Interventions chirurgicales pour un modèle de rat de transplantation hépatique orthotopique partielle avec reconstruction artérielle hépatique

L’objectif général de cette procédure est d’effectuer une transplantation hépatique orthotopique partielle chez le rat en tant que modèle expérimental reproductible pour la recherche sur la transplantation. Pour ce faire, il suffit d’abord d’expliquer le foie du rat donneur. La deuxième étape est la préparation ex vivo du greffon hépatique, y compris une résection hépatique à 50 %.

Ensuite, le foie natif du rat receveur est excisé. La dernière étape est l’implantation de la greffe hépatique partielle chez le rat receveur. En fin de compte, les taux sériques d’alanine et d’aminotransférase sont mesurés pour évaluer les dommages hépatocellulaires au greffon hépatique après la transplantation.

En général, les personnes novices dans cette procédure ont du mal à cause de la complexité qui nécessite des compétences microchirurgicales avancées. Pour commencer cette procédure, placez le rat donneur anesthésié sur un coussin chauffant après avoir confirmé par un pincement des orteils que l’animal est complètement anesthésié, fixez le haut des bras à l’aide du système de rétraction du fixateur magnétique. Rasez la fourrure de toute la région abdominale du rat et stérilisez la peau correspondante avec une solution de povidone iodée.

Ouvrir l’abdomen par une incision médiane avec des extensions bilatérales. Placez une seringue de cinq millilitres sous le dos du rat de manière à ce que la veine caverneuse supra-hépatique soit surélevée ventralement à l’aide d’une pince à moustiques et tirez le processus vers la tête et appliquez les écarteurs sous-costaux pour ouvrir le champ chirurgical. En raison de la nécessité de manipuler fréquemment les écarteurs et la seringue de cinq millilitres pendant la procédure, les champs chirurgicaux ne sont pas utilisés autour de l’incision en travaillant sous un microscope chirurgical à un grossissement de 16 x, disséquez le ligament falciforme et le ligament triangulaire gauche en huit et divisez la veine phrénique gauche, rétractez les lobes médian et latéral gauche vers le haut avec un échange de gaze humide.

À l’aide d’une pince bipolaire, coaguler et diviser les vaisseaux paraœsophagiens entre le lobe latéral gauche et le lobe antérieur coordonnés. Déplacez les intestins à l’extérieur de l’abdomen vers le côté gauche du rat et couvrez-les d’un coton-tige de gaze humide. Écouvillonnez, rétractez le lobe latéral droit vers le haut avec un écouvillon de sang humide.

Isolez la veine caverneuse infra hépatique du tissu rétropéritonéal et ligaturez la veine surrénale droite, qui sera divisée plus tard juste avant le retrait du greffon pour insérer un stent dans le canal biliaire, ligaturez d’abord le canal biliaire au niveau de la ramification de l’artère gastroduodénale. Faites une petite incision dans la paroi antérieure du canal biliaire à proximité du point ligaturé, puis tout en tenant la paroi antérieure de l’incision avec une micro-pince droite dans la main gauche, utilisez une micro-pince incurvée dans la main droite pour insérer un stent dans le canal. Fixez-le avec un fil de soie six zéro.

Gardez l’une des extrémités coupées du fil sur le canal biliaire à une longueur de quatre millimètres afin que le fil puisse être maintenu lors de l’anastomose ultérieure. Libérer la veine porale des veines pori et spléniques en les ligaturant et en les divisant Ligaturer et diviser l’artère gastroduodénale. Isolez ensuite l’artère hépatique commune de la tête pancréatique à sa racine.

Faites pivoter le foie vers la droite avec des cotons-tiges et disséquez le ligament autour de l’arrière du foie et de l’œsophage à la fin des préparations. Pour l’excision du foie. Retirez les écarteurs, la pince à moustiques pour le processus xiphoïde et la seringue de cinq millilitres sous le dos du rat.

Remettez les intestins dans la cavité abdominale. Injectez 500 UI d’héparine natrium dans deux millilitres de solution saline normale par la veine pénienne. Environ trois minutes plus tard, réinitialisez la seringue de cinq millilitres, la pince anti-moustiques et l’écarteur ligaturent l’artère hépatique commune proximale à sa racine.

Gardez l’une des extrémités coupées du fil ligaturée pour l’artère hépatique commune. Bien après le clampage de la veine hépatique infra-hépatique. Près de la veine rénale droite avec une pince à moustiques.

Clamp la veine porte avec une pince à micro-vaisseaux jetables sous le moignon de la veine splénique. Incisez la paroi antérieure de la veine porte et insérez un cathéter de calibre 18 dans la porte porte. La veine perfuse le foie in situ avec 60 millilitres de solution froide d’histidine trytophane, de cétoglutarate.

À une pression hydrostatique de 20 centimètres, l’eau a immédiatement ouvert le diaphragme, la veine caveracique intrathoracique et la paroi antérieure de la veine cavatrice infra-hépatique pour permettre à la solution de perfusion d’être rincée du foie. Clampez la veine hépatique infra caverne avec une pince de micro-vaisseaux juste en dessous du foie. Excise le foie en disséquant la veine caverienne infra-hépatique.

