Synthese en karakterisering van placenta Chondroitin sulfaat een (plCSA) - Targeting lipide - polymeer nanodeeltjes

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het gebied van de levering van geneesmiddelen, zoals gerichte levering van therapieën aan menselijke kankers en de placenta cystoblast. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een eenvoudige en reproduceerbare methode is om peptiden geconjugeerd in andere deeltjes te synthetiseren. Om te beginnen, voeg drie millimeter van vier procent ethanol aan een steriele 10 milliliter centrifuge buis.

Voeg vervolgens 90 microgram sojaleeloplossing toe, 210 microgram DSPE-PEG-carboxylzuurvoorraadoplossing en 750 microgram DOX-voorraadoplossing. Gebruik een spuit van één milliliter om twee milligram PLGA-voorraadoplossing te pipette. Plaats de centrifugebuis in een ijsbad op een ultrasone processor en sonicate gedurende twee minuten.

Voeg vervolgens PLGA stock oplossing drop-wise in de centrifuge buis. Om de DNP's te zuiveren, gebruikt u een centrifugefilter om de oplossing te wassen in de MES-buffer van 0,1 molaire. Dan, centrifuge de oplossing op 1000 G gedurende drie minuten op vier graden Celsius.

Om te beginnen ester activering, voeg 0,4 milligram EDC aan een milliliter van DNP's. Voeg vervolgens 0,24 milligram NHS toe aan de reactie. Laat de reactie vervolgens tot een uur optreden bij kamertemperatuur in het donker.

Meng hierna de reactiecomponenten grondig en plaats de reactie op een shaker. Om de aminereactie te starten, gebruikt u PBS om de pH van de buffer te verhogen van 7,2 naar 7,5. Voeg vervolgens 0,5 milligram pICSA-targetingpeptide toe aan de reactieoplossing.

Meng de oplossing goed en plaats deze op een shaker. Laat vervolgens de reactie 's nachts in het donker bij vier graden Celsius doorgaan. Vul de volgende dag dialysezakken met de conjugaatoplossing.

Zuiver de pICSA DNP's met PBS-buffer bij kamertemperatuur gedurende 24 uur in het donker. Na het kweken van cellen volgens het tekstprotocol, verwijder de media en voeg een milliliter verse, koude media met vijf procent FBS en pICSA DNPs of DNPs. Vervolgens, incubeer de cel en nano-deeltje mengsel voor een uur op vier graden Celsius.

Verwijder hierna de media en was de cellen drie keer met PBS. Voeg vervolgens een milliliter verse media toe en broed de cellen gedurende 30 minuten uit bij 37 graden Celsius. Verwijder hierna de media en was de cellen drie keer met PBS.

Voeg vervolgens twee milliliter koude, vier procent PFA toe en broed het mengsel gedurende 10 minuten op kamertemperatuur uit. Verwijder de PFA en was de cellen met twee milliliter PBS. Voeg vervolgens een milliliter PBS met DAPI toe voor nuclei-vlekken.

Laat het mengsel 10 minuten op kamertemperatuur uitbroeden. Voeg ten slotte het montagemedium en het beeld van de fluorescentie toe met een fluorescentiemicroscoop. Met behulp van dit protocol werden DNP's met succes voorbereid en geconjugeerd naar pICSA BP. Na vervoeging steeg de diameter van de primaire DNP's tot ongeveer 109 nanometer.

De TEM-beelden van de DNP's en de pICSA DNP's toonden aan dat de deeltjes goed verspreid waren en over het algemeen sferische morfologie vertoonden. Het zetapotentieel van de nanodeeltjes was negatief 20,1 en 29,9 millivolt, wat aangeeft dat de nanodeeltjes zeer stabiel waren. De JEG3 cellulaire opname test aangegeven de pICSA DNPs gebonden aan de JEG3 cellen binnen 30 minuten.

Daarom werd de pICSA BP efficiënt geconjugeerd aan de oppervlakte. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden om het mengsel sonicate voor een tot twee minuten voor het toevoegen van PLGA. Na deze procedure kunnen onze methoden zoals HPLC-test worden uitgevoerd om de vervoegingsefficiëntie nauwkeuriger te bepalen.

Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van reproductieve biologie om de mogelijkheid van placenta-gerichte behandeling bij zwangerschapscomplicaties te onderzoeken.