Procédé d’immunomarquage multiplex utilisant des anticorps primaires de la même espèce hôte

Prenez une section surrénalienne fixe et perméabilisée comprenant un cortex et une moelle. Traitez-le avec un tampon acide bouillant, en brisant les réticulations induites par la fixation pour le démasquage de l’antigène.

Bloquez les sites de liaison non spécifiques et introduisez des anticorps primaires qui se lient aux marqueurs spécifiques du cortex.

Ajoutez des anticorps secondaires biotinylés ciblant les anticorps primaires et des peroxydases conjuguées à la streptavidine se liant à la biotine.

Introduisez un tyramide marqué au fluorophore et du peroxyde d’hydrogène.

Les peroxydases immobilisées utilisent le peroxyde d’hydrogène pour activer le tyramide, qui se lie aux protéines voisines, marquant le cortex.

Ensuite, traitez la section avec le tampon d’ébullition pour éliminer les anticorps liés.

Introduire les mêmes anticorps primaires générés par l’espèce hôte ciblant les marqueurs spécifiques de la moelle épinière et les anticorps secondaires biotinylés.

Introduisez des peroxydases conjuguées à la streptavidine et un autre tyramide conjugué au fluorophore pour marquer la moelle.

L’élimination des anticorps primaires spécifiques du cortex inhibe l’anticorps secondaire réintr