La veine pubale, le diaphragme, les ligaments restants, la veine surrénale droite et l’artère hépatique commune. Placez le foie d’accise dans une solution HTK froide dans une tasse métallique montée dans une boîte en plastique remplie de glace pilée org. Les procédures de greffe hépatique sont effectuées dans la cupule métallique remplie de solution HTK glacée pour la fixation d’un brassard à la pince de veine porte, le tronc veineux porte avec une pince DeBakey bulldog et placez la pince en position de pont sur la cupule.

Passez la veine porale à travers le brassard et clampez à nouveau la veine al avec l’extension du ballonnet à la position 12 heures, détournez la paroi de la veine pale sur le brassard pour positionner le moignon de la veine splénique à l’extérieur du brassard à la position sept heures et fixez la veine porte avec un fil de soie six zéro pour insérer un stent dans l’artère hépatique. Fixez le foie en serrant les deux bords du diaphragme à l’aide d’une pince et tirez l’artère hépatique commune vers le droit en tenant le fil ligaturé avec la pince bouledogue DeBakey avec des micro-ciseaux droits. Faites une petite incision dans la paroi antérieure de l’artère hépatique commune avec la main gauche.

Tenez la paroi antérieure de l’incision à l’aide d’une micro-pince droite et de la main droite, insérez un stent dans l’artère hépatique commune. À l’aide d’une micro-pince incurvée, fixez le stent avec un fil de soie six zéros et maintenez l’une des extrémités coupées du fil à une longueur de quatre millimètres. Rincer le foie à travers le cathéter artériel avec cinq millilitres de solution HTK froide pour la résection hépatique à 50 %.

Clampez d’abord le lobe de coordination postérieur à l’aide d’une pince anti-moustiques pour le fixer en place. Puis ligate. Son pédicule avec un fil de soie quatre zéro et réséque le lobe.

Le lobe antérieur du corate est enlevé de la même manière. Ensuite, faites pivoter la boîte en plastique de 90 degrés. Serrez le bord droit du diaphragme et la partie gauche du lobe médian.

Faites une petite incision sur le bord supérieur du bord des parties bilatérales du lobe médial, puis retirez la partie gauche après la ligature. Après la ligature du pédicule avec un fil de soie à quatre zéros, retirez le lobe latéral gauche, cautérisez soigneusement la surface du foie réséquée avec une pince bipolaire. La masse hépatique est maintenant réduite d’environ 50 % pour la plastie de la veine cave supra-hépatique.

Tout d’abord, fixez la position du foie en serrant les deux bords du diaphragme à l’aide d’une pince anti-moustiques. Ensuite, coupez la paroi antérieure de la veine cave supra-hépatique en retirant le diaphragme correspondant. Fixez 2 7 0 sutures en polypropylène de l’extérieur à l’intérieur des deux coins comme sutures de maintien pour l’anastomose ultérieure.

Après cela, coupez la paroi postérieure de la veine cave supra-hépatique. Conservez le greffon hépatique à quatre degrés Celsius dans une solution HTK dans un bain d’eau froide. Préparez le receveur à la chirurgie de la même manière que pour l’opération du donneur et ouvrez l’abdomen par une incision médiane.

Placez un coton-tige humide sur le côté droit du duodénum et de l’intestin entier. Pour obtenir un champ chirurgical autour de la grotte bena infra hépatique. Placez les lobes latéraux et médians gauches dans la cavité sous-phrène gauche et rétractez le lobe latéral droit vers le haut avec un écouvillon humide.

Isolez la veine caverneuse infra-hépatique du légat de tissu rétropéritonéal et divisez la veine surrénale droite avec la gaze humide et les cotons-tiges. Faites pivoter le foie vers la gauche et disséquez le ligament à l’arrière du foie. Transect du canal biliaire juste en dessous de la branche à partir du lobe du chordé.

Gardez l’une des extrémités coupées du fil ligaturée pour le canal biliaire de quatre millimètres de long ligaturée et divisez l’artère gastroduodénale et l’artère hépatique propre à une distance de trois millimètres de la ramification de l’artère hépatique commune pour former une structure large de l’artère à l’extrémité de l’artère hépatique commune clamp la veine infra hépatique caver avec une pince de micro vaisseaux métalliques juste au-dessus du rein droit veine et la veine porte au niveau de sa bifurcation dans le hile hépatique à l’aide d’une pince anti-moustiques, clamp la veine cave supra-hépatique avec le diaphragme à l’aide d’une pince vasculaire périphérique et fixer la pince dans un morceau d’argile à base d’huile. Réduire l’anesthésie avec du fluor à 0,4 pour cent en volume. Exciser le foie natif du receveur en disséquant la veine cave sup-hépatique à la frontière entre la veine cave supra-hépatique et le foie.

