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DOI: 10.3791/56436-v
Benjamin B. Fixman*1, Isaac W. Babcock*1, Laurie S. Minamide*1, Alisa E. Shaw1, Marina I. Oliveira da Silva1,2, Avery M. Runyan1, Michael T. Maloney1,3, Jeffrey J. Field1, James R. Bamburg1
1Department of Biochemistry and Molecular Biology and Molecular, Cellular and Integrated Neuroscience Program,Colorado State University, 2IBMC-Instituto de Biologia Molecular e Celular, i3S-Instituto de Investigaçãoe Inovação em Saúde, ICBAS,Universidade do Porto, 3Denali Therapeutics
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a modified roller tube method for culturing and imaging rodent brain slices over extended periods. The technique maintains neuronal viability while allowing for intermittent high-resolution imaging, facilitating research into neuronal development and neurodegenerative disorders.
Présenté ici est la méthode du tube mis à jour le rouleau pour la culture et intermittent une imagerie du cerveau rongeur tranches sur plusieurs semaines avec un repositionnement précis sur couvre-objet en photodécoupe. Viabilité neuronale et la morphologie de la tranche sont bien entretenus. Sont prévues des adaptations de ce système entièrement fermé à l’aide de virus pour l’expression spécifique de type cellulaire.
L’objectif global de cette méthode modifiée de tube rouleau pour la culture de tranches de cerveau est de fournir un système de culture fermé pour la survie à long terme des tranches. avec la capacité d’imagerie répétitive à haute résolution de la florescence. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le développement neuronal et les troubles neurodégénératifs qui nécessitent l’observation des mêmes neurones au fil du temps, comme la localisation des protéines clés impliquées dans la formation ou la perte de synapses.
Les principaux avantages de cette technique sont le système de culture entièrement fermé qui permet l’utilisation en toute sécurité des virus pour l’expression des protéines et l’utilisation de lamelles photodécoupées pour localiser les mêmes cellules pour l’imagerie. Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous cultivions des tranches sur des lamelles à l’intérieur de tubes à rouleaux, mais nous avions besoin d’un meilleur moyen de visualiser les changements qui se produisent dans les tranches vivantes au fil du temps. L’utilisation généralisée de vecteurs viraux pour exprimer des transgènes et des populations cellulaires spécifiques pour l’imagerie microscope nous a poussés à développer un système fermé pour protéger les utilisateurs et éliminer la contamination des objectifs de microscope.
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