Une méthode simple et peu coûteuse pour déterminer Sensibilité au froid et adaptation chez la souris

L’objectif global de cette procédure est de mesurer la réactivité au froid des souris. Pour ce faire, il suffit d’abord de refroidir ou de chauffer le verre à la température souhaitée. La deuxième étape consiste à acclimater les souris jusqu’à ce qu’elles soient au repos.

La troisième étape consiste à compresser la poudre de glace carbonique en une pastille dans une seringue. La dernière étape consiste à tester les souris à l’aide de granules de glace carbonique et d’un chronomètre pour mesurer la latence de retrait. En fin de compte, le test du planteur froid est utilisé pour mesurer la réactivité au froid et l’adaptation chez les souris au comportement libre.

Le principal avantage de notre test par rapport aux tests existants tels que le test à l’acétone et le test sur plaque froide, est que nous pouvons tester à la fois l’hypersensibilité et l’analgésie au départ dans diverses circonstances environnementales. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu de la réactivité au froid des souris. Il peut également être utilisé dans d’autres systèmes tels que le singe et le rat et les humains. Daniel Brenner, un étudiant diplômé de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure.

Après avoir nettoyé la surface en verre, fixez la sonde thermocouple à filament de type T à la surface au milieu de la plaque de verre avec du ruban adhésif de laboratoire. Placez les enclos des animaux sur la plaque de verre en une seule ligne au milieu. Ensuite, faites passer la sonde thermocouple dans l’enclos central des animaux et branchez-la sur l’enregistreur de données.

Allumez l’enregistreur de données et désactivez la fonction d’arrêt automatique. Fixez l’enregistreur de données à l’ordinateur à l’aide du câble fourni. Séparez les enclos des animaux avec des inserts noirs pour éviter les interactions visuelles entre les souris et placez des miroirs sous le verre pour permettre de voir le dessous des enclos.

Pour commencer les tests, placez des boîtes en aluminium sur la plaque de verre de chaque côté de l’animal, les enclos à une distance fixe. Si le test est à 30 degrés Celsius, branchez les circulateurs d’eau chauffée aux boîtes en aluminium placées à 0,25 pouce de l’enclos des animaux. Remplissez les boîtes d’eau à moitié pleines pendant que les trous de drainage sont bouchés.

Positionnez les circulateurs de manière à ce que l’eau chaude des boîtes en aluminium s’écoule directement dans le réservoir du circulateur de chaque côté. Vous devrez ajouter de l’eau à chaque circulateur. Une fois les boîtes métalliques remplies, réglez les circulateurs à 45 à 60 degrés Celsius et remplissez les boîtes en aluminium avec un jet constant d’eau chaude.

Lorsque les verres atteignent la plage de température souhaitée, placez les souris dans les enclos sur la plaque. Laissez les souris s’acclimater à l’appareil et à la température. Ces souris s’acclimateront pendant 2,5 heures.

À l’approche de la fin de la période d’acclimatation, remplissez un seau à glace à moitié de glace sèche et utilisez un marteau ou un maillet pour écraser la glace sèche en poudre. Faites-le à l’extérieur de la salle comportementale pour éviter de déranger les souris. Ensuite, utilisez une lame de rasoir ou des ciseaux pour couper le haut d’une seringue de trois millilitres.

Ensuite, utilisez une aiguille de calibre 21 pour percer deux séries de trois trous sur les côtés opposés de la seringue afin de diminuer la pression générée par la sublimation tout en comprimant la glace sèche dans la salle comportementale, remplissez la chambre de la seringue à moitié de poudre de glace sèche. Tenez l’extrémité coupée de la seringue contre un objet plat et comprimez fermement la poudre à l’aide du piston. Étendez l’extrémité de la palette de glace carbonique compressée au-delà du bord de la seringue.

Maintenant, testez les souris qui ont les quatre pattes dans le verre et qui ne bougent pas, mais qui ne dorment pas complètement. À l’aide des miroirs pour cibler doucement mais fermement, appuyez la pastille plate contre la surface en verre sous la patte arrière de la souris. Simultanément, appuyez sur start sur une minuterie.

