Composants essentiels des tests de transcription in vitro de Borreliella (Borrelia) burgdorferi

Le système de test de transcription in vitro pour Borreliella burgdorferi fournit un outil biochimique aux chercheurs pour étudier les mécanismes de régulation des gènes et les facteurs qui régissent l’activité enzymatique de l’ARN polymérase. Le système nous permet de tester l’impact des facteurs de transcription, des cofacteurs, des concentrations de sel et du pH sur la fonction de l’ARN polymérase de Borreliella burgdorferi, ce qui contribue à notre compréhension globale des mécanismes de régulation des gènes. Cette technique puissante peut également nous permettre de dépister des médicaments qui inhibent sélectivement l’ARN polymérase, ouvrant la porte au développement de nouveaux médicaments pour traiter la borréliose de Lyme.

Pour commencer, prélever la pastille cellulaire de deux à quatre litres de Borreliella burgdorferi RpoC-His10X cultivée en milieu BSKII dans un environnement microaérophile à une densité de deux à quatre fois 10 constante par millilitre. Ensemencez les cellules à 10 000 fois G pendant 30 minutes à quatre degrés Celsius dans des bouteilles centrifuges de 500 millilitres et jetez le surnageant. Ensuite, remettez les cellules en suspension dans 30 millilitres de tampon HN glacé, répétez l’étape de centrifugation et décanter le surnageant.