Modèle de souris orthotopique du cancer colorectal

Bonjour, je m’appelle William Sang. Je travaille dans le laboratoire du Dr Edgar Engelman au Département de pathologie de l’Université de Stanford. Je suis également résident en chirurgie à l’Université de Californie à San Francisco.

Aujourd’hui, je vais vous montrer comment établir un modèle murin orthotopique de cancer colorectal. Ce modèle est utile pour étudier la progression naturelle du cancer colorectal et pour tester de nouveaux agents thérapeutiques contre le cancer colorectal. Ceci est en contraste avec le modèle traditionnel de tumeur sous-cutanée.

Le modèle de tumeur sous-cutanée est loin d’être idéal dans la mesure où les cellules tumorales se développant sous la peau d’un phénotype altéré ne progressent souvent pas et ne métastasent pas. En fait, la réponse tumorale au traitement peut varier considérablement selon que les cellules tumorales sont implantées dans un emplacement sous-cutané ou orthotopique. Deux techniques peuvent être utilisées pour établir un modèle murin orthotopique du cancer colorectal.

Une technique consiste à injecter une suspension de cellules cancéreuses colorectales dans la paroi SQL. L’autre technique consiste en la transplantation d’un morceau de tumeur sous-cutanée sur un caïcum. Les deux techniques sont similaires et impliquent les étapes suivantes, l’une, la préparation d’une cellule ou d’une tumeur.

Deuxièmement, la préparation de la souris, la laparotomie et l’exposition du caecum Trois injections de cellules ou transplantation de tumeur, et quatre souris fermeture et récupération de la paroi abdominale. Commençons.

Donc, pour la procédure d’aujourd’hui, nous avons un certain nombre d’instruments différents que nous utilisons. Il s’agit de pinces, de ciseaux, d’un porte-aiguille ordinaire, d’un porte-aiguille Castro Viejo. Et ce qui est important pour la procédure, c’est que nous disposons d’un morceau de gaze stérile prédécoupé.

Les cellules cancéreuses colorectales sont cultivées en culture et récoltées lorsqu’elles sont sub-confluentes, une suspension unicellulaire est préparée dans une solution saline tamponnée au phosphate et conservée sur de la glace. Une malveillance avec une tumeur colorectale sous-cutanée préalablement établie est euthanasiée. La tumeur sous-cutanée est retirée à l’aide d’une technique stérile et divisée en morceaux de deux à trois millimètres.

Les morceaux de tumeur sont conservés dans une solution saline tamponnée au phosphate sur de la glace. Dans notre laboratoire, nous utilisons un anesthésique inhalé à base de fluor. Alternativement, on peut utiliser des anesthésiques injectables pour obtenir le même effet.

La profondeur de l’anesthésie est évaluée à l’aide d’un pincement des orteils. Il ne devrait pas y avoir de réflexe de retrait lors du pincement des orteils. Des antibiotiques peuvent être administrés à ce stade.

La souris anesthésiée, qui a été préalablement rasée, est correctement positionnée. L’abdomen est préparé trois fois avec une solution de bétadine, puis l’abdomen et le site chirurgical sont drapés de manière stérile. Une petite entaille est faite dans la peau.

La musculature de la paroi abdominale est greffée et soulevée. La cavité abdominale est blessée et une seule lame des ciseaux est utilisée pour repousser le contenu intra-abdominal. L’incision est prolongée à deux à trois centimètres.

Le sécum, avec sa poche à l’extrémité aveugle, est identifié et extériorisé. Le secum est isolé du reste de la souris. À l’aide d’une gaze stérile prédécoupée, une solution saline chaude est utilisée pour garder le caecum humide.

Une aiguille de calibre 27 ou plus fine est utilisée pour injecter un volume de cellules de 50 microlitres dans la paroi SQL. L’aiguille est retirée. Le site d’injection est inspecté pour s’assurer qu’il n’y a pas de fuite En plus de l’injection de cellules dans la paroi SQL, une approche alternative consiste à transplanter la tumeur sur le cæcum.

Un point de huit est placé sur le caecum à l’aide d’une suture de six oh ou sept oh. La paroi seco est légèrement endommagée. Ensuite, le morceau de tumeur est correctement positionné.

La maille est attachée. Le sécum est renvoyé dans la cavité abdominale. La paroi abdominale de la souris est fermée à l’aide de trois points de suture interrompus à l’aide de trois ou quatre points de suture.

Alternativement, on peut utiliser un simple point de suture, des analgésiques postopératoires et un bolus de liquide peut être administré. À ce stade, la souris est autorisée à se remettre de l’anesthésie avec des anesthésiques inhalés. La souris récupère généralement de l’anesthésie en 30 secondes.

Je viens de vous montrer comment établir un modèle murin orthotopique de cancer colorectal. Le temps nécessaire pour développer des tumeurs primaires et des métastases hépatiques dépendra de la technique utilisée, de la lignée cellulaire utilisée et de l’espèce de souris utilisée. Ce modèle est utile pour étudier la progression naturelle du cancer colorectal et pour tester de nouvelles thérapies contre le cancer colorectal.

Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance pour vos expériences.