Name: Profilage des O-glycanes de mucine perméthylée à l’aide de la spectrométrie de masse à temps de vol par désorption/ionisation laser assistée par matrice (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: Découvrez une méthode de spectrométrie de masse MALDI-TOF pour l'analyse des O-glycanes de mucine perméthylée. Cette technique permet un profilage rapide des glycanes impliqués dans les interactions hôte-microbe et leur rôle en santé et maladie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Bergstrom, K. S. B., Xia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucin-type+O-glycans+and+their+roles+in+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Mucin-type O-glycans and their roles in intestinal homeostasis.</a> Glycobiology. 23 (9), 1026-1037 (2013).</li>
<li>Leal, J., Smyth, H. D. C., Ghosh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physicochemical+properties+of+mucus+and+their+impact+on+transmucosal+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Physicochemical properties of mucus and their impact on transmucosal drug delivery.</a> Int J Pharm. 532 (1), 555-572 (2017).</li>
<li>Ambort, D., Johansson, M. E. V., Gustafsson, J. K., Ermund, A., Hansson, G. C. Perspectives on mucus properties and formation--lessons from the biochemical world. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAmbort%2C+D+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22">Cold Spring Harb Perspect Med</a>. 2 (11), a014159(2012).</li>
<li>Cone, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barrier+properties+of+mucus%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Barrier properties of mucus.</a> Adv Drug Deliv Rev. 61 (2), 75-85 (2009).</li>
<li>Kim, Y. S., Ho, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+goblet+cells+and+mucins+in+health+and+disease%3A+recent+insights+and+progress%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gastroenterol+Rep%22%5BJournal%5D)">Intestinal goblet cells and mucins in health and disease: recent insights and progress.</a> Curr Gastroenterol Rep. 12 (5), 319-330 (2010).</li>
<li>Bell, A., Severi, E., Owen, C. D., Latousakis, D., Juge, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+structural+basis+of+sialic+acid+utilization+by+gut+microbes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Biochemical and structural basis of sialic acid utilization by gut microbes.</a> J Biol Chem. 299 (3), 102989(2023).</li>
<li>Shuoker, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialidases+and+fucosidases+of+Akkermansia+muciniphila+are+crucial+for+growth+on+mucin+and+nutrient+sharing+with+mucus-associated+gut+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Sialidases and fucosidases of Akkermansia muciniphila are crucial for growth on mucin and nutrient sharing with mucus-associated gut bacteria.</a> Nat Commun. 14 (1), 1833(2023).</li>
<li>Tailford, L. E., Crost, E. H., Kavanaugh, D., Juge, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucin+glycan+foraging+in+the+human+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Mucin glycan foraging in the human gut microbiome.</a> Front Genet. 6, 81(2015).</li>
<li>Fukuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+mucin-type+O-glycans+in+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Roles of mucin-type O-glycans in cell adhesion.</a> Biochim Biophys Acta. 1573 (3), 394-405 (2002).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucin-type+O-glycans%3A+Barrier%2C+microbiota%2C+and+immune+anchors+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inflamm+Res%22%5BJournal%5D)">Mucin-type O-glycans: Barrier, microbiota, and immune anchors in inflammatory bowel disease.</a> J Inflamm Res. 14, 5939-5953 (2021).</li>
<li>Sheng, Y. H., Hasnain, S. Z., Florin, T. H. J., McGuckin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucins+in+inflammatory+bowel+diseases+and+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Mucins in inflammatory bowel diseases and colorectal cancer.</a> J Gastroenterol Hepatol. 27 (1), 28-38 (2012).</li>
<li>Juge, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+mucosa-associated+gut+microbiota+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Relationship between mucosa-associated gut microbiota and human diseases.</a> Biochem Soc Trans. 50 (5), 1225-1236 (2022).</li>
<li>Wilkinson, H., Saldova, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+methods+for+the+characterization+of+O-glycans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Current methods for the characterization of O-glycans.</a> J Proteome Res. 19 (10), 3890-3905 (2020).</li>
<li>Goso, Y., Kurihara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-TOF+MS%2FMS+analysis+of+permethylated+O-glycan+alditols+released+from+mucins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">MALDI-TOF MS/MS analysis of permethylated O-glycan alditols released from mucins.</a> Methods Mol Biol. 2763, 201-208 (2024).</li>
<li>Kameyama, A., Thet Tin, W. W., Toyoda, M., Sakaguchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+method+of+liberating+O-linked+glycans+from+glycoproteins+using+hydroxylamine+and+an+organic+superbase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+and+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">A practical method of liberating O-linked glycans from glycoproteins using hydroxylamine and an organic superbase.</a> Biochem and Biophys Res Commun. 513 (1), 186-192 (2019).</li>
<li>Vos, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+release+of+O-glycans+under+neutral+conditions+for+analysis+of+glycoconjugates+having+base-sensitive+substituents%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Oxidative release of O-glycans under neutral conditions for analysis of glycoconjugates having base-sensitive substituents.</a> Anal Chem. 95 (23), 8825-8833 (2023).</li>
<li>Furuki, K., Toyo'oka, T., Ban, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+sensitive+glycosylamine+labelling+of+O-glycans+using+non-reductive+%CE%B2-elimination%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly sensitive glycosylamine labelling of O-glycans using non-reductive β-elimination.</a> Anal Bioanal Chem. 409 (9), 2269-2283 (2017).</li>
