Méthode QuEChERS-HPLC modifiée pour la détection d’hydrocarbures aromatiques polycycliques dans des embryons de poisson-zèbre exposés à des particules fines

Cette recherche vise à développer une méthode QuEChERS-HPLC modifiée pour quantifier les HAP dans les embryons de poisson-zèbre exposés à la MOE, en comblant ainsi le vide actuel causé par les défis techniques dans la mesure des niveaux internes de HAP en raison de la taille de la masse des embryons et de la complexité de leur matrice biologique. L’obtention de résultats fiables nécessite 200 embryons par groupe, ce qui représente un défi pratique. La combinaison de la HPLC avec un détecteur de fluorescence pourrait encore améliorer la sensibilité de la méthode. Par rapport à d’autres techniques, cette méthode QuEChERS-HPLC modifiée réduit considérablement le temps d’attente des échantillons et fournit une approche rapide et efficace pour analyser les niveaux de 16 HAP dans les embryons de poisson-zèbre exposés à la MOE.

[Narrateur] Pour commencer, préparez l’échantillon QuEChERS en sortant les boîtes contenant les embryons de l’incubateur 72 heures après la fécondation. Lavez les embryons trois fois à l’eau pure. Transférez les embryons dans des tubes de 1,5 millilitre et retirez l’excès d’eau. Placez les tubes dans un congélateur à moins 80 degrés Celsius pendant 30 minutes pour lyophiliser les embryons. Après lyophilisation, broyez les embryons à l’aide d’une tige de verre. Ajoutez 25 microlitres de 16 hydrocarbures aromatiques polycycliques, ou HAP, dans une solution étalon de mélange de DMSO pour tester la récupération de l’épi. Ensuite, ajoutez un millilitre de n-hexane et vortex pendant 30 secondes. Ultrasonisez le mélange à 35 degrés Celsius pendant 30 minutes. Maintenant, centrifugez l’échantillon à 7 000 g pendant cinq minutes. Transférez le surnageant dans un tube frais. Évaporez les surnageants collectés jusqu’à ce qu’ils soient secs sous un flux d’azote dans un bain d’eau à 35 degrés Celsius. Ajouter un millilitre d’acétonitrile et agiter pendant 30 secondes. Ajoutez 10 milligrammes d’amine primaire secondaire, 45 milligrammes de sulfate de magnésium et 15 milligrammes de garnissage en C18 à l’échantillon, puis agitez pendant 30 secondes. Centrifugez à 7 000 g pendant cinq minutes et transférez le surnageant dans un tube frais. Évaporez le surnageant à 0,5 millilitre sous azote et filtrez l’échantillon à travers une membrane microporeuse de 0,22 micromètre. Préparez une série de solutions de travail allant de un à 500 nanogrammes par millilitre pour l’étalon de mélange de 16 HAP à l’aide d’acétonitrile. Injectez 20 microlitres de la solution de l’échantillon dans un chromatographe liquide à l’aide d’une phase d’acétonitrile ou d’une phase hydromobile et suivez la procédure d’élution indiquée à l’écran. Tracez une courbe standard avec les concentrations massiques des solutions de travail standard sur l’axe des x et les zones de pics correspondantes sur l’axe des y, couvrant une plage allant de cinq nanogrammes par millilitre à 500 nanogrammes par millilitre. Injectez l’échantillon purifié dans le chromatographe liquide équipé d’un détecteur de fluorescence (FLD) et d’un détecteur à barrettes de diodes (DAD). Identifiez la présence de HAP en comparant les temps de rétention. Mesurez les zones de pics pour déterminer la concentration. Enfin, calculez les concentrations internes des 16 HAP en fonction des concentrations massiques mesurées. Les concentrations d’hydrocarbures aromatiques polycycliques, ou HAP, dans les embryons de poisson-zèbre 72 heures après la fécondation sont indiquées dans ce tableau. Six HAP ont été détectés avec succès dans des embryons de poisson-zèbre exposés à la matière organique extractible. En revanche, seulement deux HAP ont été identifiés dans les échantillons de contrôle du DSMO, à des niveaux significativement inférieurs à ceux des échantillons EOM.