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DOI: 10.3791/55355-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines a method to generate human hepatocyte-like cells from pluripotent stem cells using recombinant laminin matrices. It provides a scalable and GMP-ready system for producing functional hepatocytes for liver research.
La méthode présentée ici décrit une solution évolutive et de bonnes pratiques de fabrication (BPF) système de différenciation -ready pour générer des cellules hépatocytes humains comme à partir de cellules souches pluripotentes. Il sert comme un système rentable et standardisée pour générer des cellules hépatocytes comme humains pour la recherche fondamentale et appliquée foie humain.
L’objectif global de ce protocole est de produire des cellules humaines de type hépatocytes à partir de cellules souches pluripotentes en utilisant des matrices de laminines recombinantes dans des conditions définies. Cette méthode permet à l’utilisateur de fabriquer sur mesure des hépatocytes humains fonctionnels pour étudier la biologie du foie dans la boîte. Le principal avantage de cette technique est que sa nature définie permet la production de masse d’hépatocytes avec un haut degré de reproductibilité expérimentale. Pour commencer l’expérience, décongelez 100 microgrammes par millilitre de laminine-521 recombinante, ou LN-521, à quatre degrés Celsius.Diluez le LN-521 décongelé dans du 1xDBPS glacé avec du magnésium calcique pour obtenir une solution de cinq microgrammes par millilitre. Ajoutez un millilitre de la solution LN-521 de cinq microgrammes par millilitre pour enrober un puits d’une plaque à six puits, et basculez la plaque pour la répartir uniformément dans le puits. Ensuite, incubez les plaques dans un incubateur de culture cellulaire à 37 degrés Celsius à 5 % de CO2 pendant au moins deux heures pour une utilisation urgente. Apportez la plaque revêtue de l’incubateur à la hotte de culture tissulaire. Aspirez soigneusement la solution de revêtement LN-521 sans endommager la surface revêtue. Ajoutez ensuite immédiatement un millilitre de mTeSR préchauffé
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