Name: De base Caenorhabditis elegans Méthodes: Synchronisation et dobservation (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Apprenez la synchronisation de C. elegans au stade larvaire L1 pour la biologie du développement. Cette méthode utilise l'hypochlorite alcalin pour isoler les embryons et obtenir une population uniforme.

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Les auteurs tiennent à remercier MICINN (programme de soutien de la ZEP Montserrat Porta de la Riva), AGAUR (Phd bourse à Laura Fontrodona), Instituto de Salud Carlos III (Miguel Servet programme de soutien à Julián Cerón), et Marie Curie IRG, ISCIII et IDIBELL pour le financement le laboratoire.

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<li>Protocols [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://protocols.mmml.nl">http://protocols.mmml.nl</a> (2012).</li>
</ol>

Nous n&#39;avons rien à communiquer.

Synchronisation des nématodes Plusieurs solutions de blanchiment ont été décrits. Nous avons essayé cinq recettes différentes (tableau I) et, dans nos mains, ils n&#39;ont pas montré de différences significatives dans la synchronisation des populations de vers (Fig. 1). Cependant, nos expériences montrent que fait paramètres tels que la température (Fig. 2), la solution de blanchiment rapport: le volume de vers (Fig. 3) et le v...

de base<em&gt; caenorhabditis elegans</em&gt; méthodes: synchronisation et d&#39;observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

La recherche sur la biologie moléculaire et du développement des nématode Caenorhabditis elegans a été commencé dans les années soixante-dix par Sydney Brenner et il a depuis été largement utilisé comme un organisme modèle 1. C. elegans possède des attributs clés tels que la simplicité, la transparence et cycle de vie court qui en ont fait un système expérimental adéquat pour les études biologiques fondamentales pour de nombreuses années 2. Découvertes dans ce nématode ont de larges implications car de nombreux processus cellulaires et moléculaires que le développement des animaux de contrôle sont évolutives 3 conservée. Cycle de vie C. elegans passe par un stade embryonnaire et quatre stades larvaires avant que les animaux atteignent l&#39;âge adulte. Le développement ne peut prendre de 2 à 4 jours selon la température. Dans chacune des étapes de plusieurs traits caractéristiques peuvent être observées. La connaissance de sa lignée cellulaire complète 4,5 avec le annotat profondeion de son génome tourner ce nématode dans un grand modèle dans des domaines aussi divers que la neurobiologie 6, le vieillissement 7,8, biologie des cellules souches 9 et la biologie de la lignée germinale 10. Une fonctionnalité supplémentaire qui rend C. elegans un modèle intéressant à travailler avec la possibilité d&#39;obtenir des populations de vers synchronisés à un stade précis grâce à un protocole relativement facile. La facilité de maintenir et de propager ce nématode a ajouté à la possibilité de synchronisation de fournir un outil puissant pour obtenir de grandes quantités de vers, qui peuvent être utilisés pour une grande variété de petites expériences ou à haut débit tels que des écrans ARNi, microarrays, séquençage massif, immunoblot ou hybridation in situ, entre autres. En raison de sa transparence, C. structures elegans peuvent être distingués sous le microscope en utilisant la microscopie contraste interférentiel différentiel, aussi connu sous le nom micros Nomarskicopier. L&#39;utilisation d&#39;un liant l&#39;ADN fluorescent, DAPI (4 &#39;,6-diamidino-2-phénylindole), par exemple, peut conduire à l&#39;identification spécifique et la localisation des cellules individuelles, ainsi que des structures subcellulaires et aux défauts qui leur sont associés.

La facilité de maintenir et de propager le nématode<em&gt; C. elegans</em&gt; Faire un organisme modèle agréable de travailler avec. La possibilité de synchronisation permet vers le travail avec une quantité importante de sujets au même stade de développement, ce qui facilite l&#39;étude d&#39;un processus particulier chez de nombreux animaux.

De base<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Méthodes: Synchronisation et d&#39;observation

Les recherches sur la biologie moléculaire et développementale du nématode Caenorhabditis elegans ont été initiées au début des années soixante-dix par Sydney Brenner et elles ont...

Dans cette vidéo, nous allons vous montrer comment synchroniser C. elegans au stade larvaire L1. Il s'agit d'une méthode simple, mais très courante, qui s'avérera donc très utile. Vous êtes encore débutant.Si vous êtes un expert en langage C, vous pourriez trouver ici quelques conseils pour optimiser ce protocole. La base de la synchronisation des vers repose sur la résistance relative des larves et des embryons à la solution d'hypochlorite alcalin par rapport aux adultes. Ces vers adultes, contenant de nombreux embryons, sont incubés avec une solution d'hypochlorite afin qu'ils soient tués, ne laissant que les embryons.La seconde partie de la synchronisation est obtenue par l'absence de nourriture, de sorte que, même si les embryons éclosent à des moments différents, ils ne se développent pas au-delà du stade L un. La première étape pour démarrer un protocole de mise en place rapide consiste à disposer de vers au stade œuf pondu, avec plusieurs œufs répartis sur la boîte. Utilisez du M neuf pour récupérer les adultes afin de procéder à la récolte.En outre, les embryons qui ont déjà atteint la surface de la boîte peuvent être prélevés à l’aide d’un matériau souple, tel qu’un morcea

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Dans cette vidéo, nous montrons une méthode de production d’une population de C. elegans adultes stériles synchronisés sur le plan du développement. L’exemple de protocole synchronise les vers pour étudier les taux de consommation d’oxygène chez les animaux vivants.

