Un simple système de notation composite phénotype pour l'évaluation des modèles murins de l'ataxie cérébelleuse

Nous avons développé un système de score phénotypique composite pour l’évaluation de la gravité et de la progression de la maladie. Dans des modèles murins d’ataxie cérébelleuse, nous effectuons quatre tests différents, le test du rebord, le test du membre postérieur, l’étreinte, la démarche et la cyphose, en utilisant une échelle de zéro à trois pour chaque test pour un score combiné de zéro à 12. Pour les quatre mesures, le test de rebord a été effectué pour mesurer directement la coordination.

L’étreinte des membres postérieurs est un marqueur de la progression de la maladie dans un certain nombre de modèles murins de neurodégénérescence. La démarche est une mesure de la coordination et de la fonction musculaire. La cyphose est une courbure de la colonne vertébrale dans la région thoracique cervicale, fréquente chez les modèles murins de neurodégénérescence du système moteur et du cervelet rachidien qui effectuent chaque test et enregistrent le score.

La somme moyenne des quatre scores ou le score phénotypique composite moyen est calculée pour chaque groupe de souris et tracée. Lors de l’application de ce protocole à différents modèles de souris, il est important d’analyser d’abord les scores des tests individuels afin de déterminer la combinaison idéale des quatre mesures décrites. Ce protocole spécifique a été conçu pour faire la distinction entre les individus affectés et non affectés, tout en quantifiant la progression du phénotype de la maladie dans des modèles murins d’ataxie cérébelleuse spinale.

Tapez sept. Bonjour, je suis Stephanie Fur du laboratoire du Dr Gwen Garden au Département de neurologie de l’Université de Washington. Aujourd’hui, nous allons vous montrer une méthode simple et sensible pour évaluer la gravité de la maladie dans des modèles murins d’ataxie cérébelleuse.

Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour quantifier les différences phénotypiques dans des modèles murins d’ataxie cérébelleuse spinale de type sept ou SCA sept, et pour suivre la progression du phénotype SCA sept au fil du temps. Alors commençons. Le test du rebord est une mesure directe de la coordination, qui est altérée dans le cervelet, les ataxies et de nombreux autres troubles neurodégénératifs.

Cela mesure les signes les plus directement comparables à ceux de l’homme de l’ataxie cérébelleuse pour prévenir les biais. L’expérimentateur qui effectue les évaluations ne doit pas connaître le génotype de l’animal. Au cours des évaluations, les mesures individuelles sont notées sur une échelle de zéro à trois, où zéro représente l’absence du phénotype et trois représente sa manifestation la plus grave.

Commencez par soulever la souris de la cage et placez-la sur le rebord de la cage. Observez la souris marcher le long du rebord de la cage et s’abaisser dans sa cage. Une souris de type sauvage marchera le long du rebord sans perdre l’équilibre et redescendra gracieusement dans la cage à l’aide de ses pattes.

Ce comportement se voit attribuer un score de zéro. Si la souris perd pied en marchant le long du rebord, mais semble par ailleurs coordonnée, elle reçoit un score de un. S’il n’utilise pas efficacement ses pattes arrière ou s’il ne peut pas s’abaisser gracieusement dans la cage.

Il reçoit un score de deux s’il tombe du rebord ou presque en marchant ou en essayant de s’abaisser ou s’il tremble et refuse de bouger du tout. Malgré les encouragements, il reçoit un score de trois. Effectuez le test de rebord trois fois pour assurer une mesure précise et enregistrez le score du test de rebord.

Voyons maintenant comment marquer l’étreinte des membres postérieurs. L’étreinte des membres postérieurs est un marqueur de la progression de la maladie dans un certain nombre de modèles murins de neurodégénérescence, y compris certaines ataxies cérébelleuses. Pour commencer l’évaluation, saisissez la queue près de sa base et soulevez le plus loin de tous les objets environnants.