<li>Miura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoblotting-assisted+O-glycomics%3A+ammonium+carbamate+allows+for+highly+efficient+o-glycan+release+from+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Analy+Chemi%22%5BJournal%5D)">Glycoblotting-assisted O-glycomics: ammonium carbamate allows for highly efficient o-glycan release from glycoproteins.</a> Analy Chemi. 82 (24), 10021-10029 (2010).</li>
<li>Annesley, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+suppression+in+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chemi%22%5BJournal%5D)">Ion suppression in mass spectrometry.</a> Clin Chemi. 49 (7), 1041-1044 (2003).</li>
<li>Harvey, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivatization+of+carbohydrates+for+analysis+by+chromatography%3B+electrophoresis+and+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr.+B%2C+Analyt+Technol+Biomed+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Derivatization of carbohydrates for analysis by chromatography; electrophoresis and mass spectrometry.</a> J Chromatogr. B, Analyt Technol Biomed Life Sci. 879 (17-18), 1196-1225 (2011).</li>
<li>Jang-Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycomic+profiling+of+cells+and+tissues+by+mass+spectrometry%3A+fingerprinting+and+sequencing+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Glycomic profiling of cells and tissues by mass spectrometry: fingerprinting and sequencing methodologies.</a> Glycobiology. 415, 59-86 (2006).</li>
<li>Zhou, S., Hu, Y., DeSantos-Garcia, J. L., Mechref, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+permethylated+N-glycans+through+multiple-reaction+monitoring+%28MRM%29+LC-MS%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Quantitation of permethylated N-glycans through multiple-reaction monitoring (MRM) LC-MS/MS.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 26 (4), 596-603 (2015).</li>
<li>Hu, Y., Borges, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spin+column-free+approach+to+sodium+hydroxide-based+glycan+permethylation%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">A spin column-free approach to sodium hydroxide-based glycan permethylation.</a> Analyst. 142 (15), 2748-2759 (2017).</li>
<li>Ceroni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GlycoWorkbench%3A+a+tool+for+the+computer-assisted+annotation+of+mass+spectra+of+glycans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">GlycoWorkbench: a tool for the computer-assisted annotation of mass spectra of glycans.</a> J Proteome Res. 7 (4), 1650-1659 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Pipettes pasteur en verre de 150 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>15202699</td><td>Consommables Référence dans le texte (si applicable) : pipette en verre</td></tr><tr><td>Tubes de 5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30122305</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Plaque d’extraction HLB à 96 puits</td><td>Fisher Scientific</td><td>16553290</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>acide acétique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>acétonitrile</td><td>Fisher Scientific</td><td>15624520</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>DMSO anhydre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.89569</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Méthanol anhydre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.89596</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Spectromètre de masse Autoflex</td><td>Bruker</td><td></td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Résine DOWEX 50w x8, forme H+, maillage 200-400</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>44519</td><td>Réactif Référence dans le texte (si applicable) : résine d’échange cationique</td></tr><tr><td>Chauffe-bloc sec</td><td>Subvention</td><td>QBD2</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Évaporateur/Concentrateur pour chauffages à blocs</td><td>Cole-Palmer</td><td>WZ-36610-99</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>flexAnalyse</td><td>Bruker</td><td></td><td>Logiciel, propriétaire & nbsp ;</td></tr><tr><td>flexControl</td><td>Bruker</td><td></td><td>Logiciel, propriétaire & nbsp ;</td></tr><tr><td>Genevac EZ-2</td><td>Biopharma</td><td>EZ-2</td><td>Équipement Référence dans le texte (si applicable) : évaporateur centrifuge</td></tr><tr><td>Fioles en verre avec des capuchons en PTFE assortis (4 mL)</td><td>Wheaton</td><td>DWKW224582-144EA</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Fioles en verre avec des capuchons en PTFE assortis (8 mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11587413</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>laine de verre</td><td>Supelco</td><td>1.04086</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Établi glyco-type</td><td>NA</td><td></td><td>Logiciel; téléchargeable depuis https://glycoworkbench.software.informer.com/</td></tr><tr><td>Cartouches HLB SPE</td><td>Supelco</td><td>57493-U</td><td>Consommable, en alternative à la plaque d’extraction HLB à 96 puits</td></tr><tr><td>Iodométhane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>289566</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Plaque cible MALDI</td><td>Bruker</td><td></td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Lyophilisateur ModulyoD</td><td>Thermo Fisher</td><td>ModulyoD-230</td><td>Équipement Référence dans le texte (si applicable) : lyophilisateur</td></tr><tr><td>NaBH4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>452882</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Pellets NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>567530</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Solution NaOH 50 %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>415413</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Processeur à pression positive-96</td><td>Eaux</td><td>186006961</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>super DHB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50862</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Acide trifluoroacétique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6508</td><td>Réactif</td></tr></tbody></table>

