Examen de Rapid Dopamine Dynamics avec Numérisation rapide voltampérométrie cyclique cours intra-orale administration exhausteur de goût chez les rats Awake

L’objectif global de cette procédure est de mesurer les réponses dopaminergiques inférieures à la seconde du goût buccal dense. Pour ce faire, il crée d’abord des cathéters oraux, des électrodes de référence et des électrodes en fibre de carbone nécessaires aux procédures chirurgicales, puis les enregistre par télémétrie cyclique en V à balayage rapide. La deuxième étape consiste à implanter chirurgicalement les cathéters buccaux, l’électrode intracrânienne et la canule de guidage de l’électrode en fibre de carbone.

Une semaine plus tard, la micro-électrode en fibre de carbone peut être abaissée dans le noyau accumbens pour enregistrer les changements de libération de dopamine extracellulaire en réponse à l’administration intraorale de goûts. La dernière étape après l’enregistrement consiste à calibrer l’électrode et à utiliser l’analyse des composantes principales pour isoler les données contenant des informations sur la dopamine. En fin de compte, l’utilisation combinée du goût et de l’administration intra-oraux et de la télémétrie volique cyclique à balayage rapide est utilisée pour montrer des changements dans les réponses dopaminergiques inférieures à la seconde à taten.

Cette technique combinée présente deux avantages principaux par rapport aux méthodes existantes. Premièrement, la photométrie IC rapide a une résolution temporelle élevée et deuxièmement, l’administration intraorale de taten minimise le mouvement que le rat doit faire pour obtenir la tatine et nous permet de mieux isoler les réponses de la dopamine à la tatine. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal à fabriquer le cathéter buccal.

Cependant, la construction d’un cathéter buccal de qualité et rémunéré garantira un ajustement parfait du cathéter entre la joue et les molaires supérieures, et augmentera les chances de réussite de l’expérience. Pour préparer l’électrode d’enregistrement, aspirez d’abord une fibre de carbone T six 50 de sept microns de diamètre dans un capillaire en verre de silicate bora d’un diamètre intérieur de 0,4 millimètre. Ensuite, positionnez le capillaire dans une électrode verticale, tirez d’abord avec un chauffage réglé sur 55,0 et l’aimant éteint, puis ajustez si nécessaire.

Après avoir passé la pipette sous un microscope, coupez la fibre de carbone exposée de manière à ce qu’elle s’étende de 75 à 100 microns au-delà du verre. La fibre du verre doit être hermétiquement scellée, sinon jetez la préparation. Ensuite, dénudez l’isolant de la moitié d’un fil de 30 pouces de 30 pouces, appliquez un thermorétractable pour fixer l’électrode au micromanipulateur.

Appliquez ensuite une fine couche de peinture argentée sur le fil pendant que la peinture est encore humide. Insérez le fil dans l’extrémité ouverte de l’électrode et fixez-le à la fibre de carbone qu’elle contient. Vérifiez ce contact au microscope.

Prenez l’électrode dans le micromanipulateur et fixez-la avec un thermorétractable. Placez l’électrode en fibre de carbone préparée dans de l’IPA pendant au moins 10 minutes pour nettoyer la surface de l’électrode et augmenter la sensibilité ultérieure à la dopamine. Après avoir retiré l’électrode de l’IPA, rincez la fibre de carbone à l’eau du robinet pour éliminer l’IPA.

Ensuite, préparez l’électrode de référence à partir d’un fil d’argent de 13 millimètres avec un treillis de chlorure d’argent de six millimètres d’un diamètre de 0,4 millimètre, coupez la partie non maillée du fil et soudez-la à une broche en or. Appliquez ensuite de l’époxy sur la soudure. Trempez ensuite la partie du maillage dans un acide copolymère cinq fois.

Laissez sécher 30 minutes à l’air libre entre les trempettes après le dernier trempage. Laissez sécher à l’air libre pendant la nuit. Le lendemain.

Faites cuire la partie grillagée du fil à 120 degrés Celsius pendant une heure. Pour faire le cathéter buccal, coupez d’abord. Tube en polyéthylène 100 en segments de six centimètres.

Ensuite, faites un petit disque plat sur l’un des segments du tube en faisant fondre l’extrémité et en la pressant sur une surface plane et froide au centre du disque. Utilisez une aiguille de calibre 18 pour créer un trou. Fixez l’autre extrémité du segment de tube à l’extrémité émoussée d’une aiguille de calibre 18.

Ensuite, à l’aide d’une perforatrice, on obtient plusieurs morceaux de polytétrafluoroéthylène de six millimètres de diamètre et de 3,18 millimètres d’épaisseur. Ensuite, au centre de ces disques, créez un trou, transformant ainsi les disques en rondelles. Coupez la rondelle en forme de trapèze pour aider à les loger lors de l’implantation des molaires.

