Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:51 min • June 17th, 2025
Commencez par une configuration de microscope à fluorescence par réflexion interne totale (TIRF) avec une chambre d’imagerie couverte contenant une lamelle en verre avec des cellules de neuroblastome humain collées dans un tampon.
Ces cellules expriment des fluorophores spécifiques aux membranes des vésicules synaptiques.
En mode épifluorescence, sélectionnez une cellule pour l’imagerie.
En mode TIRF, à travers l’objectif, dirigez un laser vers l’échantillon, apparaissant comme une tache sur le couvercle.
Ajustez l’angle pour dépasser l’angle critique à l’interface entre la lamelle en verre à indice de réfraction élevé et l’échantillon à indice de réfraction inférieur, provoquant une réflexion interne totale (TIR), considérée comme une ligne mince.
Le TIR génère une onde évanescente qui excite les fluorophores sur la membrane la plus proche.
La fluorescence émise est collectée par l’objectif et captée par une caméra.
Affinez le réglage pour obtenir une image à contraste élevé de la membrane cellulaire près de la lamelle.
Optimisez les paramètres d’acquisition pour minimiser le photoblanchiment et définissez la fréquence d’échantillonnage.
Commencer l’imagerie TIRF pour visualiser les vésicu
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