Un modèle de souris génétiquement modifiée de cancer colorectal sporadique

L’objectif global de cette procédure est d’obtenir une infection adéno-crétique segmentaire du côlon dans un modèle de souris génétiquement modifié. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du cancer colorectal, ou CCR, car elle fournit un excellent modèle pour étudier la biologie et le traitement du CCR. Le principal avantage de cette technique est que tout laboratoire ayant de l’expérience en chirurgie des petits rongeurs peut utiliser ce modèle pour produire des tumeurs localisées du côlon hautement reproductibles et facilement accessibles.

Commencez par placer une souris anesthésiée en position couchée et appliquez une pommade sur les yeux de l’animal. Collez la souris dans une position sûre, puis confirmez le niveau approprié de sédation par pincement des orteils. Faites une incision médiane d’environ 15 millimètres dans la peau du bas-ventre.

Ensuite, utilisez une pince pour saisir la musculature de la paroi abdominale et incisez soigneusement le muscle avec des ciseaux pour ouvrir la cavité abdominale. Après avoir identifié le côlon distal, serrez soigneusement le tissu avec une pince délicate à environ 15 millimètres à proximité de l’anus. Ensuite, insérez un tube flexible en téflon en avançant soigneusement le tube jusqu’à ce qu’il atteigne l’occlusion luminale.

le tube à l’aide d’une canule de calibre 30. Connectez une seringue standard d’un millilitre à la canule et rincez le côlon avec plusieurs millilitres de solution saline normale jusqu’à ce que toutes les matières fécales aient été évacuées. Une fois que le côlon distal est vide, remplacez le tube salin par un nouveau tube en téflon et utilisez une deuxième pince pour occlure le côlon à environ trois millimètres distal de la première pince.

À l’aide d’une deuxième seringue d’un millilitre équipée d’une canule de calibre 30, injectez soigneusement 50 à 80 microlitres de 0,25 % de trypsine-EDTA dans le segment du côlon clampé. Le côlon doit gonfler suffisamment pour briser la barrière muqueuse sans perforer le segment de tissu clampé. Après 10 minutes, retirez la pince distale.

Ensuite, retirez le tube de trypsine et rincez le côlon distal avec 500 microlitres de solution saline normale. Après avoir inséré un nouveau tube en téflon, clampez à nouveau le côlon et gonflez le tissu avec 50 à 80 microlitres de solution adénovirale. Après 30 minutes, retirez les pinces et le tube et fermez la paroi abdominale avec des sutures de course 6-0 rapidement résorbables.

Fermez la peau à l’aide de pinces chirurgicales et surveillez l’animal sur un coussin chauffant jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli. Pour surveiller la croissance tumorale par coloscopie, placez l’animal porteur d’une tumeur anesthésié en position couchée sur un coussin chauffant et insérez l’endoscope par voie transanale dans le tractus intestinal. Insufflez doucement de l’air sous contrôle visuel pour distendre le côlon.

Ensuite, poussez soigneusement l’endoscope vers l’avant jusqu’à ce qu’une lésion de la muqueuse puisse être identifiée dans le côlon distal, en sauvegardant chaque image endoscopique au fur et à mesure qu’elle est acquise pour une évaluation ultérieure. Lorsque toutes les images ont été obtenues, retirez lentement l’endoscope et placez la souris sur un coussin chauffant à 38 degrés Celsius jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie. Les tumeurs peuvent être facilement et à plusieurs reprises surveillées par coloscopie sans stress majeur pour les animaux.

Les manifestations de la maladie sont très similaires à celles du cancer colorectal humain, les animaux développant d’abord des adénomes suivis finalement du développement d’un adénocarcinome dans le côlon distal. Selon le génotype conditionnel des animaux, les tumeurs métastasent également au péritoine et au foie. Si un allèle cré-rapporteur fluorescent est utilisé, les manifestations tumorales peuvent être facilement identifiées par l’expression de protéines fluorescentes qui, selon l’allèle rapporteur, peuvent être suffisamment brillantes pour être visualisées à la lumière du jour.

Histologiquement, 95 % des tumeurs en développement sont des adénocarcinomes ressemblant étroitement au cancer colorectal humain et présentent tout le spectre du développement tumoral de l’adénome non invasif à l’adénocarcinome envahissant les structures environnantes. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 50 minutes si elle est exécutée correctement. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler d’accorder une attention particulière à la vulnérabilité du côlon à tout moment.

La perforation conduit inévitablement à une péritonite et à une septicémie et nécessite une fin du lavement. N’oubliez pas que travailler avec l’adénovirus nécessite des mesures de sécurité de niveau de biosécurité deux, car le virus peut être dangereux.