faciliter l’absorption de l’agent de contraste nanoparticulaire conjuguée à l’acide folique par les cellules cancéreuses de l’ovaire

Les récepteurs du folate sont des glycoprotéines associées à la membrane surexprimées par la majorité des cellules cancéreuses de l’ovaire. L’exploitation de ces récepteurs permet l’administration ciblée de nanoparticules diagnostiques dans les cellules cancéreuses.

Commencez par une suspension des conjugués d’agent de contraste nanoparticulaire recouverts d’acide folique souhaités. Ajoutez cette suspension de nanoparticules dans une culture adhérente de cellules cancéreuses de l’ovaire. Incuber la culture pendant la période souhaitée.

L’acide folique fonctionnalisé en nanoparticules aide à reconnaître les récepteurs de folate exprimés sur les cellules cancéreuses, favorisant la liaison sélective des conjugués de nanoparticules avec les cellules. Par la suite, la membrane plasmique s’invagine, facilitant l’absorption cellulaire et l’accumulation de nanoparticules.

Récoltez les cellules cancéreuses. Ensuite, centrifugez pour séparer les cellules du surnageant contenant toutes les nanoparticules non liées. Jetez le surnageant et remettez en suspension les cellules contenant des nanoparticules dans un tampon approprié pour les applications en aval.

Tout d’abord, mélangez les nanoparticules de sulfure de cuivre recouvertes d’acide folique à la bonne concentration dans un milieu RPMI frais. Ajoutez cette solution de nanoparticules dans chaque puits de la plaque préparée à 24 puits qui contient des cellules SKOV-3 à une concentration de 400 microgrammes par millilitre. Incuber à 37 degrés Celsius avec 5 % de dioxyde de carbone pendant deux heures.

Après cela, essayez les cellules avec 0,5 millilitre de trypsine à 0,25 % et d’EDTA. Pour neutraliser la trypsine, ajoutez au moins 1 millilitre de milieu de croissance complet RPMI 1640 sans acide folique et centrifugez les cellules à 123 x g pendant six minutes. Pour laver les cellules, retirez le surnageant.

Remettez les cellules en suspension dans 2 millilitres de PBS et centrifugez à 123 x g pendant six minutes. Répétez cette étape de lavage deux fois pour éliminer toutes les nanoparticules non liées.

Ensuite, remettez en suspension les cellules avec 1 à 2 millilitres d’une solution Tween à 2 % dans du PBS. Comptez les cellules à l’aide d’un hémocytomètre et de Trypan Blue. Diluer les cellules dans une solution de 2 % de Tween et de PBS à la concentration choisie pour la détection.