Microscopie à réflexion interférentielle pour une visualisation sans marquage de la dynamique des microtubules
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 6:36 min • July 8th, 2025
La microscopie à réflexion interférentielle permet d’imager des microtubules qui grandissent et rétrécissent de manière dynamique.
Fixez les bandes de paraffine sur une lamelle et placez une lamelle légèrement plus petite sur le dessus. Chauffer pour faire fondre la paraffine en formant un canal scellé. Pipetez une solution contenant des anticorps à travers le canal. Les anticorps se fixent à la surface de la lamelle. Ajoutez une solution bloquante, bloquant les régions non liées aux anticorps et empêchant la liaison aux protéines non spécifiques.
Placez la lamelle sur la platine du microscope. Réglez le réchauffeur d’échantillon à une température facilitant la croissance des microtubules.
Pipette de graines de microtubules stabilisées avec un analogue non hydrolysable de guanosine triphosphate, GTP. Les graines se lient à la lamelle enrobée d’anticorps. Ajoutez un tampon contenant de la tubuline non étiquetée, du GTP et des agents réducteurs.
À une température et dans des conditions tampons optimales, les graines agissent comme des sites de nucléation, permettant la liaison de la tubuline non marquée et la croissance des microtubules.
Commencez l’imagerie. La lumière incidente se
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques