Détection de l'épissage alternatif durant la transition épithéliale-mésenchymateuse

L’objectif général de l’expérience suivante est de détecter les changements dans l’épissage alternatif pendant l’EMT. Ceci est réalisé en utilisant un modèle EMT inductible dans lequel l’expression de la protéine de fusion twister er. Dans les cellules épithéliales mammaires humaines, les cellules subissent une TEM lors d’un traitement au tamoxifène dans un deuxième temps.

L’expression des isoformes d’épissage est analysée par R-T-P-C-R quantitative à l’aide d’ensembles d’amorces spécifiques aux isoformes, ce qui révèle des changements d’épissage alternatifs au niveau de l’ARN. Ensuite, l’abondance de protéines correspondant à chaque isoforme est déterminée par immuno-blot afin de confirmer l’expression des isoformes d’épissage au niveau de la protéine, des résultats sont obtenus qui montrent des changements dans l’épissage alternatif dans les gènes d’intérêt pendant l’EMT, sur la base d’analyses quantitatives R-T-P-C-R et d’immuno-blotting, Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’épissage alternatif RN et de l’EMT, comme la façon dont l’épissage alternatif est régulé pendant l’EMT et comment cette régulation affecte l’EMT et les processus pathologiques liés à l’EMT. Les implications de cette technique sont pour le traitement du cancer, car l’EMT joue un rôle important dans la promotion de l’invasion tumorale et des métastases.