Implant cochléaire et les enregistrements de réponse électriquement évoqué auditif du tronc cérébral chez les souris C57BL/6

Les modèles animaux d’implants cochléaires peuvent faire progresser notre connaissance de la base technologique du traitement de la perte auditive neuronale sensorielle permanente par stimulation électrique. Ce protocole démontre l’implantation assourdissante et cochléaire aiguë dans la souris. Et l’évaluation fonctionnelle de la stimulation des implants cochléaires avec réponse auditive du tronc cérébral.

Certains des principaux défis de la chirurgie des implants cochléaires chez la souris sont la petite taille de la cochlée et la présence de la grande artère stapédique près de la niche de fenêtre ronde. Pour mesurer l’état auditif normal, chargez la mousse acoustique dans une seringue d’un millilitre et injectez de 100 à 200 microlitres de mousse dans le conduit auditif contralatéral d’une souris C57 noire 6 de huit à douze semaines anesthésiée pour isoler la réponse auditive du tronc cérébral de l’oreille ipsilateral, en prenant soin que la seringue scelle étroitement à l’oreille pour la livraison de la mousse jusqu’à l’oreille. Ensuite, placez un haut-parleur à 10 centimètres de l’oreille ipsilateral et nettoyez les électrodes aVR avec 70% d’éthanol.

Placez l’électrode de référence sous la peau sous la pinna de l’oreille ipsilateral et l’électrode active sous la peau du vertex. Le mettre l’électrode au sol sous la peau de la jambe arrière. Connectez le headstage et le préampli au processeur auditif via le port de fibre optique.

Et vérifiez l’impédance des électrodes actives et de référence. Lorsque les électrodes affichent la même impédance, fermez la cabine insonorisée et présentez la stimulation du clic. Enregistrement de l’aVR dans un état de champ libre avec un processeur auditif complexe approprié et un logiciel.

Normalisez le stimulus de clic à 0,1 millisecondes clics monophasiques de canal unique présentés à 21 hertz avec un niveau de clic décroissant de 90 décibels de niveau de pression sonore à 10 décibels de niveau de pression sonore en 10 étapes de décibels dans une fenêtre d’enregistrement de 10 millisecondes. Déterminez ensuite le seuil aVR comme le niveau de décibels le plus bas avec une réponse reconnaissable aux ondes aVR. Pour induire l’assourdissant, placez la souris sur son côté droit en prenant soin de garder le corps droit afin que les voies respiratoires restent ouvertes.

Retirez la fourrure derrière l’oreille ipsilateral et désinfectez la peau exposée avec une solution séquentielle à 70% d’éthanol et un gommage de solution Povidone-Iode. Déplacez l’animal sous un microscope disséquant et utilisez l’objectif 16 fois et un scalpel pour faire une incision postaurculaire d’un à un centimètre et demi. En vertu d’un grossissement de 25 à 40 x, utilisez des forceps pour émousser la dissect à travers la couche de graisse sous-cutanée exposée et rétracter le muscle sternocleidomastoid pour révéler le periosteum timpanique bulla.

Le nerf facial s’enroule autour du bord dorsale postérieur du muscle sternocleidomastoid et court rostrally le long du conduit auditif vers la pinna. En utilisant le nerf facial comme point de repère pour l’identification de l’intimidateur auditif placez doucement un outil de rétractateur auto-retenant dans l’incision pour l’accès à l’intimidateur. Enlevez le tissu qui survole la zone médiodorante du bulla pour permettre une visualisation claire de la crête entre le bulla et le processus mastoïde et faites pivoter doucement une aiguille de 30 guage dans le bulla pour générer un trou sur le côté supérieur postérieur de la crête.

Pincez les petits morceaux d’os avec des forceps à pointe fine pour élargir la stoïtomie jusqu’à ce que la cavité de l’oreille moyenne soit exposée. Et étendre le trou dorsalement vers le processus mastoïde jusqu’à ce que la niche de fenêtre ronde est claire de l’os overlying. L’étape la plus critique est la préparation de la niche de fenêtre.