Lorsque la souris s’éloigne du verre refroidi, verticalement ou horizontalement, arrêtez la minuterie et retirez la pastille de glace carbonique. Cependant, si la souris bouge très brièvement la patte puis la ramène sur la surface de refroidissement, continuez à chronométrer et à stimuler jusqu’à ce que la souris s’éloigne définitivement. Si la souris ne s’éloigne pas du verre refroidi, arrêtez le stimulus après 20 secondes.

Répétez cette procédure de test jusqu’à ce qu’au moins trois valeurs sur chaque patte de l’animal soient recueillies pour tester les souris à 17 degrés Celsius. Répétez l’expérience comme nous venons de le voir, mais au lieu de remplir les boîtes en aluminium avec de l’eau chauffée, utilisez de la glace humide et placez les boîtes à environ 0,25 pouce des enclos pour tester les souris. À 12 degrés Celsius, de la glace sèche est utilisée, mais les boîtes sont placées à 1,25 pouce des enceintes.

Ce protocole alternatif teste les souris lorsque la température de la plaque diminue plutôt qu’après qu’elle soit stabilisée. Cela nous permet de tester l’adaptation des souris au fur et à mesure qu’elle se produit après la mise en place de l’appareil. Comme précédemment, effectuez l’expérience comme indiqué précédemment pour prendre des mesures à température ambiante.

Une fois que les latences de base ont été mesurées à température ambiante. En suivant la procédure décrite précédemment, remplissez les boîtes en aluminium vides de glace sèche et placez-les à 1,25 pouce des boîtiers de chaque côté. Enfin, répétez l’expérience pour prendre des mesures de latence pendant que la plaque de verre refroidit.

Prendre des mesures aussi souvent que possible. Ce graphique montre la latence de retrait moyenne pour les souris à partir de 12 degrés Celsius, 17 degrés Celsius, 23 degrés Celsius ou 30 degrés Celsius. Les latences de retrait sont constantes à toutes les températures.

Les effets analgésiques peuvent être mesurés à l’aide du test du planteur à froid, comme illustré ici. L’injection sous-cutanée de 1,5 milligramme par kilogramme de morphine augmente la latence de sevrage des souris 30 minutes après l’injection, mesurée par un test post-hoc innova bidirectionnel avec Bonferroni 60 minutes après l’injection. Il n’y a pas de différence significative entre la morphine injectée et l’injection de solution saline.

L’hypersensibilité des souris peut également être mesurée ici. L’injection intra-planteur de 10 microlitres d’adjuvant complet de fros diminue considérablement la latence de retrait des souris deux et trois heures après l’injection, telle que mesurée par un test innova bidirectionnel avec bonferroni post-hoc. Les mêmes souris ont reçu des injections sous-cutanées de morphine à quatre heures et toutes les latences de sevrage à 4,5 heures étaient significativement plus élevées par rapport à trois heures, telles que mesurées par un innova à sens unique avec un test post hoc terminé.

Une fois que la morphine a été métabolisée 5,5 heures après l’injection, les souris à qui l’on a injecté du CFA avaient encore des latences de sevrage plus faibles que les souris injectées de solution saline, comme mesuré par un test bi-facteur inova avec test post-hoc de Bonferroni. L’adaptation aux changements environnementaux de refroidissement peut être mesurée en temps réel avec ce test. Les souris de type sauvage ont la même latence de retrait que la plaque de verre refroidit, ce qui suggère qu’elles s’adaptent aux températures de refroidissement plus rapidement que ce qui peut être mesuré avec le CPA, qui n’avait pas de différences significatives entre les groupes.

Cependant, lorsque les souris ont été injectées avec U 7 3 1 2 2 pour bloquer l’hydrolyse de PIP deux, leur latence diminue à mesure que la plaque de la température diminue suggérant une adaptation altérée Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en cinq heures incluant le temps d’acclimatation. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de mesurer la sensation de froid et l’adaptation chez les souris éveillées et libres. N’oubliez pas que travailler avec de la glace carbonique peut être exceptionnellement dangereux et que vous devez assurer une ventilation adéquate et une bonne évacuation de l’air pendant cette méthode.