Name: Analyse quantitative de Micro-CT de Aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte induite par la β-aminopropionitrile et Dissection (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Apprenez une méthode de micro-CT quantitative pour analyser l'aortopathie chez la souris. Cette technique utilise un caoutchouc de silicone au plomb radiopaque pour perfuser le système vasculaire et quantifier précisément le diamètre aortique dans les modèles d'anévrisme.

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Nous tenons à remercier Mark Smith pour son aide avec l’imagerie radiographique. Ce travail est soutenu par le NIH T32 Grant for Interdisciplinary Research in Cardiovascular Disease (BOA), l’Association américaine de coeur (SMC) et la subvention de R35 NIH (DKS).

Les protocoles pour manutention des animaux ont été approuvés par le Comité de l’urbanisme de l’Université du Maryland, Baltimore (numéro de protocole animal 0116024) et d’institutionnels animalier et organisés selon les normes AAALAC International.
1. préparation des réactifs
<ol><li>
Héparine
	<ol>
<li>Diluer 250 µL de 1000 sulfate d’héparine U/mL dans 50 mL de phosphate buffered saline de faire une concentration finale de 5 U/mL.</li>
		<li>Réchauffer le hépariné (5 U/mL) phosphate buffered saline, qui remplacera le sang dans les vaisseaux dans un bain d’eau réglé à 37 ° C.</li>
		<li>Préparer la pompe sous pression contrôlée par le raccordement du tube nécessaire et vider de 2 seringues de 10 mL, 1 pour le tampon physiologique hépariné et 1 pour l’agent de contraste.</li>
		<li>Remplir le tube avec la solution saline tamponnée au phosphate hépariné chaude et enlever les bulles d’air du circuit de la pompe de pression.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Agent de contraste Remarque : Veuillez vous référer à la Table des matières pour les constituants de kit d’agent de contraste.<ol>
<li>Mélanger un composé pigmenté avec un diluant pour obtenir une teinture de 1:6 ratio diluant.</li>
		<li>Immédiatement avant utilisation (étape 2.3.12), ajouter 200 µL d’un adjuvant de salaison à chaque aliquote de 5 mL du composé pigmenté dilué et mélanger les bien (4 % en volume). NOTE : Le fabricant faisait que du temps de travail est de 40 min. Comme l’agent de contraste du silicone-caoutchouc commence à se polymériser 20 min après l’addition de l’agent de durcissement, il est important de préparer la solution juste avant l’infusion.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Eau potable BAPN
	<ol>
<li>Dissoudre le β-aminopropionitrile (BAPN) dans l’eau potable pour créer une concentration finale de 3 g/L (adapté de protocoles précédemment décrits dans la littérature)9,16,17.</li>
		<li>Administrer la BAPN contenant l’eau potable à un groupe de souris dès qu’ils sont de 4 semaines d’âge jusqu’au moment de la perfusion pour micro-CT.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. opération chirurgicale
<ol><li>
Préparation animaux
	<ol>
<li>Sevrer les souris à l’âge de 3 semaines, leur maintien sur un cycle foncé h de lumière/12 h 12 et nourrissez-les chow rongeur standard. Pour le groupe traité BAPN, administrer l’eau potable BAPN fraîchement préparée pendant 16 à 26 semaines ad libitum. Fournir que les animaux témoins avec standard de boire de l’eau ad libitum.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Technique anesthésique NOTE : 24h avant l’analyse de la CT, la procédure suivante est réalisée. Procédures chirurgicales sont adoptées pour préparer l’échantillon pour une perfusion intracardiaque post-mortem.<ol>
<li>Induire une anesthésie par un réservoir d’induction avec 100 % de O2 et 3 % isoflurane envoyées via un vaporisateur de précision. Après l’induction de l’anesthésie, cessez l’isoflurane et rincer la chambre avec O2. Maintenir l’anesthésie avec 2 à 2,5 % isoflurane et 1 L/min d’O2 via un cône de nez.</li>
		<li>Fixer aussi bien la chambre de l’induction et le masque facial à un piégeur de charbon de bois pour protéger le personnel pour l’adsorption de gaz résiduel. Assurer un plan anesthésique adéquat en démontrant qu’il n’y a pas de réponse à des stimuli nociceptifs (pincement de l’orteil).</li>
		<li>Préparer un champ opératoire consistant en un plateau chirurgical et les instruments chirurgicaux nécessaires.</li>
		<li>Transférer l’animal dans le champ opératoire et le positionner en décubitus dorsal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Technique opératoire
	<ol>
<li>À l’aide de ciseaux, faire une incision médiane à travers la peau et des tissus mous d’à mi-chemin entre la symphyse pubienne à l’encoche sternal, qui s’étend à travers la peau et des tissus mous sus-jacentes le sternum.</li>
		<li>À l’aide de ciseaux, de créer un trou dans le diaphragme à le processus xiphoïde pour entrer dans la cavité thoracique.</li>
		<li>Utiliser des ciseaux à disséquer la membrane de la paroi ventrale poitrine, sur le plan bilatéral.</li>
		<li>Couper à travers les cartilages pour séparer les nervures du sternum à la frontière droite sternal.</li>
		<li>Appliquer une fine pince hémostatique à la pointe du sternum (près le processus xiphoïde) et déplacer la pince hémostatique parotidien afin qu’il soit positionné au-dessus de la tête de la souris. Cela se rétracte le thymus et le sternum du cœur, exposant ainsi le cœur et les gros vaisseaux pour davantage de manipulation.</li>
