De base Caenorhabditis elegans Méthodes: Synchronisation et d'observation

Dans cette vidéo, nous allons vous montrer comment synchroniser l’élégance C au premier niveau. Il s’agit d’une méthode simple, mais très courante, elle sera donc très utile. Vous êtes encore un débutant.

Si vous êtes un expert en C, vous trouverez peut-être ici quelques conseils pour optimiser ce protocole. La base de la synchronisation des vers repose sur la résistance relative des clen et des embryons à la solution alcaline d’hypochlorite chez le lapin adulte. Que ces vers adultes avec de nombreux embryons à l’intérieur sont incubés avec une solution d’hypochlorite afin qu’ils soient tués et qu’il ne reste que des embryons.

La deuxième partie de la synchronisation est réalisée par le manque de nourriture, de sorte que même si les embryons attrapent à des moments différents, ils ne se développent pas plus loin que L. La première étape pour commencer un protocole de blitzing est d’avoir des vers au stade de la ponte et plusieurs œufs dispersés sur la plaque. Utilisez M neuf pour récupérer les adultes afin de récolter.

De plus, les embryons déjà en tête de la surface de la plaque peuvent être grattés avec un matériau mou tel qu’un morceau de film radiographique pour éliminer les bactéries récupérées avec plusieurs lavages M neuf. Habituellement, un couple suffit. Une fois les vers lavés, il est temps d’ajouter la solution de blanchiment fraîchement préparée selon nos préférences.

Contrôlez le temps d’incubation pendant que vous secouez le tube. Vous pouvez surveiller la génération des adultes au microscope stéréoscopique. Une fois qu’il n’est presque plus conseillé d’arrêter la réaction en ajoutant M neuf jusqu’à ce que le tube soit complètement plein.

Pour terminer le protocole, effectuez au moins trois lavages. Avec M neuf, les œufs sont incubés avec une hésitation continue pendant la nuit dans un tampon M neuf, ce qui permet l’éclosion mais empêche le développement ultérieur des vers. Bien que la synchronisation puisse être effectuée à n’importe quelle température entre 15 et 25 degrés, 15 est recommandé.

Comme le développement est plus lent, comme Nous l’avons mentionné au cours de son développement, elegan passe par quatre stades larvaires avant l’âge adulte, le temps, en fonction de la température à laquelle il est élevé. Alors que le type C elgan tolère des températures de croissance allant de 15 à 25 degrés. Cependant, le taux de croissance est plus élevé.

La température supérieure ici, vous pouvez voir comment, après 24 heures, les stades auxquels se trouvent les vers sont différents. À 15 et 25 degrés après 48 heures à 25 degrés, on observe déjà des embryons. Cependant, il faut attendre plus de 80 heures pour voir des embryons à la surface des plaques.

Avec des vers cultivés à 15 degrés afin d’avoir des résultats optimaux, plusieurs problèmes doivent être pris en considération lors d’une expérience de blitzing. Il est également important de reconnaître les vers qui sont l’étape souhaitée pour l’expérience. Nous allons donc vous montrer comment distinguer les étapes soit par la taille, l’interférence différentielle, la microscopie de contraste ou cette coloration.

Dans ce graphique, vous pouvez apprécier le taux de croissance des vers GaN, en fonction de la température, comme on dit, sont cultivés beaucoup plus rapidement à 25 degrés. Il existe une corrélation entre la taille de l’animal et le développement des éléments marins. Avec le logiciel approprié, les animaux peuvent être mesurés puis classés dans le domaine de développement approprié.

Selon ce graphique, cependant, le site est un marqueur grossier des stades de développement. Une stadification plus convenue peut être obtenue en observant des parties des mers, une anatomie qui peut être utilisée et reconnue soit par interférence différentielle, soit par microscopie de contraste, soit par coloration DPI. Dans notre laboratoire, nous avons utilisé ce protocole pour synchroniser des vers pour différentes expériences comme les micro-œufs en mono coloration, la visualisation in situ et la coloration ascendante.

De plus, ce protocole vous aide également à vous débarrasser de la contamination. Le contraste interférentiel différentiel ou la microscopie nomar est utilisée pour améliorer le contraste. Dans des échantillons transparents non colorés, les animaux sont montés vivants sur une base de 2 %Agros agros peut être préparé au préalable et stocké à quatre degrés si nécessaire.

Il peut être fondu et maintenu à 65 degrés. Une fois que les agros sont fondus, mettez du ruban adhésif sur une diapositive et placez-les des deux côtés d’une troisième diapositive. Prenez délicatement des agros et mettez une goutte sur la diapositive sans ruban adhésif.

Couvrez l’agros avec une autre lame placée transversalement. Une fois que le chemin est solide, séparez les deux diapositives en les faisant glisser soigneusement l’une sur l’autre. Le tampon collera à l’un d’entre eux.

Ajoutez un peu d’Amazon sur le coussin pour garder les vers immobilisés. Choisissez quelques vers sous le microscope de dissection et transférez-les dans la goutte de lele. Éviter d’endommager le chemin.

Prenez une lame de couverture et ajoutez un peu de vernis à ongles sur les bords Placez soigneusement la lamelle sur cette lame pour éviter la formation d’intestins. La préparation peut être observée immédiatement au microscope. L’une des caractéristiques les plus simples de l’anatomie d’Elgan est Alva.

Par exemple, aava avec une forme de trois Noël est caractéristique des quatre étapes L. Des informations détaillées sur l’anatomie du cancer grâce au développement peuvent être obtenues auprès de www.orla.org. La coloration au tapis est une procédure courante pour identifier les cellules individuelles.

La fixation avec le tunnel est une méthode rapide pour fixer les vers. Pour une coloration dappy, ajoutez d’abord une goutte de tampon M nine à la surface d’une lame de microscope. Cueillez quelques vers directement dans la plaque et transférez-les à la goutte de M neuf.

Éliminez l’excès de M neuf soit avec un tuyau, soit avec un tissu mou. Ajoutez un tunnel aux vers. Recommencez.

Une fois que la première goutte est sèche, ajoutez un peu de support de montage avec API et le sursommeil avant de passer la préparation au microscope. Le développement du go peut être facilement observé dans un stent chaud avec api.