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DOI: 10.3791/58975-v
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Ce protocole détaille une méthode monocouche, sans sérum, pour générer efficacement des cellules hépatocytes à partir de cellules souches pluripotentes humaines (HPSC) en 18 jours. Cela implique six étapes que les hPSC se différencient séquentiellement en types de cellules intermédiaires tels que la strie primitive, endoderm définitif, prégut postérieur et progéniteurs de bourgeons hépatiques avant de former des cellules hépatocytes.
Cette méthode permet la génération d’un grand nombre d’progéniteurs de bourgeons hépatiques humains et de cellules hépatocytes d’une grande pureté. La capacité de générer ces cellules hépatiques pourrait être importante pour la médecine régénérative et d’autres domaines. En contrôlant les voies de signalisation développementales pour favoriser la différenciation hépatique et supprimer la formation de types de cellules indésirables, cette méthode permet une génération efficace d’progéniteurs de bourgeons hépatiques humains et de cellules de type hépatocyte par six et 18 jours de différenciation respectivement.
Le principal avantage de cette technique est la grande pureté des cellules hépatiques humaines générées. Pour être cette procédure, ajouter 50 millilitres d’IMDM à un flacon conique contenant une barre d’agitation. Chauffer le milieu à 50 degrés Celsius et ajouter 0,5 gramme de PVA tout en remuant continuellement pour préparer un stock de PVA à une concentration de 10 milligrammes par millilitre.
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