Pour terminer le cathéter, enfoncez complètement une aiguille fixée au tube en PE à travers la rondelle et faites glisser la rondelle au ras de la tubulure. Le protocole suivant prend environ 75 minutes. Commencez par un rat préparé pour la chirurgie et ouvrez sa bouche à l’aide d’un coton-tige.

Ensuite, enfoncez l’aiguille sur une canule dans le tissu entre la joue et la première molaire supérieure de sorte que l’aiguille sorte juste derrière et médialement vers les oreilles. Ensuite, remontez la canule et fixez la rondelle aux molaires pour stabiliser le cathéter sur l’aiguille exposée. Faites glisser une rondelle et serrez-la jusqu’à l’incision.

Fixez cette rondelle en position. Coupez le tube de manière à ce que deux à quatre centimètres restent exposés au-dessus de la tête du rat. Ensuite, en utilisant la même technique, insérez un cathéter de l’autre côté de la bouche.

Ensuite, placez le rat dans un cadre stéréotaxique et percez trois trous pour que les canules et les électrodes puissent effectuer des enregistrements dans la position centrale du noyau accumbens. La canule de guidage 1,2 millimètres en avant et 1,4 millimètres. Torème latéral.

Abaissez l’appareil de la canule jusqu’à ce que la base en plastique affleure le crâne. Placez l’électrode de référence dans l’hémisphère controlatéral à la canule de guidage. Abaissez la référence d’environ deux millimètres en dessous de la dure-mère.

Positionnez ensuite l’électrode de stimulation, 5,2 millimètres en arrière et 1,0 millimètres en torema latéral. Pour cibler la zone tegmentale ventrale. Abaissez l’électrode de stimulation à 8,0 millimètres en dessous de la dure-mère.

Fixez ensuite les composants avec des vis et du ciment et fournissez des soins postopératoires. Avant de mener une expérience, vérifiez toujours la perméabilité de la canule buccale en injectant 200 microlitres d’eau et observez si le rat goûte l’eau nettoyez le site d’enregistrement en retirant la canule factice, en y ajoutant deux gouttes d’héparine à 50 %, puis en la repositionnant doucement. Le mannequin ne doit pas se trouver à moins de deux millimètres du lieu d’enregistrement.

Fixez et stabilisez maintenant l’étage de tête au stimulateur implanté dans le VTA, puis abaissez l’électrode d’enregistrement dans le noyau du noyau accumbens. Maintenant, en suivant le protocole texte, produisez un jeu de données d’entraînement. Attendez toujours au moins deux minutes, mais jusqu’à quatre à cinq minutes entre les stimulations pour permettre la recharge vésiculaire et le moût.

L’étape la plus critique de l’expérience est l’obtention d’une électrode de haute qualité. Si le fond est une forme arrondie caractéristique, la phase montante est une bonne électrode. Si la forme arrondie est petite ou correspond étroitement à la forme d’onde appliquée, essayez une autre électrode.

Si l’arrière-plan est à l’endroit où il est décalé, appliquez un décalage de décalage à la forme d’onde appliquée dans une direction positive par incréments de 0,1 volt. Une fois qu’un ensemble d’entraînement est généré sur le site d’enregistrement, collectez des données tout en infusant 200 bolus de microlitres de taten toutes les une à trois minutes pendant 25 infusions. Attendez ensuite au moins 30 minutes et infusez le goût suivant de la même manière.

Le FSCV combiné à l’implantation d’un cathéter intra-oral a été utilisé pour examiner comment le saccharose, un AIT up de taten module la libération de dopamine phasique dans le noyau du noyau accumbens avant la perfusion de taten, la stimulation électrique indiquée par la barre rouge du VTA a produit des augmentations robustes de la libération de dopamine phasique dans le noyau accumbens après l’acquisition de l’ensemble d’entraînement. Courant indiqué par la flèche blanche. Cela s’est produit au niveau du potentiel d’oxydation de la dopamine, qui est indiqué par la ligne pointillée blanche, transformant les données en un graphique de concentration en fonction du temps. Après que l’ACP ait vérifié que l’augmentation du courant en réponse au goût est le résultat d’une augmentation de la concentration de dopamine.

Une autre tatin de menthol a été perfusée lors des enregistrements FSCV dans le noyau du noyau accumbens, une augmentation de la concentration de dopamine a également été observée après la perfusion de menthol. Une fois maîtrisée, la chirurgie intra-orale et la canulation combinées peuvent être réalisées en 75 minutes. Cette technique peut être combinée avec d’autres formes de comportement telles qu’un conditionnement pavlovien et opéra compétitif et aversif afin de répondre à des questions sur la signalisation de la dopamine en dessous de la seconde au cours de ces processus.