Observez la position des membres postérieurs pendant environ 10 secondes. Si les membres postérieurs sont constamment écartés vers l’extérieur en s’éloignant de l’abdomen, on lui attribue un score de zéro. Si un membre postérieur est rétracté vers l’abdomen pendant plus de 50 % du temps suspendu, il reçoit un score de un.

Si les deux membres postérieurs sont partiellement rétractés vers l’abdomen pendant plus de 50 % du temps suspendus, il reçoit un score de deux. Si les membres postérieurs sont entièrement rétractés et touchent l’abdomen pendant plus de 50 % du temps suspendus, il reçoit un score de trois. Effectuez le test trois fois et notez le score de serment des membres postérieurs.

Voyons maintenant comment évaluer la démarche. Le test de marche est une mesure de la coordination et de la fonction musculaire. Pour commencer le test, retirez la souris de sa cage et placez-la sur une surface plane, la tête, la tête tournée vers l’enquêteur.

Observez la souris de dos pendant qu’elle marche. Si la souris se déplace normalement avec son poids corporel soutenu sur tous les membres, son abdomen ne touchant pas le sol, et avec les deux membres postérieurs participant uniformément, elle reçoit un score de zéro. S’il montre un tremblement ou semble boiter en marchant, ou si ses pieds sont légèrement pointés vers l’arrière de son corps, il reçoit un score de un.

S’il présente un tremblement sévère, une boiterie sévère, un bassin abaissé ou si les pieds s’éloignent plus sévèrement du corps pendant la locomotion, il est attribué. Deux. Si la souris a du mal à avancer et traîne son abdomen sur le sol, elle reçoit un trois. Observez l’AG des souris trois fois et le score de patin enregistré.

Voyons maintenant. Le test de cyphose La cyphose est une courbure dorsale caractéristique de la colonne vertébrale. Il s’agit d’une manifestation courante des maladies neurodégénératives impliquant les systèmes moteurs, y compris les ataxies cérébelleuses spinales dans des modèles murins.

Elle est causée par une perte de tonus musculaire dans les muscles de la colonne vertébrale secondaire à la neurodégénérescence. Pour commencer, retirez la souris de sa cage et placez-la sur une surface plane. Observez-le pendant qu’il marche.

Si la souris est capable de redresser facilement sa colonne vertébrale pendant qu’elle marche et qu’elle n’a pas de cyphose persistante, elle reçoit un score de zéro. Si la souris présente une cyphose légère mais est capable de redresser sa colonne vertébrale, elle reçoit un score de un. S’il est incapable de se redresser, il est complètement et maintient une cyphose persistante, mais légère, il reçoit un score de deux.

Si la souris maintient une cyphose prononcée lorsqu’elle marche ou lorsqu’elle est assise, on lui attribue un score de trois. Observez le score de cyphose de la souris trois fois. Remettez la souris dans sa cage et enregistrez son score de cyphose.

Voici un graphique représentatif d’une évaluation phénotypique composite d’un modèle de spino transgénique murn, d’ataxie cérébelleuse de type sept connu sous le nom de Flocked SCA 7 92 Q.Les scores des quatre mesures ont été additionnés pour chaque souris, et le score composite moyen a été calculé pour les deux génotypes de chaque âge. Ici, les souris Fluxed, SCA 7 92 Q présentent un phénotype SCA sept progressif qui est significativement différent de celui des compagnons de portée transgéniques. Il est important de noter que ce score phénotypique croissant au fil du temps est cohérent avec la nature progressive de la maladie humaine.

Nous venons de vous montrer comment utiliser un système de score phénotypique composite pour évaluer la gravité et la progression de la maladie dans des modèles murins d’ataxie cérébelleuse. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler que l’obésité est un facteur de confusion dans les quatre tests décrits. Les résultats de tests individuels peuvent être analysés séparément pour déterminer d’abord leur combinaison idéale dans un système de score phénotypique composite, le plus approprié pour votre modèle de souris.

Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.