Collecte de salive et de mesure du cortisol salivaire et l'alpha-amylase dans Frail communautaires résidant personnes âgées par les aidants familiaux

L’objectif général de cette procédure est de démontrer la collecte et l’analyse des biomesures salivaires dans une population résidente de la communauté et médicalement fragile. Pour ce faire, il faut d’abord assembler les fournitures nécessaires à la collecte de salive. La deuxième étape consiste à organiser la visite à domicile, à fournir les fournitures et à montrer les procédures de collecte de salive à l’aidant.

Ensuite, fournissez des instructions écrites et répondez à toutes les questions. La dernière étape consiste à retourner les échantillons de salive au laboratoire et à effectuer les procédures de dosage. En fin de compte, le protocole est conçu pour mesurer le profil diurne des concentrations d’alpha-amylase salivaire et de cortisol salivaire chez les patients médicalement fragiles résidant dans la communauté.

Cette méthode répondra à des questions clés dans les domaines de la recherche biocomportementale afin d’améliorer notre compréhension de la sensibilité et de la susceptibilité biologiques autour des processus liés au stress. Avant de planifier une visite à domicile pour consentir, les participants rassemblent et assemblent les fournitures nécessaires, qui comprennent quatre écouvillons psychométriques pour enfants, quatre tubes de stockage d’écouvillons, quatre bouchons de tube à code couleur, cinq étiquettes blanches, un sac Ziploc en plastique, une feuille d’instructions de collecte de salive, cinq gants nitro et une boîte de rangement. À l’aide d’une main gantée de nitro, placez quatre écouvillons pour enfants Salomé dans les quatre tubes de stockage d’écouvillons et couvrez-les respectivement avec des capuchons de couleur jaune, orange, bleu et violet.

Ensuite, placez une étiquette sur chaque tube de stockage pour indiquer l’heure de collecte. Placez les quatre tubes de stockage bouchés, la feuille d’instructions de prélèvement de salive et les quatre gants nitro dans le sac Ziploc et étiquetez-le avec l’identifiant du sujet et la date de prélèvement. En suivant ce programme, une courte visite à domicile chez les sujets préalablement consentis et la veille du prélèvement salivaire.

Une fois arrivé au domicile du sujet, fournissez le sac en plastique contenant les fournitures et la feuille d’instructions au collecteur de salive. Passez en revue la feuille d’instructions et insistez sur la nécessité d’enregistrer les heures de début et de fin du prélèvement de salive en mettant en évidence les instructions écrites. Consigner le nom, la posologie et l’horaire de tous les médicaments d’ordonnance et en vente libre pris par le participant au cours des 48 dernières heures.

Demandez au collecteur de salive ou SC d’appliquer un gant nitro sur la main dominante. Dites au participant d’incliner la tête vers l’avant pour permettre à la salive de s’accumuler sur le sol de sa bouche. Ensuite, demandez au SC de déboucher le tube de stockage de l’écouvillon et de récupérer l’écouvillon buccal.

Demandez au SC de placer l’écouvillon buccal sous l’avant de la langue de la personne âgée pour absorber environ trois gouttes de la salive accumulée et de maintenir l’écouvillon buccal en place pendant deux minutes pour s’assurer qu’il est saturé, demandez au SC de remettre l’écouvillon buccal saturé dans le panier du tube de stockage de l’écouvillon, et remettez le bouchon. Ensuite, demandez au SC de placer immédiatement le tube dans la boîte de rangement et de le placer dans un congélateur. Après avoir jeté le gant dans la corbeille, conseillez au SC d’enregistrer les heures de début et de fin sur la feuille d’instructions de salive.

Ensuite, informez le SC qu’il prélevera des échantillons de salive à quatre reprises le lendemain, plus précisément au réveil 30 minutes après le réveil en milieu de matinée et en soirée, demandez au SC de dire au patient de se rincer la bouche avec de l’eau 10 minutes avant le prélèvement de salive. Après le prélèvement de salive, jetez les échantillons visiblement contaminés par du sang. Dites au SC que les échantillons de salive doivent rester dans le congélateur jusqu’à ce que l’équipe de l’étude les récupère.

