Induction de la mère Immune Activation chez la souris à mi-gestation scène avec Viral Mimic Poly (I: C)

L’objectif global de cette procédure est d’induire l’activation immunitaire maternelle, ou MIA, chez la souris par injection intrapéritonéale du poly mimique viral au stade embryonnaire médio-gestationnel. Cette méthode peut nous aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neuro-immunologie, telles que la façon dont le dysfonctionnement immunitaire peut entraîner des perturbations du développement du cerveau et du comportement. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est spécialement conçue pour les chercheurs intéressés à étudier l’AIM en tant que facteur de risque environnemental pour l’autisme et la schizophrénie.

En général, les individus qui ne connaissent pas cette méthode auront des difficultés, car de petites différences dans la méthode d’induction de l’AIM peuvent modifier considérablement la réponse en aval de la progéniture. Pour mettre en place un couple d’accouplement chronométré, commencez par loger cinq souris femelles par cage les unes à côté des autres dans des cages de souris standard pour synchroniser leurs cycles d’estra, et utilisez un coup de poing pour marquer chaque animal. De 0 à deux heures avant le début du cycle d’obscurité, logez les souris femelles à deux dans une cage, pesez et enregistrez le poids corporel de chaque souris, puis ajoutez une souris mâle par cage de deux souris femelles.

De 0 à quatre heures après la fin du cycle d’obscurité, soulevez doucement chaque souris femelle par la base de la queue, permettant à l’animal de saisir la grille de la cage avec les pattes avant, pour déterminer l’existence d’une masse blanchâtre dans l’ouverture vaginale. Si un bouchon n’est pas apparent, insérez doucement un embout de pipette de 200 microlitres dans l’ouverture vaginale. La résistance à la coagulation confirme la formation d’un bouchon.

Regroupez les souris bouchées dans une nouvelle cage, car la présence d’un bouchon vaginal confirme seulement que la copulation a eu lieu. Aux jours embryonnaires 10,5 à 11,5, soulevez chaque souris femelle bouchée par la base de la queue et recherchez un renflement dans l’abdomen, puis pesez les souris pour vérifier la grossesse et hébergez les animaux gestantes dans des cages individuelles propres. Pesez la poudre de poly(I :C) dans un cône de 50 millilitres.

Au 12.5e jour embryonnaire, ajoutez le volume approprié de chlorure de sodium à 0,9 % au volume correspondant de poly(I :C) dans un tube conique et fermez le bouchon. Roulez doucement la gouttelette saline sur la poudre jusqu’à ce que la solution soit claire. puis centrifuger le tube et transférer la solution poly(I :C) dans un tube de microcentrifugation.

À l’aide d’un spectrophotomètre, mesurer le rapport de 260 à 280 de la solution poly(I :C). Le rapport doit être compris entre 1,54 et 1,82, comme décrit par le fabricant. Ensuite, pesez la première souris et chargez une seringue d’insuline de 0,3 millilitre avec le volume calculé correspondant de solution poly(I :C).

Ensuite, en prenant la souris par la queue, placez-la sur le dessus de la cage et fixez-la par la croûte. Insérez maintenant l’aiguille, biseau vers le haut, au centre des deux mamelons supérieurs à environ 20 degrés par rapport à la souris, et administrez la solution poly(I :C). Remettez ensuite la souris dans la cage.

Une fois que toutes les souris ont été injectées, placez les cages dans une pièce calme et peu fréquentée pour éviter d’autres effets confondants, et pesez les souris le lendemain matin. Au moins trois jours avant le test comportemental, changez la litière de la cage de la progéniture adulte de huit à 12 semaines d’activation immunitaire maternelle ou MIA. 30 minutes avant le test, acclimatez les souris à la salle de test.

Pour un test d’inhibition pré-impulsion, immobilisez les souris dans des cylindres en plexiglas au-dessus d’un capteur piézoélectrique. Acclimatez la souris à la chambre d’inhibition de pré-impulsion pendant cinq minutes, avec six essais de 120 décibels de bruit blanc. Ensuite, exposez les souris à des mélanges aléatoires de sons, comme indiqué dans le tableau, et comparez les résultats à la réponse de sursaut de base, afin de déterminer l’inhibition pré-impulsion des animaux MIA.

Pour un test en plein champ, placez une souris dans le coin d’une arène carrée ouverte, avec une zone centrale définie de 17 x 17 centimètres, et enregistrez la trajectoire de la souris pendant 10 minutes, à l’aide d’une caméra montée au plafond. Quantifiez ensuite les entrées de la zone centrale et le temps passé dans la zone centrale. Pour un test d’enfouissement de marbre, acclimatez une souris à une cage d’essai, avec une litière de pin tremble comprimée de cinq centimètres de profondeur, nettoyez la litière pendant 10 minutes, puis remettez la souris dans la cage domestique et disposez doucement 20 billes de verre bleu marine de 1,5 centimètre de diamètre dans une grille de quatre par cinq dans la cage d’essai.

Remettez maintenant la souris dans la cage d’essai pendant 10 minutes, puis remettez l’animal dans la cage domestique et comptez le nombre de billes qui ont été enterrées pendant la période de test. L’injection de poly(I :C) au jour embryonnaire 12,5 peut provoquer une réponse inflammatoire aiguë dans l’axe placentaire fœtal maternel et précipiter un effet chronique sur le développement du cerveau et les phénotypes comportementaux. En effet, poly(I :C) induit une expression plus élevée du gène Il6 dans la rate maternelle, le placenta et le cerveau fœtal, trois heures après l’injection.

En général, par rapport à la progéniture adulte traitée au sérum physiologique, la progéniture adulte MIA présente moins d’entrées dans la zone centrale et une durée de la zone centrale plus courte dans l’essai en plein champ. Les animaux poly(I :C)injectés présentent également des comportements d’enfouissement plus fréquents dans le test d’enfouissement du marbre, et une inhibition pré-impulsionnelle plus faible. La perte de cellules de Purkinje dans le lobule sept du cervelet est une autre caractéristique de la progéniture MIA, avec moins de cellules Purkinje positives à la calbindine observées dans le lobule sept du cervelet de ces animaux, par rapport aux témoins injectés de solution saline.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de ne pas déranger les souris enceintes après l’induction de l’AIM. Par la suite, des facteurs supplémentaires tels que le stress postnatal ou l’infection peuvent être induits à étudier des interactions supplémentaires entre l’environnement et l’environnement.