		<li>Fortement disséquer toutes les pièces jointes entre le cœur et la paroi thoracique.</li>
		<li>Relier l’aiguille du cathéter IV 27-manomètre à une seringue pré-chargé avec 10 mL de solution saline tamponnée au phosphate hépariné (5 U/mL) et remplir tous les tuyaux avec le tampon afin de retirer les bulles d’air des tubes de la pompe de pression.</li>
		<li>Faire attention tout en préparant le fluide sous forme de bulles dans la ligne fluide peut gêner le remplissage des récipients plus petits. Limiter le nombre de navires qui a été endommagée lors de la préparation de l’animale, car cela provoquerait l’agent de contraste à fuir hors les vaisseaux sectionnés, changeant le volume requis pour un remplissage complet et en introduisant des artefacts à l’imagerie finale.</li>
		<li>Percez le ventricule gauche avec une aiguille de calibre 27 qui est stabilisée avec une pince à angle droit. Immédiatement, inciser le ventricule droit ou la veine cave inférieure pour vidanger la solution de l’héparine et le sang. Remarque : L’héparine est utilisée comme anticoagulant pour empêcher le sang de coagulation dans les vaisseaux après la mort de l’animal.</li>
		<li>Perfuse l’animal à un taux constant de 2 mL/minute à l’aide d’une pompe à seringue unique. Notez le blanchiment visibles des organes. Continuer la perfusion jusqu'à ce que le perfusat drainage de la circulation veineuse est exempt de sang (environ 5 à 6 mL). Arrêter la pompe.</li>
		<li>Débranchez la tubulure du cathéter IV de la seringue de 10 mL, en prenant soin de ne pas pour perturber la position de l’aiguille dans le ventricule gauche.</li>
		<li>Immédiatement après l’exsanguination complete, séparer la solution d’agent de contraste en aliquotes de 5 mL et ajouter l’agent de durcissement en ce moment (Voir l’étape 1.2). Mélangez-les bien. Élaborer des 5 mL du mélange agent de contraste dans une seringue de 10 mL et perfuse l’animal avec elle.</li>
		<li>Pour une obturation complète des vaisseaux (artères et veines), continuer la perfusion au-delà du point quand on voit sortir la solution veineuse. Recherchez les signes d’une perfusion réussie, y compris la visualisation d’un agent de casting dans les artères coronaires, les artères pulmonaires, intestin et vascularisation du foie.</li>
		<li>L’agent de contraste va guérir après environ 20 minutes à température ambiante. Après durcissement, récolter des organes individuels, au besoin et fixez-les dans 10 % de formol tamponné neutre. Difficulté des carcasses entières si les échantillons ne sont pas utilisés pour micro-tomodensitométrie le lendemain. Si les carcasses seront utilisés le jour suivant, placez-les sur un plateau en métal et placez-les au réfrigérateur à 4 ° C pour guérir du jour au lendemain.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. micro-tomodensitométrie et paramètres
Remarque : Les paramètres d’acquisition image spécifique sera dépendants de la machine en cours d’utilisation.
<ol><li>Acquérir des images de tomographie aux rayons x calculé de chaque souris le jour suivant la perfusion à l’aide d’un micro-CT scanner à l’aide d’une tension de tube à rayons x de 55 kVp, un courant de 150 μA, un facteur de grossissement de système de 2,19 et un CCD caméra pixel binning facteur 2. Cela donne une taille de pixel effectif de 29 µm.<ol>
<li>Mettre la carcasse de la souris en position couchée sur la table de micro-CT scanner et obtenir un scout analyse aux rayons x.</li>
		<li>Le détecteur de champ de vision de 57,4 mm (axial) x 37,1 mm (transversale) l’accent sur le torse à l’image de toute la longueur de l’aorte.</li>
		<li>Acquérir 180 projections d’image avec un incrément de rotation de 2 degrés et un temps par projection de 2800 ms.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Reconstruire les images à l’aide d’un algorithme Feldkamp modifié ; la taille du voxel reconstruit est 29 x 29 x 29 µm3 (épaisseur de tranche = 29 µm) à l’aide de la visualisation 3D Multimodal plug-in pour le logiciel utilisé ici.</li>
</ol>4. après traitement et le rendu
<ol><li>Convertir les données de CT au format DICOM en utilisant le logiciel approprié.</li>
	<li>Analyser les images pour déterminer si un anévrisme était présent. Mesurer le diamètre de l’axe mineur au point plus large de l’arc aortique, descendant de l’aorte thoracique, et aorte abdominale décrite précédemment18 (Figure 1). Remarque : Dans notre étude, les images ont été analysés par deux observateurs indépendants (un aveugle) utilisant un viewer DICOM pour déterminer si un anévrisme était présent. Le diamètre de l’axe mineur a été mesuré au point plus large de l’arc aortique, descendant l’aorte thoracique et l’aorte abdominale comme décrit précédemment19 (Figure 1). Dire non-anévrysmal segments artériels des souris non traités BAPN établi diamètres normale navire servant les valeurs témoins du même âge.</li>
	<li>Les anévrismes sont définis comme une dilatation localisée ou diffuse des segments aortiques de diamètres supérieurs à 50 % du diamètre de référence. Localisez ces basée sur les mesures ci-dessus.</li>
</ol>