profilage des o-glycanes de mucine perméthylée à l’aide de la spectrométrie de masse à temps de vol par désorption/ionisation laser assistée par matrice

Profiling of Permethylated Mucin O-glycans Using Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry

Profilage des O-glycanes de mucine perméthylée à l’aide de la spectrométrie de masse à temps de vol par désorption/ionisation laser assistée par matrice

Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a powerful tool for the profiling of mucin glycans that ...

profiling-permethylated-mucin-o-glycans-using-matrix-assisted-laser

Research

Recherche

JoVE Journal

Biochemistry

Biochimie

Un moyen rapide est décrite afin de mieux connaître la structure des polysaccharides dans une matrice extracellulaire. La méthode tire parti de la spécificité de glycosylhydrolases et la sensibilité de la spectrométrie de masse permettant d'infimes quantités de matériaux à analyser. Cette technique est adaptable pour être utilisé directement sur le tissu lui-même.

Profilage de masse Oligo (OLIMP) de polysaccharides extracellulaires

Une méthode spécifique et sensible pour mieux comprendre le profil d'expression des antigènes de glycosphingolipides dans les organes et les cellules immunitaires est décrite. La méthode tire parti de la spectrométrie de masse à piège ionique permettant progressive fragmentation de molécules de glycosphingolipides pour l'analyse structurelle par rapport aux normes synthétisés chimiquement.

Spectrométrie de masse des antigènes glycosphingolipides

Afin d’explorer de manière exhaustive la diversité des glycanes liés à l’O, une nouvelle procédure d’élimination β réductrice en gel, combinée à la perméthylation et à une méthode de partage de phase rapide, est appliquée à l’analyse des glycanes liés à l’O directement libérés des glycoprotéines résolues par SDS-PAGE et pouvant faire l’objet d’une analyse glycomique ultérieure par spectrométrie de masse.

