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DOI: 10.3791/56110-v
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This study introduces addressable droplet microarrays (ADMs), a novel method for determining absolute protein abundance in single cells. The technique is demonstrated through the characterization of p53 protein expression heterogeneity in a human cancer cell line.
Nous présentons ici des gouttelettes adressable microarrays (SMA), une méthode de tableau basé de gouttelettes en mesure de déterminer l’abondance absolue de protéine dans des cellules individuelles. Nous démontrent la capacité des SMA pour caractériser l’hétérogénéité dans l’expression de la tumeur suppresseur protéine p53 dans une lignée de cellules cancéreuses humaines.
L’objectif global de cette expérience est de déterminer le nombre absolu de copies de protéines d’une protéine cible avec une résolution unicellulaire. Les techniques de cellule unique permettront de mieux comprendre le comportement d’une protéine en relation avec un dogme central et aideront à une quantification précise de l’expression génique contrôlée. Travailler au niveau de la cellule unique peut capturer la riche hétérogénéité de la population cellulaire qui serait autrement perdue par la moyenne qui se produit avec les techniques biochimiques traditionnelles.
En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront des difficultés en raison de la sensibilité des tests unicellulaires ou d’une quantité limitée de protéines dans chaque cellule. Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous avons souhaité effectuer un test de protéines unicellulaire qui pourrait être facilement échantillonné pour une analyse plus approfondie en aval. Commencez cette procédure en fabriquant des puces et en imprimant des microréseaux d’anticorps comme décrit dans le protocole texte.
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