<ol><li>Meszaros, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+clinicopathology+of+aortic+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22CHEST%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and clinicopathology of aortic dissection.</a> CHEST. 117 (5), 1271-1278 (2000).</li>
<li>Kochanek, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22National+Vital+Statistics+Reports%22%5BJournal%5D)">Deaths: final data for 2009.</a> National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1-116 (2011).</li>
<li>Li, J. S., Li, H. Y., Wang, L., Zhang, L., Jing, Z. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+beta-aminopropionitrile-induced+aortic+dissection+model+in+rats+by+different+administration+and+dosage%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Comparison of beta-aminopropionitrile-induced aortic dissection model in rats by different administration and dosage.</a> Vascular. 21 (5), 287-292 (2013).</li>
<li>Huffman, M. D., Curci, J. A., Moore, G., Kerns, D. B., Starcher, B. C., Thompson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+importance+of+connective+tissue+repair+during+the+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Functional importance of connective tissue repair during the development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Surgery. 128 (3), 429-438 (2000).</li>
<li>Wu, D., Shen, Y. H., Russel, L., Coselii, J. S., LeMaire, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+thoracic+aortic+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of thoracic aortic dissection.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 907-924 (2013).</li>
<li>Bruel, A., Ortoft, G., Oxlund, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+cross-links+in+collagen+is+associated+with+reduced+stiffness+of+the+aorta+in+young+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Inhibition of cross-links in collagen is associated with reduced stiffness of the aorta in young rats.</a> Atherosclerosis. 140 (1), 135-145 (1998).</li>
<li>Martinez-Revelles, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysyl+oxidase+induces+vascular+oxidative+stress+and+contributes+to+arterial+stiffness+and+abnormal+elastin+structure+in+hypertension%3A+Role+of+p38MAPK%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%26+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">Lysyl oxidase induces vascular oxidative stress and contributes to arterial stiffness and abnormal elastin structure in hypertension: Role of p38MAPK.</a> Antioxidants & Redox Signaling. 27 (7), 379-397 (2017).</li>
<li>Kumar, D., Trent, M. B., Boor, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allylamine+and+beta-aminopropionitrile+induced+aortic+medial+necrosis%3A+Mechanisms+of+synergism%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Allylamine and beta-aminopropionitrile induced aortic medial necrosis: Mechanisms of synergism.</a> Toxicology. 125 (2-3), 107-115 (1998).</li>
<li>Ren, W., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4916438/">β-Aminopropionitrile monofumarate induces thoracic aortic dissection in C57BL/6 mice.</a> Scientific Reports. 6, 28149(2016).</li>
<li>Kanematsu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically-induced+thoracic+and+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically-induced thoracic and abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Hypertension. 55 (5), 1267-1274 (2010).</li>
<li>Weyers, J. J., Carlson, D. D., Murry, C. E., Schwartz, S. M., Mahoney, W. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+Perfusion+and+Filling+of+Mouse+Coronary+Vasculature+as+Preparation+for+Micro+Computed+Tomography+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging.</a> J Vis Exp. (60), e3740(2012).</li>
<li>Cortell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicone+rubber+for+renal+tubular+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Silicone rubber for renal tubular injection.</a> Journal of Applied Physics. 26 (1), 158-159 (1969).</li>
<li>Bentley, M. D., Ortiz, M. C., Ritman, E. L., Romero, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+microcomputed+tomography+to+study+microvasculature+in+small+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Regulatory%2C+Integrative+and+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">The use of microcomputed tomography to study microvasculature in small rodents.</a> American Journal of Physiology - Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 282 (5), R1267-R1279 (2002).</li>
<li>Marxen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroCT+scanner+performance+and+considerations+for+vascular+specimen+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Physics%22%5BJournal%5D)">MicroCT scanner performance and considerations for vascular specimen imaging.</a> Medical Physics. 31 (2), 305-313 (2004).</li>
<li>Yang, J., Yu, L. X., Rennie, M. Y., Sled, J. G., Henkelman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+structural+and+hemodynamic+analysis+of+vascular+trees%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Comparative structural and hemodynamic analysis of vascular trees.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 298 (4), H1249-H1259 (2010).</li>
<li>Jia, L. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+stretch-induced+endoplasmic+reticulum+stress%2C+apoptosis%2C+and+inflammation+contribute+to+thoracic+aortic+aneurysm+and+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Mechanical stretch-induced endoplasmic reticulum stress, apoptosis, and inflammation contribute to thoracic aortic aneurysm and dissection.</a> The Journal of Pathology. 236 (3), 373-383 (2015).</li>
<li>Kurihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-derived+matrix+metalloproteinase+9+triggers+acute+aortic+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-derived matrix metalloproteinase 9 triggers acute aortic dissection.</a> Circulation. 126 (25), 3070-3080 (2012).</li>
<li>Dillavou, E. D., Buck, D. G., Muluk, S. C., Makaroun, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+versus+three-dimensional+CT+scan+for+aortic+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional versus three-dimensional CT scan for aortic measurement.</a> Journal of Endovascular Therapy. 10 (3), 531-538 (2003).</li>
<li>Muratoglu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LRP1+protects+the+vasculature+by+regulating+levels+of+connective+tissue+growth+factor+and+HtrA1%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">LRP1 protects the vasculature by regulating levels of connective tissue growth factor and HtrA1.</a> Arterioclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33, 2137-2146 (2013).</li>
<li>Badea, C. T., Dragova, M., Holdsworth, D. W., Johnson, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+small+animal+imaging+using+micro-CT+and+digital+subtraction+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo small animal imaging using micro-CT and digital subtraction angiography.</a> Phys Med Biol. 53 (19), R319-R350 (2008).</li>
<li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound-guided+left-ventricular+catheterization%3A+A+novel+method+of+whole+mouse+perfusion+for+microimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">Ultrasound-guided left-ventricular catheterization: A novel method of whole mouse perfusion for microimaging.</a> Laboratory Investigation. 84, 385-389 (2004).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Micro-CT imagerie peut être utilisé pour fournir des reconstructions très détaillées et en trois dimensions de la pathologie vasculaire dans des modèles animaux. Grâce à l’utilisation de médias de contraste intravasculaires, non amélioré des tissus mous, tels que la lumière d’un vaisseau sanguin, peuvent être différenciés de ceux qui mettent en valeur. Laser Doppler, microangiography, angiographie par résonance magnétique, histologie, microscopie confocale, ou deux photons peut être utilisée pour évaluer les lits vascula...