Assurez-vous de prendre votre temps pour ne pas endommager l’artère stapédiale. En prenant soin de ne pas endommager l’artère stapédiale, étendre l’intimidateur dans la direction supérieure antérieure pour visualiser les stapes, l’os de l’oreille moyenne relié à la fenêtre ovale. Retirez ensuite les stapes pour exposer la fenêtre ovale.

Pour appliquer l’agent ototoxique, utilisez une aiguille émoussée de 30 guage pour perforer doucement les membranes de fenêtre rondes et ovales, confirmant que le périlympe s’épuise. Et utilisez une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 30 pour parcourir lentement 0,2 millilitres de poids de 5% par némycine de volume dissous dans PBS par la fenêtre ovale. Lorsque tout le volume de l’agent a été livré profuse la solution dans la fenêtre ronde en prenant soin de ne pas endommager les structures osseuses de la fenêtre.

Et placez un millimètre carré de morceaux de spongostan trempés dans la néomycine dans la fenêtre ronde et la niche ovale de fenêtre. Retirez ensuite le rétracteur et fermez l’incision, en enregistrant un aVR acoustique post-assourdissant tel que démontré après 30 minutes. Pour insérer le tableau d’électrodes d’implant cochléaire, placez l’outil rétracteur dans l’incision pour accéder de nouveau à la bulla et insérez le tableau d’électrodes dans la scala tympani à une profondeur telle que le quatrième anneau de platine du tableau est situé juste à l’intérieur de la fenêtre ronde.

L’insertion du tableau d’électrodes peut également être délicate. Prenez donc votre temps pour trouver un bon angle d’insertion à l’aide d’un outil forcep pour diriger le fil et un autre pour insérer le tableau. En bobine le fil de plomb à l’intérieur de la bulla et coller le fil au tissu au-dessus de l’intimidateur.

Après avoir soigneusement enlevé le rétracteur et fermé l’insertion avec de la colle tissulaire, utilisez un scalepel pour faire une incision de 0,5 millimètre dans le cou, perpendiculaire à la ligne entre l’endroit où les électrodes aVR actives et de référence seront. Placez la boule au sol dans l’insertion et connectez le tableau d’électrode à la plate-forme de stimulateur animal. Pour effectuer et électrique aVR, placez les électrodes comme démontré précédemment et ouvrez le logiciel de plate-forme de stimulateur animal.

Définissez ensuite le paradigme de stimulation des impulsions électriques et présentez les trains à impulsions électriques enregistrant les réponses aVR électriques évoquées en continu via le TBT Headstage, le préamplificateur et le processeur auditif. Les seuils auditifs pré et post-chirurgicaux servent de lecture fonctionnelle de la procédure assourdissante. L’application topique de 5% de néomycine aux fenêtres ovales et rondes augmente considérablement les seuils d’audition évoqués cliqués.

La stimulation électrique d’une électrode intraochléaire post assourdissante peut générer de manière fiable une activité électrique aVR. Dans certains cas, la stimulation de l’implant cochléaire active le nerf facial et produit une onde d’amplitude élevée avec soit une latence courte caractérisée par une amplification rapide de l’onde III autour de trois millisecondes et probablement une réponse directe du nerf facial, soit une longue latence qui apparaît autour de cinq à six millisecondes et est susceptible d’être une réponse myogénique non auditive , invoqué indirectement par le nerf facial. Dans cette étude, nous avons démontré que le modèle de souris implant cochléaire est faisable aussi l’implant cochléaire est petit et la chirurgie: difficile.

Tout en essayant cette procédure, il est important d’envisager un protocole assourdissant pour éliminer toutes les réponses électrophoniques dans les enregistrements aVR et d’imiter la perte de cellules capillaire trouvé dans la plupart des utilisateurs de C.I.. En résumé, le nombre croissant de modèles génétiques de surdité humaine et les outils biomédicaux disponibles chez la souris font de nous un modèle animal attrayant pour la recherche sur les outils, y compris pour les implants cochléaires.