Appelez l’équipe de l’étude pour confirmer qu’elle fixera une heure et un jour pour récupérer les échantillons congelés et apportera de nouvelles fournitures de collecte de salive pour toute date de collecte future. Une fois que les échantillons ont été retirés du congélateur du sujet, conservez-les congelés pendant le transport vers le laboratoire en les plaçant dans un sac de congélation isotherme. À votre arrivée au laboratoire, remplacez l’étiquette blanche sur chaque tube par un code-barres séquentiel.

Vérifiez que le code-barres séquentiel correspond à l’ID du sujet, à la date de collecte et à l’heure de la collecte. Remettez ensuite les échantillons de salive dans un congélateur à moins 20 degrés Celsius pour précipiter la mucine. Après avoir décongelé les échantillons de salive, centrifugez les échantillons à 1500 fois la gravité pendant 15 minutes.

Une fois que les réactifs du kit de dosage salivaire sont à température ambiante pendant environ 90 minutes, préparez le tampon de lavage en suivant les instructions du kit en pipetant 25 microlitres des étalons, des témoins et des échantillons dans les puits appropriés d’une plaque à 96 puits. Après cette pipette, 200 microlitres d’une solution conjuguée enzymatique préalablement préparée dans les puits. Mélangez les échantillons en plaçant la plaque sur un rotateur pendant cinq minutes à 500 tr/min.

Après avoir incubé les échantillons à température ambiante pendant 55 minutes, lavez et épongez la plaque avec un tampon de lavage quatre fois. Ajoutez ensuite 200 microlitres de solution de tétraéthyle benzine ou de TMB. Une fois que les échantillons ont été mélangés pendant cinq minutes.

À 500 tr/min, couvrez la plaque de papier d’aluminium et incubez-les dans l’obscurité pendant 25 minutes supplémentaires. Lorsque vous avez terminé, ajoutez 50 microlitres de solution d’arrêt et mélangez les échantillons pendant trois minutes à 500 tr/min. Dans les 10 minutes suivant l’ajout de la solution d’arrêt, essuyez le fond de la plaque et lisez la plaque avec un lecteur de plaque à 450 nanomètres.

Ensuite, calculez la concentration de cortisol à l’aide de la densité optique moyenne. Soustrayez la densité optique moyenne dans les puits de liaison non spécifiques de la densité optique moyenne dans les puits de contrôle et d’échantillonnage standard zéro. Enfin, estimez les concentrations des contrôles et des inconnues à l’aide d’un logiciel capable de logistique.

Les procédures décrites sont conçues pour mesurer le profil diurne des concentrations de cortisol salivaire, alpha-amylase et salivaire. Étant donné que les résultats du cortisol se sont révélés être positivement asymétriques, il est suggéré d’utiliser la transformation logarithmique des données pour obtenir une distribution normale. Plusieurs stratégies sont disponibles pour modéliser les différences dans les rythmes diurnes du cortisol et de l’alpha-amylase.

La première stratégie consiste à tracer le changement diurne de l’alpha-amylase ou du cortisol entre le réveil et 30 minutes après le réveil. La deuxième stratégie consiste à tracer la concentration totale de cortisol ou d’alpha-amylase sur une journée. Les paramètres sommaires qui en résultent peuvent être regroupés en deux grandes catégories : la mesure de l’ampleur de la réponse ou les mesures du modèle de réponse au fil du temps.

La modélisation de la courbe de croissance peut être utile pour les études dans lesquelles plusieurs échantillons sont prélevés chez des individus tout au long de la journée. Une courbe de croissance peut être ajustée pour tenir compte des différences individuelles dans le cycle diurne en ajoutant des prédicteurs au niveau individuel ou de mesure. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de recueillir de la salive et comment enseigner aux soignants comment recueillir de la salive à des fins médicales pour nos personnes âgées à domicile, et vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer des analyses de laboratoire d’analytes salivaires qui sont réalisables, ont une conformité élevée et produisent des échantillons de qualité.