Modélisation d’une tumeur orthotopique de la vessie dans un modèle murin : une procédure d’administration intravésicale de cellules cancéreuses dans la vessie murine

L’instillation intravésicale facilite l’administration de cellules cancéreuses dans la vessie d’un animal receveur. Pour commencer, préparez une souris femelle anesthésiée en position couchée sur un coussin chauffant pour réguler sa température corporelle. Videz la vessie de l’urine.

Ensuite, assemblez un cathéter relié à une seringue contenant une solution de poly-L-lysine ou de PLL. Lubrifiez l’extrémité du cathéter pour assurer une insertion urétrale en douceur et accéder à la vessie. Après l’insertion, injectez lentement la solution PLL dans la vessie.

La libération lente de la LPL empêche le reflux vésico-urétéral - le reflux de l’urine de la vessie vers les uretères et les reins. Placez un bouchon sur le cathéter pour éviter un écoulement prématuré. Les molécules PLL injectées chargées positivement interagissent et adhèrent au revêtement de glycosaminoglycane chargé négativement sur la paroi interne de la vessie.

Retirez le cathéter et libérez la vessie de la solution PLL non liée et de l’urine. À l’aide d’un autre cathéter-seringue, injectez lentement une suspension de cellules cancéreuses réfrigérées dans la vessie pour prévenir le reflux vésico-urétéral et l’implantation de cellules qui s’ensuit dans les reins. Fixez le bouchon sur le cathéter.

La charge superficielle altérée de la couche de glycosaminoglycane améliore son interaction électrostatique avec les cellules cancéreuses, facilitant ainsi leur adhésion. Retirez le cathéter et libérez la vessie des cellules cancéreuses non adhérentes et de l’urine. Au fil du temps, les cellules cancéreuses implantées dans la vessie prolifèrent pour établir des tumeurs primaires.

Une fois qu’une souris femelle a été anesthésiée, hydratez-la par une injection intrapéritonéale de la solution de Hartmann à raison de 0,1 millilitre par 10 grammes de poids corporel. Répétez cette opération toutes les une ou deux heures pendant l’anesthésie.

Ensuite, appliquez une pommade ophtalmique stérile sur les deux yeux. Réappliquez au besoin. Ensuite, placez la souris en décubitus dorsal sur des serviettes en papier au-dessus d’un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle. Ensuite, fixez les pattes arrière avec du ruban adhésif. Maintenant, appliquez une légère pression sur la région abdominale inférieure et recueillez l’urine dans un tube de 1,5 millilitre.

Ensuite, chargez une seringue de 1 millilitre avec du PLL stérile et fixez un cathéter IV de calibre 24 avec le stylet à aiguille retiré. Appliquez du lubrifiant sur l’extrémité du cathéter. Ensuite, insérez le cathéter dans l’urètre et, à l’aide d’une pince, guidez-le vers la vessie. Arrêtez-vous lorsque la résistance se fait sentir. Ensuite, éjectez lentement 50 microlitres de PLL à raison de 10 microlitres toutes les 20 secondes pour éviter le reflux vésico-urétéral.

Maintenant, laissez le cathéter dans la vessie pendant 20 minutes avec un bouchon pour éviter l’écoulement. Après 20 minutes, retirez le cathéter et libérez la vessie de tout contenu en appuyant doucement sur le bas-ventre. Ensuite, à l’aide d’une seringue de 1 millilitre, rincez tout le contenu restant du cathéter.

Maintenant, mélangez soigneusement les cellules MB49-PSA par pipetage et chargez-les dans une seringue de 1 millilitre. Fixez le cathéter et lubrifiez-le comme avant. Insérez le cathéter dans la vessie comme précédemment et commencez par injecter les cellules en utilisant une éjection progressive de 10 microlitres toutes les 20 secondes. Ensuite, attendez une heure.

Au bout d’une heure, retirez le cathéter et libérez la vessie de tout contenu. Ensuite, relâchez la souris. Positionnez-le sur sa face ventrale et relancez-le avec une injection d’atipamezole. Maintenant, surveillez la souris jusqu’à ce qu’elle retrouve sa position couchée sternale, puis renvoyez-la dans sa cage d’origine.