Transplantation de cellules précurseurs d’interneurones dans le cerveau d’un bébé souris

Commencez par un bébé souris receveur anesthésié. Fixez sa tête avec du ruban adhésif, en vous assurant que le crâne reste exposé.

Utilisez la référence anatomique lambda pour localiser la région cérébrale cible.

Positionnez une micropipette sur la région cible, chargée d’une suspension de cellules précurseurs d’interneurones capables de se différencier en interneurones matures.

Ces cellules précurseurs sont dérivées du cortex, du striatum ou de l’hippocampe d’un chiot donneur au même stade de développement que le receveur.

Injectez la suspension dans le cerveau pour effectuer soit une greffe homotopique, dans laquelle les précurseurs sont délivrés dans leur région d’origine, soit une greffe hétérotopique, où ils sont introduits dans une autre région du cerveau.

Laissez la suspension se diffuser avant de rétracter la micropipette pour éviter le reflux.

Transférez le chiot sur un coussin chauffant pour le récupérer.

La survie et la maturation des précurseurs du donneur dans le cerveau du petit receveur peuvent maintenant être évaluées.

Chargez une micropipette à pointe fine d’huile minérale. Fixez la micropipette à un injecteur de nanolitres et fixez l’appareil d’injection de nanolitres à un manipulateur fixé à une base magnétique. Pendant que le premier chiot est anesthésié sur de la glace, pipetez la solution cellulaire plusieurs fois pour assurer une distribution cellulaire homogène.

Éjectez l’huile minérale et remplissez complètement la pipette avec la suspension à cellule unique. Après avoir confirmé l’absence de réponse au pincement des orteils, placez le chiot sur un couvercle de boîte de Pétri avec la tête reposant sur du mastic adhésif de sorte que le haut de la tête soit relativement plat.

Couvrez la tête avec un morceau de ruban adhésif de laboratoire avec un trou en diamant, en tirant sur le ruban jusqu’à ce que la peau soit étirée de sorte que la tête soit fermement fixée et que le lambda soit visible à travers le trou. Déplacez le chiot fixé sous l’injecteur de nanolitre et abaissez la micropipette de manière à ce que la pointe soit directement au-dessus de lambda.

Observez les coordonnées x et y sur le manipulateur et ajustez les boutons du manipulateur jusqu’à ce que la micropipette soit positionnée aux coordonnées appropriées le long des axes médiolatéral et antéropostérieur de la tête. Abaissez la micropipette jusqu’à ce que la pointe crée une petite concavité sur la peau, et tournez le bouton du manipulateur de l’axe z fermement mais doucement pour enfoncer la micropipette à travers la peau et le crâne jusqu’au cerveau.

Rétractez légèrement la micropipette jusqu’à ce que la pointe soit entourée d’un cône de peau, en forme de tente, et visualisez les coordonnées le long de l’axe z. Abaissez ensuite la micropipette à la profondeur d’expérience appropriée et injectez les cellules. Attendez 15 secondes après la distribution des cellules avant de rétracter la micropipette et répétez l’injection à un deuxième endroit si vous le souhaitez. Placez le chiot sur un coussin chauffant et surveillez jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement avant de le transférer dans la cage familiale.