L’incidence de la dissection aortique est 3 cas pour 100 000 habitants par an1. Dissection aortique anévrismale maladies et représentent plus de 10 000 morts aux Etats-Unis chaque année, soit 1-2 % de tous les décès dans les pays occidentaux2. La dissection aortique est initiée par une déchirure dans la couche intimale du navire avec la propagation du sang à travers les couches de la paroi aortique sous pressions physiologiques. Pressions élevées impulsion patients sont associées à une incidence accrue de dissection et de complications. Contrainte de cisaillement mur accrue est associée liée l’expansion de la paroi aortique conduisant à un anévrisme formation3,4. Conséquences de la dissection aortique comprennent l’occlusion du débit sanguin à des organes éloignés, y compris le cerveau, reins, intestins et des membres, la formation d’anévrismes chroniques, rupture ou décès5,6,7.
À l’heure actuelle, les processus biochimiques et cellulaires impliqués dans l’initiation et la progression des anévrismes de l’aorte et les dissections sont encore mal compris. Reproductibles modèles animaux d’anévrisme de l’aorte et de dissection sont essentiels à la compréhension de leur physiopathologie. Β-aminopropionitrile (BAPN) est un inhibiteur de la lysyl oxydase, qui empêche la mise en réseau d’élastine et de collagène et s’est avéré sensiblement modifier la structure de la matrice extracellulaire de mur de navire et de son intégrité biomécanique6, 8. Les rongeurs traités avec BAPN ont été utilisés comme un modèle animal commun d’anévrisme de l’aorte et dissection9,10.
Les modalités d’imagerie vasculaires contribuent à identifier les pathologies vasculaires, confirmant la perméabilité vasculaire et évaluer la perfusion de l’organe. Récemment, micro-la tomodensitométrie (micro-CT) a été utilisée pour étudier la vascularisation de la souris et de même taille des animaux. Contrairement à l’OS, l’imagerie axiale des vaisseaux sanguins de la tomodensitométrie est limité, comme sang intraluminale est par nature relativement radiotransparente. Lorsqu’il est combiné avec les agents de contraste intravasculaire, cependant, micro-CT permet de reconstructions tridimensionnelles détaillées des animaux vasculatures pour l’étude de la pathologie vasculaire macro-anatomique11.
L’agent de contraste sélectionné (voir la Table des matières) est un caoutchouc de silicone radio-opaque qui contient le chromate de plomb et de sulfate de plomb. Lors de la perfusion en présence d’un catalyseur, il durcit rapidement pour former un moulage de la vascularisation avec des changements minimes dans l’architecture macro-anatomique des vaisseaux, rendant le système vasculaire très radio-opaque, par contraste avec les tissus de fond lorsque examiné par radiographie. Cet agent de contraste est avantageux car elle est facile à manipuler et permet d’éviter la dégradation des tissus et la perte du navire par suite de bris, souvent associé à la corrosion casting vasculaire. Comme il guérit avec un rétrécissement minimal12, vaisseaux de sang reste brevet et permettant une évaluation précise de la vascularisation-macro animale dans les expériences sans survie. Les travaux précédents a utilisé avec succès en caoutchouc silicone radio-opaque contraste dans une variété d’études sur les animaux. Plus précisément, l’applicabilité en visualisant les coronaires, glomérulaire, placentaire et circulations cérébrale11,12,13,14,15 a été démontrée. Dans cet article, nous détaillons la méthodologie d’une ponction ventriculaire gauche ouverte pour la perfusion intravasculaire de caoutchouc de silicone radio-opaque à base de plomb pour caractériser quantitativement BAPN-induite de la pathologie aortique dans un modèle murin de micro-CT.