Synchronisation des nématodes : une méthode pour obtenir des populations de vers à des stades de développement identiques

Pour étudier la relation entre l’homéostasie des protéines, le stress et le vieillissement, nous avons surveillé les changements dans le repliement des protéines en suivant le dysfonctionnement des protéines, la localisation des protéines dans la cellule et la stabilité des protéines aux niveaux de l’organisme, des cellules et des protéines, en utilisant le métazoaire génétiquement traitable Caenorhabditis elegans comme système modèle.

Utilisation de Caenorhabditis elegans comme système modèle pour étudier l’homéostasie des protéines dans un organisme multicellulaire

Ici, nous caractérisons les réponses de stress protéotoxiciques cellulaires dans le nématode C. elegans en mesurant l’activation des reporters transcriptionnels fluorescents et en assayant la sensibilité au stress physiologique.

Mesures des réponses physiologiques au stress à C. Elegans

Ici, des protocoles standardisés sont présentés pour évaluer l’induction de la réponse de choc thermique (HSR) à Caenorhabditis elegans en utilisant RT-qPCR au niveau moléculaire, les journalistes fluorescents au niveau cellulaire, et la thermorecovery au niveau de l’organisme.

Méthodes normalisées pour mesurer l’induction de la réponse de choc thermique à Caenorhabditis elegans

Nous présentons ici un protocole pour la préparation et le montage des embryons de Caenorhabditis elegans , l’enregistrement du développement sous un microscope 4D et le traçage de la lignée cellulaire.

Microscopie 4D: Démêler le développement embryonnaire de Caenorhabditis elegans à l’aide de la microscopie Nomarski

Cette étude présente des protocoles pour deux approches d’analyse de l’activité locomotrice semi-automatisées chez les vers gas-1de la maladie du complexe I de C. elegans (fc21),à savoir ZebraLab (un test à débit moyen) et WormScan (un test à haut débit) et fournit une analyse comparative parmi un large éventail de méthodes de recherche pour quantifier le comportement des nématodes et la fonction neuromusculaire intégrée.

Analyse comparative de méthodes expérimentales pour quantifier l’activité animale dans les modèles de maladie mitochondriale de Caenorhabditis elegans

Ce protocole décrit une perturbation de 96 puits de Caenorhabditis elegans colonisés par des bactéries individuelles à la suite d’une paralysie par le froid et d’un blanchiment de surface pour éliminer les bactéries externes. La suspension résultante est plaquée sur des plaques de gélose pour permettre une quantification précise et à débit moyen de la charge bactérienne dans un grand nombre de vers individuels.

Utilisation de données à un seul ver pour quantifier l’hétérogénéité dans les interactions caenorhabditis elegans-bactériennes

Caenorhabditis elegans est un excellent système modèle avec des méthodes robustes et peu coûteuses pour étudier la durée de vie, la durée de vie et la résilience au stress.

Étude des méthodes à faible coût pour mesurer la durée de vie et la durée de vie à Caenorhabditis elegans

Il s’agit d’une méthode couramment utilisée pour la dissection de gonades de C. elegans suivie d’une fissure de congélation, qui produit des échantillons germinaux pour l’immunofluorescence via la coloration des anticorps, ou pour la coloration DAPI simple pour visualiser l’ADN. Ce protocole a été couronné de succès pour les étudiants de premier cycle dans un laboratoire de recherche et dans une expérience de recherche de premier cycle basée sur des cours.

C. elegans Dissection de gonade et fissure de congélation pour immunofluorescence et coloration DAPI

Ce protocole fournit une approche standardisée pour l’imagerie de la morphologie mitochondriale dans plusieurs tissus de C. elegans au cours du vieillissement.

Imagerie et quantification de la morphologie mitochondriale chez C. elegans au cours du vieillissement

Cette étude examine l’effet de l’âge sur la locomotion chez C. elegans en mesurant le plus grand exposant de Lyapunov (LLE). En vieillissant, C. elegans montre une augmentation et un déclin ultérieur du contrôle moteur. Les résultats montrent un pic de LLE à cinq jours, suivi d’un déclin à mesure que les vers vieillissent.

Dynamique de la locomotion dépendante de l’âge chez Caenorhabditis elegans : une analyse de l’exposant de Lyapunov

Apprenez la synchronisation de C. elegans au stade larvaire L1 pour la biologie du développement. Cette méthode utilise l'hypochlorite alcalin pour isoler les embryons et obtenir une population uniforme.

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