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Utilisation Tomoauto: Un protocole pour la tomographie à haut débit automatisé cryo-électronique
Utilisation Tomoauto: Un protocole pour la tomographie à haut débit automatisé cryo-électronique
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JoVE Journal Bioengineering
Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Utilisation Tomoauto: Un protocole pour la tomographie à haut débit automatisé cryo-électronique

Full Text
11,450 Views
11:33 min
January 30, 2016

DOI: 10.3791/53608-v

Dustin R. Morado1, Bo Hu1, Jun Liu1

1Department of Pathology and Laboratory Medicine,University of Texas Health Science Center at Houston

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Nous présentons un protocole sur la façon d'utiliser à haut débit tomographie cryo-électronique pour déterminer haute résolution dans les structures in situ de machines moléculaires. Le protocole permet de grandes quantités de données à traiter, évite les goulots d'étranglement communs et de réduire l'indisponibilité des ressources, permettant à l'utilisateur de se concentrer sur des questions biologiques importantes.

L’objectif global de cette procédure est d’aider les utilisateurs à établir un pipeline de collecte et de traitement à haut débit de la cryotomographie électronique. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la cryo-tomorgraphie électronique, telles que : comment traiter les données collectées avec des détecteurs de nouvelle génération et traiter une énorme quantité de données produites par un logiciel de collecte automatisé en série d’inclinaisons ? Le principal avantage de cette technique est que l’utilisateur peut configurer plusieurs progiciels de manière unifiée, afin de trouver un pipeline efficace pour le traitement automatisé des séries d’inclinaisons, ce qui permet de consacrer plus de temps à l’analyse des tomogrammes.

En général, les personnes qui découvrent la cryo-ET auront du mal car de nombreuses étapes fastidieuses sont nécessaires pour traiter des données massives générées par le microscope électronique. Nous avons eu l’idée de ce développement il y a cinq ans, lorsque nous avons dû passer manuellement par des centaines d’étapes pour obtenir une reconstruction 3D d’une bactérie. À l’avance, consultez le protocole de texte sur la préparation des minicellules Shigella flexneri.

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Bioengineering numéro 107 In situ Biologie structurale cryotomography d'électrons. agent pathogène bactérien minicellule la sécrétion de protéines injectisome machinerie moléculaire analyse à haut débit de l'image

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