Un immunodosage multiplex basé sur des billes pour quantifier plusieurs cibles de cytokines

Prenez une plaque multipuits avec des filtres à la base.

Ajoutez un échantillon de test contenant différentes cytokines.

Ajoutez différents ensembles de microsphères différenciées par leur taille et leur intensité de fluorescence interne.

Chaque ensemble est conjugué à un anticorps ciblant une cytokine spécifique.

Incuber la plaque dans l’obscurité sous agitation.

Les anticorps se lient à leurs cytokines cibles, les immobilisant sur les microsphères.

Appliquez un aspirateur pour éliminer les cytokines non liées. Les cytokines liées aux microsphères sont conservées en raison de la plus petite taille des pores de la membrane.

Ajoutez un cocktail d’anticorps de détection conjugués à la biotine qui se lient aux cytokines liées à la microsphère.

Ajoutez une streptavidine fluorescente conjuguée au rapporteur et incubez dans l’obscurité sous agitation. La streptavidine se lie à la biotine, immobilisant le rapporteur sur le complexe de la microsphère.

Retirez les molécules non liées et remettez les microsphères en suspension.

À l’aide de la cytométrie en flux, identifiez les cytokines liées en déterminant la taille et la fluorescence interne des microsphères.

Pour déterminer la quantité d’