Un système de notation rapide phénotypique pour l'évaluation neurologique de progression de la maladie dans la SOD1 G93A modèle de souris de la SLA

Ce protocole vidéo décrit une méthode sensible, fiable et rapide d’évaluation des déficits neuromusculaires dans un modèle murin transgénique de sclérose latérale amyotrophique.

L’objectif global de cette procédure est d’évaluer rapidement et de manière fiable la fonction neuromusculaire des souris SOD 1 G 93 a en évaluant quotidiennement la fonction de leurs membres postérieurs à l’aide d’un système de notation neurologique phénotypique simple. Ceci est accompli en observant d’abord les membres postérieurs des souris tout en les suspendant par la queue. La deuxième étape consiste à permettre aux souris de marcher tout en observant leur démarche.

Ensuite, les souris sont placées sur le côté pour tester la présence ou l’absence du réflexe d’écriture. La dernière étape consiste à effectuer l’analyse des données en ajustant les données de score neurologique des cohortes de souris dans un modèle de régression logistique ordinale. En fin de compte, notre système de notation neurologique phénotypique est utilisé pour évaluer la progression de la maladie dans le SOD one G 93, un modèle murin d’un LS dans le but de discerner l’efficacité des interventions thérapeutiques.

Le principal avantage de cette méthode par rapport à toutes les autres techniques existantes est qu’elle est rapide, simple, fiable et peu stressante pour les souris. Les implications de cette méthode s’étendent à une thérapie de la sclérose latérale néotropique ou une LS car elle permet d’évaluer rapidement les interventions thérapeutiques dans le modèle murin le plus courant de la maladie. La démonstration visuelle est essentielle car la méthode de notation neurologique est difficile à apprendre car les différences neurologiques peuvent être subtiles.

Commencez par loger des souris SOD mâles une souris G 93 A de sorte qu’il y ait une souris par cage, une souris SOD femelle G 93 A jusqu’à deux par cage. Fournir un enrichissement environnemental aux souris sous la forme de huttes en plastique. Fournissez aux souris de la nourriture et de l’eau au Lido record.

Poids corporel pour toutes les souris et les études en même temps. Le poids corporel quotidien est un indicateur sensible de la progression de la maladie et de tout malaise pouvant résulter d’un traitement médicamenteux chronique. Au cours de l’étude, évaluez quotidiennement le score neurologique de chaque souris à l’aide d’un régime de trois tests effectués séquentiellement.

Surveillez attentivement car il est très difficile de délimiter les scores aux points de transition phénotypique dans le premier test. Le test de suspension de la queue, tenez la souris à environ 1,5 pouce de la base de la queue sur le dessus du fil de fer de la cage domestique. Observez la fonction des membres postérieurs pendant une période d’une à deux secondes et répétez le test trois fois.

Pour le test de marche. Placez la souris sur une surface propre qui offre une certaine traction et a une distance de marche d’au moins 25 centimètres. Laissez la souris marcher jusqu’à 75 centimètres tout en observant son ga.

Pour le test du réflexe d’écriture, placez la souris sur le côté et utilisez un chronomètre pour mesurer le temps qu’il faut pour s’écrire sans aide des deux côtés. Un seul essai de ce test est requis. Évaluez chaque membre postérieur gauche ou droit indépendamment sur une échelle de zéro à quatre en fonction du résultat collectif des trois tests d’observation phénotypique.

Un score sinusal de zéro indiquant que la souris est présymptomatique. Lors de l’essai de suspension, les membres postérieurs sont complètement étendus en s’éloignant de la ligne médiane latérale et restent dans cette position pendant deux secondes ou plus. De plus, lors du test de marche, une démarche normale est observée.

Attribuez un score de un indiquant l’apparition des premiers symptômes. Si, pendant l’essai de suspension, le membre postérieur est soit affaissé vers la ligne médiane latérale, soit partiellement affaissé vers la ligne médiane latérale en tremblant ou anormalement évasé d’une autre manière. En plus des symptômes du test de suspension qui viennent d’être montrés, la démarche d’une souris qui devrait recevoir un score de un devrait toujours sembler normale ou légèrement inférieure.

Attribuez un score de deux indiquant le début du parsis. Si pendant l’essai de suspension, le membre postérieur est partiellement ou complètement affaissé, et en plus pendant l’essai de marche, les membres postérieurs sont utilisés pour le mouvement vers l’avant. Cependant, soit les orteils se courbent vers le bas au moins deux fois au cours d’une marche de 75 centimètres, soit n’importe quelle partie du pied traîne pour obtenir un score de deux.

La souris doit également être capable de s’écrire elle-même après avoir été placée sur ses deux côtés dans les 10 secondes. Un score sinusal de trois indiquant une paralysie. Si, pendant le test de suspension, la souris présente une paralysie rigide du membre postérieur ou un mouvement articulaire minimal, la souris peut toujours montrer un mouvement vers l’avant pendant le test de marche, mais pas en utilisant ses membres postérieurs.

En plus d’un score sinusal de trois, la souris doit toujours être capable de s’écrire elle-même après avoir été placée sur ses deux côtés dans les 10 secondes. Enfin, un score de quatre, définissant le point final humain chaque fois que la souris montre une paralysie rigide pendant la suspension. Le test ne montre aucun mouvement vers l’avant pendant le test de marche à l’aide des membres postérieurs, et est également incapable de s’écrire dans les 10 secondes après avoir été placé de chaque côté.

Les souris mâles ont généralement une progression de la maladie plus agressive que les souris femelles, comme en témoigne une plus grande proportion de leur vie présentant des symptômes qui peuvent être classés avec un score neurologique de un par rapport aux femelles. À mesure que les symptômes augmentent jusqu’à atteindre un score neurologique de deux ou trois, le nombre de jours passés à chaque score est égal en fréquence entre les sexes. On voit ici la logistique ordinale, des graphiques d’analyse statistique générés à l’aide du protocole neuroco qui vient d’être décrit.

Ces données proviennent d’une étude pharmacologique sur l’efficacité d’un médicament dans laquelle une cohorte de souris SOD un G 93 recevant le composé d’essai TDI 1 73 est comparée à une cohorte de souris recevant le véhicule. Aucune différence statistiquement significative n’a été observée lorsque les sexes ont été analysés séparément, mais une signification statistique a été atteinte lorsque les sexes ont été fusionnés. Bien que montrant des tendances similaires, l’analyse de la survie de Kaplan Meyer n’était pas assez sensible pour révéler des différences significatives, même lorsque les sexes étaient fusionnés.

Une fois maîtrisé, le système de scoring peut être appliqué en moins d’une minute par souris s’il est correctement exécuté. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’évaluer la progression de la maladie dans le SOD One G 93, un modèle murin d’un LS à l’aide du système Neuroco.