Injection mur souris vessie
12 juillet 2011
Injection de mur souris vessie est une approche utile pour l'étude des cellules souches orthotopique de la vessie et la biologie du cancer. Cette méthode microchirurgicale délicates peuvent être maîtrisées avec une technique minutieuse et pratique.
L'objectif général de cette procédure est d'introduire des cellules dans des zones définies de la paroi vésicale. Cela est réalisé en pratiquant d'abord une incision abdominale afin d'exposer la vessie. L'étape suivante de la procédure consiste à insérer le biseau de l'aiguille de manière intramuraire.
La dernière étape de la procédure consiste à pousser le piston de la seringue afin d'injecter les cellules d'intérêt dans la paroi de la vessie. Un implantation réussie des cellules se manifeste par un bleb bien localisé, sans fuite de liquide et stable en taille. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme l'inoculation transurétrale de souris avec des cellules, est qu'elle permet de diriger l'endroit où les cellules s'implanteront au sein de la vessie.
La démonstration visuelle du muscle li est essentielle, car les techniques d'injection sont difficiles à apprendre. Connaître l'angle correct et la position d'entrée de l'aiguille dans la vessie est essentiel pour la réussite de la technique. Sélectionnez l'âge, le sexe et la souche des souris en fonction des besoins de l'expérience ici.
Des souris âgées de 8 à 12 semaines sont utilisées. Commencez par nettoyer la surface de la table chirurgicale avec du savon et de l'eau. Ensuite, essuyez la surface de la table chirurgicale avec des lingettes désinfectantes ou antiseptiques. Les instruments chirurgicaux doivent être stérilisés dans un autoclave avant la chirurgie.
Essuyez les instruments avec de l’éthanol à 70 % juste avant utilisation et réstérilisez-les à l’aide d’un stérilisateur à billes chauffées entre chaque intervention chirurgicale. Nettoyez une seringue Hamilton de 100 microlitres fixée à une aiguille de calibre 30 en aspirant à plusieurs reprises de l’alcool absolu, puis du tampon salin phosphate stérilisé. Placez un animal anesthésié en position dorsale sur un tapis chauffant afin de maintenir sa température corporelle normale.
Assurez un niveau suffisant d'anesthésie en plaçant le museau de l'animal dans une buse contenant de l'isoflurane vaporisé. Ensuite, rase les poils de la peau abdominale à l’aide d’un tondeur. Utilise un champ opératoire stérile jetable pour couvrir l’anus afin de prévenir la contamination fécale pendant l’intervention chirurgicale.
Placer une deuxième serviette chirurgicale sur l'abdomen inférieur et exposer un champ opératoire. Stériliser le site chirurgical par des applications répétées de Bétadine et d'alcool en utilisant un microscope stéréoscopique pour la magnification. Pratiquer une incision abdominale médiane inférieure avec des ciseaux.
Appliquez une pression douce sur l'abdomen pour exposer la vessie. Étant donné que la vessie est généralement partiellement ou complètement pleine, la pression exercée sur l'abdomen repoussera préférentiellement les autres organes et permettra à la vessie d'émerger par l'incision. Si la vessie est pleine, appliquez une pression douce vers le bas au niveau du dôme afin de la décompresser partiellement.
Remplir la seringue stérile Hamilton avec 50 microlitres de la solution échantillon. Insérer l'extrémité de l'aiguille avec le biseau vers le haut dans la paroi de la vessie et injecter la solution échantillon. Une injection réussie est indiquée par un bleb bien localisé qui ne fuit pas de liquide et conserve une taille stable.
Après l'injection, fermer l'incision à l’aide de clips de plaie. Laisser le sujet se rétablir sur un coussin chauffant. Ce protocole peut être réalisé en 10 à 15 minutes s’il est effectué correctement.
La réussite peut être confirmée par une analyse histologique de la vessie à des points temporels consécutifs après l'injection.
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Aperçu
Cet article décrit une technique microchirurgicale permettant l'injection de cellules dans la paroi de la vessie de la souris, facilitant ainsi l'étude des cellules souches de la vessie et de la biologie du cancer. Cette méthode permet une localisation précise de l'implantation cellulaire, ce qui constitue un avantage majeur par rapport aux techniques traditionnelles.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Biologie cellulaire
- Recherche sur le cancer
Contexte
- Comprendre la biologie de la vessie est essentiel pour faire progresser la recherche sur le cancer.
- Les méthodes actuelles d'implantation cellulaire présentent des limites en matière de précision.
- Cette technique vise à améliorer la localisation des cellules injectées.