<table><tbody><tr><td>Microfil</td><td>Flow Tech, Inc</td><td>MV-122</td><td>Nous utilisons du jaune, une couleur différente peut être commandée à volonté. Le kit comprend un composé MV, un diluant MV et un agent de durcissement MV.</td></tr><tr><td>Héparine (1000 U/mL)</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>25021-400-10</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Vet One, MWI</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>3-Aminopropionitrile fumarate salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3134</td><td></td></tr><tr><td>Pousse-seringue unique</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-831-200</td><td></td></tr><tr><td>calibre 27 veine du cuir chevelu set aiguille</td><td>Exel Int</td><td>26709</td><td>27G x 3/4 », tube 12 »</td></tr><tr><td>Inveon Micro-CT scanner</td><td>Siemens Medical Solutions</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osirix MD</td><td>Pimxmeo SARL</td><td></td><td>Version 8.0.2</td></tr><tr><td>Inveon Research Workplace</td><td>Siemens Medical Solutions</td><td></td><td>Version 4.2</td></tr><tr><td>Rongeur Chow</td><td>Harlan Teklad</td><td>2018sx</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse quantitative de micro-ct de aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte induite par la β-aminopropionitrile et dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Dissection et anévrisme de l’aorte est associées à une morbidité et mortalité dans la population et peut être souvent mortelles. Parmi les modèles animaux de maladies aortiques, l’imagerie in vivo du système vasculaire a été limitée. Ces dernières années, les micro-computerized tomography (micro-CT) a émergé comme une modalité privilégiée pour grands et petits navires d’imagerie tant in vivo et ex vivo. En conjonction avec la méthode de moulage vasculaire, nous avons utilisé avec succès micro-CT pour caractériser la fréquence et la distribution de pathologie aortique chez les souris C57/Bl6 β-aminopropionitrile-traitées. Les limites techniques de cette méthode incluent des variations dans la qualité de la perfusion introduite par manque de préparation animale, l’application de méthodes appropriées pour la quantification de taille de navire et les non-chances de survie de cette procédure. Cet article décrit une méthodologie pour la perfusion intravasculaire d’un caoutchouc de silicone radio-opaque à base de plomb pour la caractérisation quantitative d’aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme et dissection. En plus de visualiser la pathologie aortique, cette méthode peut être utilisée pour l’examen des autres lits vasculaires in vivo ou lits vasculaires enlevés post-mortem.