La veine porte juste au-dessus de la mâchoire de la pince anti-moustiques et la veine cave infra-hépatique légèrement en dessous du point médian entre le foie et la veine rénale droite. Placez le greffon hépatique par voie topique. La reconstruction du récipient est la partie la plus difficile et la plus importante de cette procédure.

Il doit être fait très soigneusement mais rapidement pour l’anastomose de la veine cave supra hépatique par suture continue. Placez la suture de maintien sur la veine cave supra-hépatique receveuse de l’intérieur vers l’extérieur en utilisant les sept polypropylène zéro attachés dans le coin droit du greffon, puis en faisant un nœud de la même manière. Placez la deuxième suture de maintien dans le coin gauche.

Ce sera le point de départ d’une suture de course. Pour élargir l’anastomose, saisissez et maintenez les sutures à l’aide de pinces bouledogue DeBakey aux deux coins avec une traction douce supérieure latéralement. Ensuite, percez la suture dans le coin gauche à travers la paroi du côté greffé de l’extérieur vers l’intérieur, près du nœud à l’extérieur et suturez la rangée postérieure de la veine satique caver Intraluminal avec sept à huit points de suture dans le coin droit.

Faites les premiers points avec soin afin que les lumières intérieures se fassent face dans le coin droit. Percez le polypropylène sept zéros à travers le récipient du côté greffé vers l’extérieur. Suturez la rangée antérieure de l’extérieur de droite à gauche avec environ 10 points de suture.

Rincer l’intérieur avec une solution de sonnerie lactée. Pour éliminer les bulles d’air, faites le dernier point près de la suture de séjour puis attachez-les ensemble pour la reconstruction de la veine porte, clampez la veine porte à l’aide d’une pince à micro vaisseaux et fixez la pince moustique dans l’argile. Ensuite, insérez la paroi antérieure de la veine porte juste en dessous de la mâchoire de la pince à moustiques.

Lavez l’intérieur de la veine porte du receveur et le brassard avec une solution de sonnerie lactée. Insérez le brassard dans la veine porte et fixez-le avec un fil de soie circonférentiel six zéro. Enfin, reperfuser le foie.

Retirez la seringue de cinq millilitres à l’arrière du rat et augmentez la concentration de fluor à 0,8 pour cent en volume pour la reconstruction de l’hépatique par une technique de stent. Tout d’abord, tenez le fil de l’artère hépatique appropriée à l’aide d’une pince anti-moustiques et fixez-le dans l’argile. Clampez ensuite l’artère hépatique commune receveuse.

Faites une petite incision dans la bifurcation de la structure en Y à l’extrémité de l’artère hépatique commune pour faire une ouverture en forme d’entonnoir. Tenez le stent placé dans l’artère hépatique commune du greffon à l’aide d’une micro pince incurvée. Faites glisser le stent dans l’artère hépatique commune receveuse et fixez-le avec une attache à six fils de soie zéro, une extrémité de ce fil et le fil de quatre millimètres sur l’artère hépatique commune greffée ensemble afin que les deux artères hépatiques communes se rapprochent l’une de l’autre avec une tension réduite du site anastomotique.

Après cela, relâchez l’ampli de pince pour l’anastomose de la veine hépatique infra par une suture continue anastos de la même manière que pour la veine caverienne hépatique supra, mais utilisez plus de points de suture avec des morsures plus fines. Après le clampage, augmentez la concentration de l’anesthésie à 1,0 % en volume pour la reconstruction du canal biliaire. Tenez le fil du canal biliaire récepteur à l’aide d’une pince anti-moustiques et fixez-le dans l’argile.

Faites une petite incision dans le canal biliaire au niveau approprié afin que le canal biliaire reconstruit ne soit pas trop long. Insérez le stent et fixez-le avec un fil de soie six zéro. Attachez ce fil et le fil sur le canal de greffe.

Ensemble, toutes les procédures de reconstruction sont maintenant terminées. Fermez l’incision abdominale par quatre sutures continues de Vicryl en couches. Immédiatement après l’opération, traitez le rat receveur avec une injection sous-cutanée de sphero sodique et de buprénorphine dans un total de 1,5 millilitres de solution saline normale.

Laissez le rat se rétablir pendant 60 minutes dans une cage spéciale d’unité de soins intensifs avec de l’air chaud et une alimentation en oxygène avant de le remettre dans une cage normale. Tous les rats receveurs ont survécu jusqu’à l’euthanasie prévue pour prélèvement sanguin à 1, 3, 24 et 168 heures après la reperfusion portale. Des échantillons de sérum ont été analysés pour déterminer les taux d’alanine aminotransférase, qui reflètent le degré de dommages hépatocellulaires aux greffes de foie après la transplantation.

Comme le montre cette greffe, les taux de LT ont atteint un pic à 24 heures, puis ont diminué jusqu’à l’intérieur des limites normales de 168 heures. Après cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer une transplantation hépatique à sujet partiel chez le rat en tant que modèle expérimental reproductible pour la recherche sur la transplantation.