Analyse quantitative de Micro-CT de Aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte induite par la β-aminopropionitrile et Dissection

Cette méthode pourrait aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie vasculaire, telles que la détermination de l’impact de la taille des vaisseaux dans différents modèles animaux de maladies vasculaires. Le principal avantage de cette technique est que la micro-tomodensitométrie permet d’obtenir des images détaillées de grands et de petits vaisseaux, tant in vivo qu’ex vivo, qui peuvent être quantifiées avec précision. 24 heures avant l’analyse par tomodensitométrie, effectuer les interventions chirurgicales pour préparer l’échantillon à une profusion intracardiaque post-mortem.

Pour l’anesthésie, utilisez de l’isoflurane à 3 % et assurez-vous d’avoir un piégeur de charbon de bois en service. Ensuite, maintenez l’anesthésie avec deux à 2,5 pour cent d’isoflurane à partir d’un masque facial, également attaché à un piégeur avec un litre d’oxygène par minute. Avant de commencer la chirurgie, effectuez un pincement des orteils pour vérifier l’absence de réflexe de pédale.

Ensuite, mettez en place un champ opératoire avec des instruments et ainsi de suite. Ensuite, placez l’animal en position couchée dorsale et sécurisez les membres. Maintenant, à l’aide de ciseaux, faites une incision médiane à travers la peau et les tissus mous sur le sternum entre la symphyse pubienne et l’encoche sternale.

Ensuite, utilisez les ciseaux pour créer un trou dans le diaphragme au niveau du processus xiphoïde pour entrer dans la cavité thoracique. Ensuite, continuez à l’aide des ciseaux pour disséquer le diaphragme de la paroi thoracique ventrale de manière bilatérale. Coupez à travers les cartilages costaux pour séparer les côtes du sternum au bord sternal droit.

Maintenant, appliquez une pince hémostatique fine à l’extrémité du sternum près de l’apophyse xiphoïde et déplacez l’hémostat crânien de manière à ce qu’il soit positionné au-dessus de la tête de la souris. Ensuite, disséquez soigneusement toutes les attaches entre le cœur et la paroi thoracique. Limitez le nombre de vaisseaux endommagés pendant la préparation de l’animal, car cela entraînera une fuite de l’agent de contraste des vaisseaux sectionnés, ce qui modifiera le volume requis pour une obturation complète et introduira des artefacts dans l’imagerie finale.

Maintenant, connectez une aiguille de cathéter IV de calibre 27 à une seringue préchargée de 10 millilitres de PBS hépariné et remplissez tout le tube avec le tampon, en éliminant toutes les bulles d’air. L’élimination de toutes les bulles des lignes est essentielle. Ensuite, incisez immédiatement le ventricule droit, ou la veine cave inférieure, pour drainer la solution d’héparine et le sang.

Pour procéder, utilisez la canule pour perforer le ventricule gauche, stabilisé par la pince. Effectuez la profusion à une vitesse constante de deux millilitres par minute à l’aide d’un pousse-seringue. Il doit y avoir un blanchiment visible des organes.

En quelques minutes, la circulation de la veine devrait être exempte de sang. Ensuite, arrêtez la pompe et débranchez le tube du cathéter de la seringue, mais ne bougez pas l’aiguille du cathéter. Maintenant, séparez la solution d’agent de contraste en aliquotes de cinq millilitres, ajoutez l’agent de durcissement et mélangez bien.

Ensuite, chargez cinq millilitres du mélange dans une seringue de 10 millilitres et abondez l’animal avec l’agent de contraste à une dose constante de deux millilitres par minute. Continuez l’infusion au-delà du point où vous voyez l’agent de moulage sortir de l’animal. L’agent de contraste durcira en 20 minutes.

Une fois durcis, prélevez les organes d’intérêt et fixez-les dans du formol tamponné à 10 % neutre. Ensuite, si les échantillons ne sont pas utilisés pour le balayage micro-CT, fixez la carcasse entière. Sinon, placez la carcasse sur un plateau métallique et placez-la dans un réfrigérateur à quatre degrés Celsius pour qu’elle durcisse pendant la nuit.

Le lendemain, obtenez des images de tomodensitométrie à rayons X de chaque souris à l’aide d’un scanner micro-CT. Réglez les paramètres du scanner comme suit ; Une tension de crête du tube à rayons X de 55 kilovolts, un courant de 150 microampères, un facteur de grossissement du système de 2,19 et un facteur de regroupement des pixels de la caméra CCD de deux. Ce facteur de binning donnera une taille de pixel effective de 29 microns.

Ensuite, analysez les images pour identifier les anévrismes à l’aide d’une approche standardisée. Mesurez le diamètre du petit axe au point le plus large de trois emplacements ; de l’arc aortique, de l’aorte thoracique descendante et de l’aorte abdominale. Idéalement, deux observateurs, dont l’un est en aveugle, devraient analyser chaque image.

À l’aide de ces mesures, identifier les anévrismes comme des dilatations localisées ou diffuses des segments aortiques à des diamètres supérieurs à 50 % du diamètre de référence. 20 souris adultes mâles d’origine mixte et âgées de 20 à 30 semaines ont été analysées avec ou sans traitement BAPN. Chacun d’entre eux a été imprégné d’un caoutchouc de silicone radio-opaque à base de plomb.

Le diamètre moyen de l’aorte ascendante chez les souris traitées au BAPN était significativement plus grand que celui des témoins non traités du même âge. Les points de données des souris diagnostiquées comme ayant des anévrismes sont en rouge. En revanche, l’inhibition de la lysyl oxydase avec le BAPN n’a pas eu d’effet significatif sur la thoracique descendante moyenne, ni ce traitement n’a affecté les diamètres de l’aorte abdominale.

Un anévrisme a été défini comme étant 1,5 fois le diamètre moyen du groupe non traité. Le traitement a conduit à une augmentation significative des anévrismes selon cette définition. Les anévrismes chez les souris traitées par BAPN ont été identifiés exclusivement dans l’aorte, la majorité dans l’aorte thoracique.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la profusion du système vasculaire pour l’imagerie radiographique. Une fois maîtrisée, la profusion et l’analyse d’images peuvent se faire en deux heures si elle est bien réalisée. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler que les protocoles d’imagerie CT peuvent être ajustés avec l’aide du personnel radiologique pour optimiser l’acquisition d’images à des fins spécifiques d’expériences individuelles.