Afin d’évaluer le présent protocole, 20 souris adultes mâles, d’ascendance mixte comme décrit précédemment19 et de 20 à 30 semaines d’âge, avec ou sans traitement BAPN, ont été perfusés avec un caoutchouc de silicone radio-opaque à base de plomb (voir la Table des matières ) utilisant le protocole détaillé ci-dessus. Ils ont subi micro-TDM le jour suivant (Figure 1 et Figure 2</st...

Cet article décrit une méthodologie détaillée d’utiliser un caoutchouc de silicone de plomb radio-opaque pour perfuse la vascularisation murine pour la quantification de diamètre aortique dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte et de dissection.

Analyse quantitative de Micro-CT de Aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte induite par la β-aminopropionitrile et Dissection

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Cette méthode pourrait aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie vasculaire, telles que la détermination de l’impact de la taille des vaisseaux dans différents modèles animaux de maladies vasculaires. Le principal avantage de cette technique est que la micro-tomodensitométrie permet d’obtenir des images détaillées de grands et de petits vaisseaux, tant in vivo qu’ex vivo, qui peuvent être quantifiées avec précision. 24 heures avant l’analyse par tomodensitométrie, effectuer les interventions chirurgicales pour préparer l’échantillon à une profusion intracardiaque post-mortem.Pour l’anesthésie, utilisez de l’isoflurane à 3 % et assurez-vous d’avoir un piégeur de charbon de bois en service. Ensuite, maintenez l’anesthésie avec deux à 2,5 pour cent d’isoflurane à partir d’un masque facial, également attaché à un piégeur avec un litre d’oxygène par minute. Avant de commencer la chirurgie, effectuez un pincement des orteils pour vérifier l’absence de réflexe de pédale.Ensuite, mettez en place un champ opératoire avec des instruments et ainsi de suite. Ensuite, placez l’animal en position couchée dorsale et sécurisez les membres. Maintenant, à l’aide de ciseaux

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Nous décrivons des procédures pour quantifier et caractériser les lésions athéroscléreuses dans des modèles murins en utilisant une section de précision du sinus aortique et de l’aorte ascendante combinée à une analyse histochimique et immunohistochimique.