- Des compétences en microchirurgie sont essentielles pour une application réussie.
Objectif de l'étude
- Introduire des cellules dans des zones spécifiques de la paroi vésicale.
- Améliorer l'étude des cellules souches vésicales et de la biologie du cancer.
- Fournir une méthode fiable pour l'implantation cellulaire.
Méthodes utilisées
- Incision abdominale pour exposer la vessie.
- Insertion intramurale d'une aiguille pour l'injection de cellules.
- Injection de cellules à l'aide d'une seringue.
- Surveillance de la formation d'une bulle stable pour confirmer un implantation réussie.
Résultats principaux
- Un implantation réussie se manifeste par un bleb localisé et stable.
- Cette méthode permet un positionnement ciblé des cellules dans la vessie.
- Elle présente des avantages par rapport aux techniques d'inoculation transurétrale.
- Elle fournit une base pour les études futures en biologie de la vessie.
Conclusions
- La technique microchirurgicale est efficace pour l'injection de cellules dans la vessie.
- Elle ouvre de nouvelles voies de recherche sur les cellules souches de la vessie et le cancer.
- Une technique minutieuse et une pratique rigoureuse sont essentielles pour réussir.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
L'injection dans la paroi de la vessie de souris permet une modélisation orthotopique précise de la biologie de la vessie, soutenant les études mécanistiques dans la recherche sur les cellules souches, les muscles lisses et le cancer. Cette technique améliore la confiance prédictive dans les systèmes pertinents pour la maladie en permettant une délivrance ciblée de cellules et un interrogatoire localisé des tissus. Sa reproductibilité et sa spécificité anatomique en font un outil essentiel pour la découverte précoce et le développement de modèles précliniques dans les filières de maladies urologiques.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Découverte précoce et validation de cibles
- Permet l'interrogation directe des voies spécifiques à la vessie et des populations cellulaires in vivo.
- Permet la validation fonctionnelle des cibles en autorisant l'implantation contrôlée de cellules et leur suivi.
- Facilite la réduction des risques mécanistiques grâce à une manipulation expérimentale spatialement définie.
Développement de criblages et de tests
- Prépare des modèles validés in vivo pour le criblage en aval de candidats thérapeutiques.
- Standardise la livraison des cellules et le ciblage anatomique, améliorant la reproductibilité entre les études.
- Génère des résultats quantitatifs tels que la formation localisée de bulles et la confirmation histologique.
Recherche translationnelle et préclinique
- Établit des modèles pertinents pour la maladie afin de découvrir et de valider des biomarqueurs translationnels.
- Permet une continuité entre les résultats obtenus en phase de découverte et les études précliniques d'efficacité et de sécurité.
- Facilite un développement adapté au risque en fournissant des données solides in vivo sur le comportement cellulaire et la réponse tissulaire.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Cette méthode d'injection microchirurgicale s'intègre dans la continuité découverte-préclinique en permettant des études in vivo fondées sur des hypothèses et en soutenant l'identification de candidats thérapeutiques dans la recherche sur les maladies de la vessie.
- Biologie de la découverte : Facilite la vérification d'hypothèses et la clarification des voies dans le tissu vésical.
- Écrantage : Fournit une plateforme reproductible pour évaluer des lignées cellulaires candidates ou des interventions.
- Analytique : Fournit des paramètres mesurables tels que la stabilité des bulles et les résultats histologiques pour une analyse comparative.
- Recherche translationnelle : S'aligne sur le développement de biomarqueurs et de modèles de maladies pour la validation préclinique.
- Réutilisation en entreprise : Offre un protocole standardisé et réutilisable pour divers programmes de recherche axés sur la vessie.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la recherche sur la vessie.
- Valeur opérationnelle : Favorise la standardisation, la reproductibilité et l'extensibilité entre les études.
- Valeur stratégique : Améliore la prise de décision « aller/ne pas aller » et l'efficacité du capital en permettant une validation robuste in vivo.
- Impact sur le portefeuille : Soutient la priorisation et l'avancement, ajustées au risque, des programmes ciblant la vessie.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en microchirurgie et des connaissances approfondies en anatomie pour des résultats reproductibles.
- Exige un accès à des instruments chirurgicaux stérilisés et à une infrastructure d'anesthésie.
- Implique une standardisation interéquipes des paramètres d'injection et du choix des animaux.
- Peut être adapté à diverses souches de souris et types cellulaires expérimentaux selon les objectifs de l'étude.
- Le succès dépend d'une technique précise et d'une confirmation par analyse histologique.