Amélioration dans le gel sulfo-réductrices glycomique β-élimination complète pour O-liés et par spectrométrie de masse

Ce protocole décrit les techniques spécifiques utilisées pour la caractérisation structurale de l’extrémité réductrice (RE) et de la (les) séquence(s) glycosylique(s) de la région interne des hétéroxylanes en marquant l’ER avec 2 aminobenzamides avant l’hydrolyse enzymatique (endoxylanase), puis en analysant les oligosaccharides résultants à l’aide de la spectrométrie de masse (MS) et de la résonance magnétique nucléaire (RMN).

Le séquençage de l&#39;usine mur hétéroxylanes Utilisation enzymatique, chimique (méthylation) et physiques (spectrométrie de masse, résonance magnétique nucléaire) Techniques

Cet article présente une forme améliorée d’une nouvelle technique de glycomique ascendante conçue pour analyser le profil de composition groupé des glycanes dans les biofluides non fractionnés par la décomposition chimique des glycanes en leurs monosaccharides spécifiques de liaison constitutive pour la détection par GC-MS. Les applications potentielles comprennent la détection précoce du cancer et d’autres troubles glycanes-affectifs.

Glycan Analyse Node: une approche bottom-up à Glycomics

Un protocole pour le temps d’ionisation laser assistée par matrice désorption de la caractérisation des polymères synthétiques de spectrométrie de masse (MALDI-TOF MS) est décrit notamment l’optimisation de la préparation de l’échantillon, spectrale acquisition et analyse des données de vol.

Caractérisation des polymères synthétiques via Matrix Assisted Laser Desorption ionisation temps de spectrométrie de masse (MALDI-TOF) de vol

La méthylation de l’arginine (R) est une modification post-traductionnelle généralisée régulant de multiples voies biologiques. La spectrométrie de masse est la meilleure technologie pour établir le profil global du R-méthyl-protéome, lorsqu’elle est couplée à des approches biochimiques pour l’enrichissement peptidique modifié. Le flux de travail conçu pour l’identification à haut niveau de confiance de la R-méthylation globale dans les cellules humaines est décrit ici.

Une approche protéomique basée sur la spectrométrie de masse pour l’analyse globale et à haut niveau de confiance de la R-méthylation des protéines

Le profilage des polymères par puces à ADN (MAPP) est une technique à haut débit pour l’analyse de la composition des glycanes dans les échantillons biologiques.

Profilage des polymères par puce à ADN (MAPP) pour l’analyse des glycanes à haut débit

Ce protocole détaille la méthode de glycoprotéomique guidée par la glycomique, une technologie omique intégrée qui offre des informations complètes sur le glycoprotéome hétérogène dans les microenvironnements tumoraux complexes nécessaires pour mieux comprendre la glycobiologie des cancers.

La glycoprotéomique guidée par Glycomics facilite le profilage complet du glycoprotéome dans les microenvironnements tumoraux complexes 

Un protocole pour le profilage métabolique des échantillons biologiques par électrophorèse capillaire et spectrométrie de masse en utilisant une conception d'interface de pointe poreuse introducteur est présenté.

Introducteur Electrophorèse Capillaire-Spectrométrie de masse pour Metabolic Profiling des échantillons biologiques

Découvrez une méthode de spectrométrie de masse MALDI-TOF pour l'analyse des O-glycanes de mucine perméthylée. Cette technique permet un profilage rapide des glycanes impliqués dans les interactions hôte-microbe et leur rôle en santé et maladie.

Profilage des O-glycanes de mucine perméthylée à l’aide de la spectrométrie de masse à temps de vol par désorption/ionisation laser assistée par matrice (Vidéo) | JoVE Journal

Profilage des O-glycanes de mucine perméthylée à l’aide de la spectrométrie de masse à temps de vol par désorption/ionisation laser assistée par matrice

Explorer plus de vidéos