Préparation d’échantillons pour la visualisation tridimensionnelle basée sur la tomodensitométrie des vaisseaux murins des membres postérieurs

Il est possible de prendre des images CT des vaisseaux sanguins dans les membres inférieurs et les organes abdominaux en utilisant le protocole de pas. La méthode permet d’évaluer l’ensemble des vaisseaux sanguins de manière exhaustive. De plus, il est possible d’évaluer uniquement les artères ou en même temps, les artères et les veines.

Il est très important de prévenir les caillots sanguins, les fuites ou le sang bien, et d’éviter les bulles d’air. Avant l’opération, injecter 1 unité/gramme d’héparine dans le PBS dans la cavité intrapéritonéale de la souris. Après 30 minutes, faites une incision médiane dans le sternum de la souris euthanasiée et fixez le thorax ouvert avec des épingles.

Coupez l’aorte ascendante avant d’enlever le cœur, puis retirez le poumon pour exposer l’aorte descendante. Coupez l’aorte descendante en diagonale pour révéler la section transversale du vaisseau. Ensuite, insérez un cathéter de calibre 22 dans l’aorte descendante tout en exécutant le tampon de vasodilatation.

Épinglez la racine du cathéter et faites un nœud pour éviter les fuites dues au refoulement. Une fois cela fait, commencez la perfusion avec une solution vasodilatatrice chauffée à une pression fixe comprise entre 13 et 15 kilopascals. Après trois minutes, perfuser une solution de paraformaldéhyde à 4% dans du PBS pendant 3 min.

Arrêtez la perfusion et remplissez le tube d’extension relié au cathéter avec 2 mL de produit de contraste fraîchement préparé dilué dans le rapport 1:1 pour perfuser à une température fixée entre 13 et 15 kilopascals. Pour visualiser les artères, vérifiez l’ongle de la bouche pour confirmer que le produit de contraste a atteint l’artère. De la même manière, vérifiez la veine cave inférieure du diaphragme pour confirmer la circulation complète du produit de contraste et visualisez tous les vaisseaux.

Si la circulation du produit de contraste est terminée, fermez le robinet d’arrêt à trois voies et retirez le tube. Incuber l’échantillon pendant la nuit à 4 degrés Celsius. Dans ce protocole, tous les vaisseaux des membres inférieurs de la souris ont été visualisés.

Les résultats d’un modèle d’ischémie des membres postérieurs ont confirmé que l’artère fémorale non ligaturée était parallèle à la veine fémorale. En outre, l’interruption des produits de contraste a permis de visualiser facilement une artère fémorale ligaturée et le développement de vaisseaux collatéraux. Quelques récipients remplis du produit de contraste pouvaient être vus.

D’autre part, la perturbation des produits de contraste due au mélange de milieux non contretrastes ou à une perfusion insuffisante a également été remarquée. Il était impossible de voir les artères à la surface du corps par observation microscopique ou stérémicroscopique du produit de contraste, ce qui facilitait l’évaluation des défauts du système vasculaire. Il est très important d’éviter les bulles d’air lors de l’insertion du cathéter.

Étant donné que leurs organes abdominaux sont également détendus, il est possible de sortir des organes et de passer un scanner. En utilisant cette méthode, nous avons pu identifier un nouveau quart de saturation.