Élaboration d'un modèle de coiffage pulpaire direct pour l'évaluation des pulpaire Wound Healing et Formation reconstructrice Dentin chez la souris

L’objectif global de ce protocole est de présenter la procédure de coiffage direct de la pulpe chez la souris. Cette méthode peut vous aider à répondre à des questions clés en biologie de la pulpe, telles que la cicatrisation de la pulpe ou la formation de la dentine réparatrice, lorsque vous placez des matériaux de recouvrement de la pulpe piégés sur la pulpe exposée. Le principal avantage de cette technique est que la procédure de coiffage direct de la pulpe effectuée chez l’homme peut également être effectuée chez la souris, exactement de la même manière.

Les implications de cette technique s’étendent à l’amélioration des propriétés des matériaux pour sauver des dents qui sont autrement condamnées à des traitements plus invasifs, tels que le traitement de canal. Après avoir correctement anesthésié la souris pour la procédure, placez le porte-bouche dans sa bouche et fixez l’autre extrémité à la table de manière à ce que la tête soit tournée vers le haut. À l’aide d’un bon éclairage et d’un stéréoscope, observez la première molaire maxillaire.

Ensuite, à l’aide de la fraise quart de rond dans une pièce à main à grande vitesse à 200 000 tr/min, retirez la région centrale de l’émail de la dent jusqu’à ce que la pulpe soit visible à travers la dentine transparente. Attention à ne pas pénétrer dans la pulpe. Ensuite, à l’aide d’un no.

15 lime endodontique K, perforer la dentine et exposer la pulpe. Ne poussez aucun débris dans la pulpe ; Cela peut être évité en tournant la lime K tous les trimestres, puis en retirant la lime K. Maintenant, préparez le MTA et, à l’aide de l’explorateur, livrez-le, puis placez-le dans la zone exposée à l’aide du verso de la pointe de papier et en tapotant doucement.

Ensuite, à l’aide d’une seringue chargée d’un agent de mordançage à 35 % d’acide phosphorique, couvrez la dent avec le mordançant, en évitant les tissus gingivaux, et laissez le mordançant agir pendant 15 secondes. Après 15 secondes, aspirez l’agent de mordançage de la dent et utilisez un applicateur en coton humidifié à l’eau pour essuyer tout agent de gravure restant. Aspirez et essuyez jusqu’à ce que tout l’agent de gravure soit éliminé.

Ensuite, appliquez les adhésifs dentaires à l’aide du dos de la pointe du papier. Amincez la couche adhésive en la soufflant avec de l’air comprimé pendant quelques secondes. Faites ensuite durcir l’adhésif pendant 30 secondes avec la lumière appropriée.

Maintenant, placez de petites quantités de composite sur la dent à l’aide de la pointe de l’explorateur pour faire couler le composite dans les rainures de la dent. Une fois appliqué, durcissez le composite pendant 30 secondes. Après avoir euthanasié la souris et retiré tout le maxillaire, placez la mâchoire dans du paraformaldéhyde à 4 % dans du PBS à pH 7,4.

Gardez le tissu à 4 degrés Celsius pendant la nuit, et le lendemain matin, transférez-le dans de l’éthanol à 70 % pour le stockage jusqu’à ce qu’il puisse être traité. Pour faire une micro-tomodensitométrie du maxillaire, fixez-le d’abord dans une gaze imbibée d’éthanol à 70 %, puis emballez-le dans un tube de culture cellulaire de 15 millilitres. Montez ensuite le tube sur la platine de balayage micro-CT.

Ensuite, réglez la source de rayons X pour qu’elle délivre un courant de 145 microampères avec 55 kilovolts de crête pendant 200 millisecondes. À l’aide d’un filtre en aluminium de 0,5 millimètre, acquérez des images avec une résolution de 20 microns. Une fois les examens terminés, commencez à détartrer le maxillaire avec 5 % d’EDTA et 4 % de saccharose dans du PBS, à un pH de 7,4.

Laissez cette réaction durer deux semaines à 4 degrés Celsius. Après avoir encastré le maxillaire, faites des tranches de cinq microns d’épaisseur. Les zones de recouvrement de la pulpe coïncident généralement avec la racine palatine distale, qui peut être utilisée comme point de repère.

Déterminez la zone d’intérêt précise en examinant l’histologie au microscope optique et en comparant les résultats aux micro-tomodensitogrammes. Pour la coloration H&E, retirez la paraffine et réhydratez les lames avec deux bains de xylène pendant quelques minutes chacun. Ensuite, passez-les dans une série d’éthanol dilué en série.

Chaque bain ne doit être appliqué qu’une minute. Suivez la réhydratation par un rinçage. Ensuite, appliquez la solution d’hémotoxyline pendant deux minutes et demie.

Retirez le colorant avec un rinçage, puis mettez les lames dans de l’éthanol à 95 % pendant une minute. Ensuite, colorez les lames avec une solution d’éosine pendant une minute, puis rincez-les. Inversez les étapes d’hydratation pour déshydrater les tissus tachés, en commençant par l’éthanol.

Ensuite, traitez-les avec du xylène. Les diapositives peuvent ensuite être montées et imagées. En utilisant les procédures décrites, le recouvrement de la pulpe a été effectué sur des souris âgées de 8 semaines.

Six semaines plus tard, leurs maxillaires ont été récoltés et examinés. Curieusement, la coloration H&E a révélé la formation de dentine dans toute la chambre pulpaire et les canaux radiculaires. Comparativement, la molaire non coiffée ne présentait pas la même formation de dentine.

Dans la molaire coiffée, il y avait des caractéristiques de formation à la fois semblable à la dentine et à l’os, car les tubules dentinaires et les ostéocytes ont été trouvés dans la dentine réparatrice, suggérant que la pulpe lésée peut être minéralisée à la fois par les odontoblastes résidents et les ostéoblastes immigrants. L’utilisation de la coloration immunohistochimique DMP1 a confirmé l’augmentation de l’activité des cellules formant de la dentine réparatrice. Tout comme les vrais cabinets cliniques dentaires, avoir un assistant est extrêmement utile.

Par exemple, avec un assistant, cette technique peut être réalisée en seulement dix minutes, une fois maîtrisée. Il est important de noter que lorsque vous exposez la pulpe, n’oubliez pas d’utiliser l’endolime et non la fraise. Et lorsque vous remettez le MTA, soyez prudent.

N’oubliez pas que travailler avec des fixateurs comme le paraformaldéhyde peut être extrêmement dangereux. Des précautions telles que le port d’un équipement de protection individuelle doivent toujours être prises.