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Définition et génération évolutive des cellules hépatocytes-like de pluripotentes humaines Cellul...
Définition et génération évolutive des cellules hépatocytes-like de pluripotentes humaines Cellul...
JoVE Journal
Developmental Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Developmental Biology
Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Définition et génération évolutive des cellules hépatocytes-like de pluripotentes humaines Cellules souches

Full Text
13,172 Views
08:36 min
March 2, 2017

DOI: 10.3791/55355-v

Yu Wang1, Sharmin Alhaque1, Kate Cameron1, Jose Meseguer-Ripolles1, Baltasar Lucendo-Villarin1, Hassan Rashidi1, David C. Hay1

1MRC Centre for Regenerative Medicine,University of Edinburgh

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol outlines a method to generate human hepatocyte-like cells from pluripotent stem cells using recombinant laminin matrices. It provides a scalable and GMP-ready system for producing functional hepatocytes for liver research.

Key Study Components

Area of Science

  • Cell differentiation
  • Stem cell biology
  • Liver research

Background

  • Human hepatocyte-like cells are crucial for studying liver biology.
  • Pluripotent stem cells can differentiate into various cell types.
  • Recombinant laminin matrices support cell adhesion and growth.
  • Standardized methods enhance reproducibility in research.

Purpose of Study

  • To develop a cost-effective method for producing hepatocyte-like cells.
  • To enable mass production of functional hepatocytes.
  • To facilitate research in liver biology and disease modeling.

Methods Used

  • Thawing and diluting recombinant laminin-521.
  • Coating cell culture plates with laminin solution.
  • Incubating plates to promote cell adhesion.
  • Adding pre-warmed mTeSR for cell culture.

Main Results

  • Successful generation of human hepatocyte-like cells.
  • High reproducibility of cell production.
  • Functional characteristics of hepatocyte-like cells confirmed.
  • Scalable system suitable for various research applications.

Conclusions

  • The method provides a reliable approach to hepatocyte production.
  • It supports both basic and applied liver research.
  • Future studies can leverage this system for drug testing and disease modeling.

Frequently Asked Questions

What are human hepatocyte-like cells?
They are cells that mimic the function of human liver cells, derived from pluripotent stem cells.
Why use recombinant laminin matrices?
They enhance cell adhesion and promote differentiation into hepatocyte-like cells.
What is the significance of a GMP-ready system?
It ensures that the cell production process meets regulatory standards for research and potential therapeutic applications.
How reproducible is this method?
The defined nature of the protocol allows for high reproducibility in producing hepatocyte-like cells.
Can this method be scaled up?
Yes, the protocol is designed for scalability to meet research needs.
What applications can these cells be used for?
They can be used for studying liver biology, drug testing, and disease modeling.

La méthode présentée ici décrit une solution évolutive et de bonnes pratiques de fabrication (BPF) système de différenciation -ready pour générer des cellules hépatocytes humains comme à partir de cellules souches pluripotentes. Il sert comme un système rentable et standardisée pour générer des cellules hépatocytes comme humains pour la recherche fondamentale et appliquée foie humain.

L’objectif global de ce protocole est de produire des cellules humaines de type hépatocytes à partir de cellules souches pluripotentes en utilisant des matrices de laminines recombinantes dans des conditions définies. Cette méthode permet à l’utilisateur de fabriquer sur mesure des hépatocytes humains fonctionnels pour étudier la biologie du foie dans la boîte. Le principal avantage de cette technique est que sa nature définie permet la production de masse d’hépatocytes avec un haut degré de reproductibilité expérimentale. Pour commencer l’expérience, décongelez 100 microgrammes par millilitre de laminine-521 recombinante, ou LN-521, à quatre degrés Celsius.Diluez le LN-521 décongelé dans du 1xDBPS glacé avec du magnésium calcique pour obtenir une solution de cinq microgrammes par millilitre. Ajoutez un millilitre de la solution LN-521 de cinq microgrammes par millilitre pour enrober un puits d’une plaque à six puits, et basculez la plaque pour la répartir uniformément dans le puits. Ensuite, incubez les plaques dans un incubateur de culture cellulaire à 37 degrés Celsius à 5 % de CO2 pendant au moins deux heures pour une utilisation urgente. Apportez la plaque revêtue de l’incubateur à la hotte de culture tissulaire. Aspirez soigneusement la solution de revêtement LN-521 sans endommager la surface revêtue. Ajoutez ensuite immédiatement un millilitre de mTeSR préchauffé

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Developmental Biology numéro 121 les cellules hépatocytes-like laminines recombinantes les cellules souches pluripotentes humaines système de GMP-prêt l'échelle le dépistage des drogues la thérapie cellulaire

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