Analyse quantitative et caractérisation des lésions d&#39;athérosclérose dans le murin aortique Sinus

Implantation sous-cutanée de pompes osmotiques fournit une approche pratique pour la livraison prolongée et cohérente de composés. Cette approche a été largement utilisée pour étudier les deux anévrismes aortiques abdominaux et thoraciques chez la souris.

Sous-cutanée perfusion d&#39;angiotensine II utilisant osmotique Pompes Induit anévrismes de l&#39;aorte chez la souris

L’échographie est devenue une modalité commune pour déterminer les dimensions luminales des anévrismes de l’aorte thoraciques et abdominales chez les souris. Ce protocole décrit la procédure pour acquérir des images de l’échographie bidimensionnelle fiable et reproductible de l’aorte ascendante et de l’abdomen chez la souris.

Échographie de l’aorte thoracique et abdominale chez les souris pour déterminer les Dimensions de l’anévrisme

Les modèles murines de l'athérosclérose sont des outils utiles pour étudier les voies pathogènes au niveau moléculaire, mais exigent une quantification normalisée du développement des lésions. Ce protocole décrit une méthode optimisée pour déterminer la taille de lésion dans les vaisseaux artériels principaux comprenant la racine aortique, l'arc aortique, et l'artère brachiocéphalique.

Quantification de l'athérosclérose chez les souris

Ce manuscrit décrit un protocole détaillé pour l’utilisation de l’imagerie par ultrasons à haute fréquence pour mesurer le diamètre de la luminale, la vitesse de propagation des impulsions, la distensibilité et la souche radiale sur un modèle murin d’anévrisme aortique abdominal.

Mesure de la vitesse de propagation des impulsions, de la disxsibilité et de la souche dans un modèle abdominal de souris d’anévrisme aortique

Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale normalisée pour le modèle AAA induit par l’élastase par l’application directe d’élastase à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase

Ce protocole décrit un modèle murin d’anévrisme de l’aorte abdominale induit par le phosphate de calcium (AAA) pour étudier les caractéristiques pathologiques et les mécanismes moléculaires des AAA.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par le phosphate de calcium

Ce manuscrit présente un protocole permettant d’établir un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris à l’aide de chlorure de calcium et d’élastase, combinant les avantages des méthodes de modélisation précédentes. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les mécanismes physiopathologiques sous-jacents aux anévrismes de l’aorte abdominale.

Un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par infiltration péri-adventice de chlorure de calcium et d’élastase

Ce protocole décrit une approche chirurgicale méthodique pour modéliser les anévrismes avancés de l’aorte abdominale chez la souris en combinant l’application directe d’élastase sur l’aorte infrarénale et l’administration de ß-aminopropionitrile dans l’eau de boisson.

Modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral

Ce protocole fournit une procédure détaillée, étape par étape, pour l’induction de la dissection de l’aorte thoracique chez la souris. Plus précisément, il comprend le calcul précis des doses requises de β-aminopropionitrile et d’angiotensine II, la procédure de remplissage de la pompe osmotique et la technique d’implantation de la pompe osmotique.

Modèle murin de dissection aortique thoracique induite par perfusion orale de β-aminopropionitrile et d’angiotensine II par voie sous-cutanée

Ce protocole fournit une méthode reproductible et fiable pour induire des anévrismes de l’aorte abdominale (AAA) chez des souris C57BL/6 en utilisant la sensibilisation à l’elastine et l’application d’élastase périvasculaire, en tant que modèle AAA incorporant une composante immunosensibilisation.

Création fiable d’un modèle d’anévrisme aortique abdominal murien utilisant la sensibilisation à l’élastine et l’élastase périvasculaire

Apprenez une méthode de micro-CT quantitative pour analyser l'aortopathie chez la souris. Cette technique utilise un caoutchouc de silicone au plomb radiopaque pour perfuser le système vasculaire et quantifier précisément le diamètre aortique dans les modèles d'anévrisme.

Analyse quantitative de Micro-CT de Aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte induite par la β-aminopropionitrile et Dissection (Vidéo) | JoVE Journal

Analyse quantitative de Micro-CT de Aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte induite par la β-aminopropionitrile et Dissection

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